缺氧促进5HRE和AFPp调控的NTR/CB1954自杀基因系统特异杀伤HepG2细胞

目的:研究5拷贝缺氧反应元件（5HRE)和甲胎蛋白启动子（AFPp)联合调控的自杀基因系统硝基还原酶/CB1954(nitroreductase/CB1954, NTR/CB1954)在缺氧环境下对人肝癌细胞株HepG2生长的抑制作用。方法： 利用5HRE作为增强子和AFPp构成联合调控元件,与自杀基因NTR构成真核表达载体。将载体转染AFP阳性的人肝癌细胞株HepG2及AFP阴性的人胃癌细胞株MKN45,利用G418筛选稳定转染的细胞。用RTPCR和Western blotting检测NTR的表达。将前体药物CB1954加入稳定表达NTR基因的细胞,用MTT法观察其毒性代谢产物4羟胺还原产物对肿瘤细胞生长的抑制作用。结果:成功筛选出稳定表达NTR的单克隆HepG2细胞和MKN45细胞。RTPCR和Western blotting证实单克隆HepG2细胞中NTR在mRNA和蛋白水平的表达,且缺氧环境中的表达量更高;单克隆MKN45细胞在常氧和缺氧环境中均无NTR表达。MTT法检测发现,缺氧环境下NTR基因能有效地活化前体药物CB1954,剂量依赖性地抑制NTR阳性的HepG2细胞的生长（P＜0.05）;但对MKN45细胞和野生型HepG2细胞无抑制作用。结论： 5HRE和AFPp双重调控的NTR/CB1954自杀基因系统在体外缺氧环境下可促进对人肝癌细胞株HepG2靶向性杀伤作用。     

5HRE联合PCEA调节TSST-1/CD80TM重组基因表达的逆转录病毒载体的构建

目的:构建5个拷贝的缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(PCEA)联合调控超抗原-中毒性休克综合症基因(TSST-1)与CD80分子跨膜序列(CD80TM)融合基因的逆转录病毒表达载体.方法:设计引物应用PCR法分别从人直肠癌基因组克隆PCEA,从野生株金黄色葡萄球菌基因组克隆TSST-1全长基因.利用重叠PCR法从pCMV-SPOR-T6-CD80载体克隆融合有中性linker的CD80TM基因片段.选择pLEGFP-N1为原始逆转录病毒表达载体,选取合适的酶切位点SphⅠ和BglⅡ,联合双酶切和PCR方法去除原始载体中巨细胞病毒即刻早期启动子(PCMV IE).将上述基因片段与去除了PCMV IE的pLEGFP-N1重组,构建携带5HRE、PCEA、TEST-1、linker-CD80TM基因的逆转录病毒表达载体.结果:成功克隆PCEA和TSST-1基因.构建了融合中性linker的CD80TM,测序与预期相符.将上述片段重组到载体pLEGFP-N1上,酶切鉴定和DNA序列分析无误.结论:成功构建了逆转录病毒表达载体pLEFGP-N1-5HRE-PCEA-TEST-1-linker-CD80TM,为下一步的体外实验奠定了基础.     

Pleiotrophin的表达及其在血清水平与结肠癌的关系

目的：探讨pleiotrophin（PTN）的表达及其血清水平与结肠癌的关系。 方法：应用real time-PCR、Western blot方法检测46例结直肠癌组织及其对应癌旁组织中PTN mRNA及蛋白表达水平;ELISA方法检测76例结直肠癌患者和58例健康体检者血液样本中的PTN表达水平。 结果：PTN mRNA在结直肠癌组织中表达量以及PTN蛋白的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义（均P<0.05）;无论是PTN mRNA表达水平还是蛋白阳性率均与患者年龄、肿瘤组织类型无关（均P>0.05）,而与肿瘤的分化程度呈负向关系、与TNM分期呈正向关系（均P<0.05）。结直肠癌患者血清PTN水平明显高于正常人群（P<0.05）。 结论：PTN在结直肠癌组织中表达增高;血清PTN水平检测可作为诊断结直肠癌参考指标之一。

     

药物洗脱支架与药物涂层球囊治疗股腘动脉病变进展

外周动脉疾病(PAD)可累及全身动脉,以下肢动脉较多见。血管内治疗(EVT)是治疗下肢PAD的常用技术之一,主要包括药物洗脱支架(DES)及药物涂层球囊(DCB)。与传统技术相比,DES及DCB治疗PAD后血管通畅率更高、再狭窄率更低,但目前相关研究尚少,且缺乏长期随访结果,二者间如何选择仍需探讨。本文对DES、DCB治疗股腘动脉病变应用进展进行综述。     

腹腔镜下应用3DMax补片行腹股沟疝修补术(附18例报道)

目的评价3DMax补片在腹腔镜下全腹膜外修补术(totally extraperitoneal,TEP)中修补腹股沟疝的价值。方法回顾性分析我院2009年2～6月期间腹腔镜下应用3DMax补片对18例腹股沟疝患者行TEP的临床资料,分析其手术时间、住院时间、复发和并发症发生情况。结果 18例患者中Ⅰ型疝3例,Ⅱ型疝4例,Ⅲ型疝9例,Ⅳ型疝2例;斜疝11例,直疝6例,股疝1例。成功完成腹腔镜下TEP17例。1例因疝内容物为末端回肠,与疝囊粘连并局部狭窄梗阻,中转开放手术切除部分回肠。手术时间40～95min,平均65.4min.术后均未使用镇痛剂,术后住院时间2～7d,平均住院5.5d.术后发生阴囊血清肿1例,经穿刺排液后愈合良好。随访1～6个月,无复发病例。结论腹腔镜下TEP具有创伤小、恢复快、复发率低等优点,采用预先成型的3DMax补片使手术操作更加简便。     

炎症反应因子在急性下肢深静脉血栓形成中的作用

目的探讨炎症反应因子在急性下肢深静脉血栓形成(DVT)中的作用,及其与急性下肢DVT的关系。方法检测西安交通大学医学院第一附属医院普外科收治的16例急性下肢DVT患者治疗前后及16名正常对照全血白细胞、中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞数量和血清C-反应蛋白(CRP)、纤维蛋白原水平。结果治疗前DVD组的白细胞、中性粒细胞、单核细胞数量、血清CRP和纤维蛋白原浓度均显著高于对照组(P<0.001),而淋巴细胞的数量显著低于对照组(P<0.05)。治疗后DVD组白细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞数量和血清纤维蛋白原浓度与对照组无显著性差异(P>0.05),CRP的水平显著低于治疗前而稍高于对照组(0.01相似文献   

重组质粒pIRES2-EGFP/CCK的构建及其在体内外的表达

目的构建猪源性胆囊收缩素(CCK)基因真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK,并在哺乳动物细胞COS-7中和仓鼠体内进行表达。方法从含CCK的中介载体pMD18-T/CCK中,以限制性内切酶方法获取目的片段,将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,以脂质体法转染COS-7细胞,利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,同时采用肌肉注射法免疫仓鼠,了解重组质粒pIRES2-EGFP/CCK的体内表达。结果构建了猪CCK基因的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK,用其转染COS-7细胞后24h、48h、72h均可检测到绿色荧光蛋白的表达,其中72h组荧光强度达到最强。用pIRES2-EGFP/CCK免疫仓鼠后,第4d注射部位可以检测到绿色荧光蛋白的表达,第14d荧光强度明显增强,第42d荧光强度进一步增强,正常对照组始终未检测到绿色荧光蛋白的表达。结论成功构建了猪源性CCK基因真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK,并成功地在哺乳动物细胞COS-7中和仓鼠体内进行了表达,为仓鼠胰腺癌的交叉免疫治疗奠定了基础。     

下肢慢性静脉疾病CEAP分级和治疗对策

目的:探讨对肢体慢性静脉疾病(CVD)的临床(C)-病因(E)-解剖(A)-病理生理(P)的分级,力求使CVD发展的多变性和阶段性通过CEAP分级,采用具体的治疗方法和综合干预措施。方法:根据临床表现和影像学检查,依其临床症状和体征,将收治的下肢慢性静脉疾病的443条肢体按照CEAP分级,以临床(C)为主要标准,参考病因(E),选用2~3种方式进行综合治疗。结果:443条肢体按CEAP分级综合治疗,3年复发率为21.6%,与传统的未分级单纯行手术治疗患者(425条肢体)3年复发率53.2%相比,复发率减少31.6%。结论:CEAP分级,大致性描述出了一个多变性和阶段性的CVD发展过程,应用CEAP分级提高了对CVD的认识,避免了治疗的盲目性,减少了手术的复发率。     

血管腔内微波治疗下肢慢性静脉功能不全术后近期并发症临床分析

目的:探讨血管腔内微波治疗下肢慢性静脉功能不全术后并发症发生的原因及防治方法。方法:对48例（56条肢体）下肢慢性静脉功能不全患者，按CEAP分级的临床分级，C2 56条肢体，C3 30条肢体，C4 26条肢体，C5 8条肢体，C6 7条肢体。分别采用单纯血管腔内微波治疗、血管腔内微波治疗联合交通支静脉结扎术、血管腔内微波治疗联合股浅静脉瓣膜包窄术；所有患者均行大隐静脉高位结扎。术后48例患者均随访6个月。结果:术后所有患者均随访6个月。所有患肢临床症状改善，曲张静脉团块消失，肿胀明显缓解，足靴区色素沉着变浅消失，溃疡愈合。术后并发症：皮下淤斑30条肢体（53.57%），皮肤灼伤7条肢体（12.5%），皮肤麻木5条肢体（8.93%），皮下条索/硬结50条肢体（89.29%）。淋巴渗漏1条肢体（1.79%），局部残留/复发4条肢体（7.14%）。无切口感染、深静脉血栓及大隐静脉主干再通发生。结论:血管腔内微波治疗下肢静脉功能不全疗效确切，多数并发症在术后3个月左右自行消失缓解，根据CEAP分级个性化处理，规范手术操作及围手术期处理可有效防止、减少术后并发症的发生。     

缺氧下调结肠癌细胞株CDX2表达的研究

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和基因系尾型同源盒基因2(CDX2)在人结肠癌细胞株SW480和LS174T不同缺氧时间的表达及其可能的作用机制。方法(1)MTT方法检测在不同CoCl2浓度(100,150,200μmol/L)下和不同时点(24,36,48 h)时对SW480和LS174T细胞活力以及增殖的影响,筛选适宜的CoCl2作用浓度。(2)在细胞化学缺氧培养相应时段,采用半定量RT-PCR技术检测HIF-1α,Snail和CDX2的mRNA的表达变化;同时采用Western blotting技术检测CDX2的蛋白表达。结果结肠癌细胞株在不同浓度CoCl2环境下随缺氧时间的延长,细胞活力明显受到抑制。在低浓度CoCl2(100μmol/L)干预下,随着缺氧时间的延长,HIF-1α和Snail mRNA表达逐渐上升,缺氧24 h时达到高峰,CDX2 mRNA及蛋白表达水平逐渐下降。结论缺氧诱导HIF-1α过表达可通过下调CDX2而加速结直肠癌的进展。