ENO1 mAb联合谷氨酰胺酶抑制剂CB-839抗宫颈癌细胞作用

目的 探究烯醇化酶1 (ENO1)单克隆抗体（mAb）纳米颗粒联合谷氨酰胺酶抑制剂CB-839对宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移的协同作用。方法 利用癌症基因组图谱分析正常宫颈组织和宫颈癌组织中糖酵解途径和谷氨酰胺代谢关键酶的表达差异。采用四甲基偶氮唑盐法观察叶酸修饰的聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）-ENO1 mAb纳米颗粒和CB-839联合后对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。通过划痕损伤修复实验观察PLGA-ENO1 mAb和CB-839对宫颈癌HeLa迁移能力的影响;通过代谢试剂盒测定方法检测抑制糖酵解途径和谷氨酰胺代谢对HeLa细胞胞内还原型谷胱甘肽、谷氨酸的影响。结果 宫颈癌HeLa细胞存在谷氨酰胺依赖现象,并呈时间和剂量依赖性。与对照组比较,谷氨酰胺酶抑制剂CB-839抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖（P <0.05）,并具有剂量效应;PLGA-ENO1 mAb和CB-839联合应用,联合指数CI <1,表现出协同作用;CB-839未表现出抑制HeLa细胞迁移作用（P> 0.05）,而和PLGA-ENO1 mAb联合应用后,可显著抑制迁移能力（P<0.01）;两药...     

人ENO1(Enolase-α)基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备

目的:构建人ENO1(human Enolase-α)基因的原核表达质粒,诱导重组蛋白的表达,利用纯化后的蛋白制备具有活性的ENO1多克隆抗体.方法:用PCR方法从胃癌MKN45细胞全基因组中扩增出目的基因ENO1,将目的基因和原核表达载体pET30a(+)分别双酶切,回收酶切产物并用T4连接酶连接,获得重组质粒pET30a(+)-ENO1.将重组质粒转入大肠埃希菌菌株BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化,利用纯化的ENO1活性蛋白作为抗原免疫家兔,制备抗血清多克隆抗体,并用Western blot检测其特异性.结果:目的基因与原核表达载体经双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果表明重组人ENO1基因序列与NCBI(NM_001428.3)公布序列一致.经SDS-PAGE分析,结果显示重组蛋白的分子量约在47kDa,条带单一,无杂带出现,主要以可溶性形式存在.Western blot证实多克隆抗体制备成功.结论:成功表达、纯化了ENO1融合蛋白,制备了具有高特异性的多克隆抗体,为进一步肿瘤疫苗的研制和肿瘤标志物快速诊断的研究奠定基础.     

卡介苗介导的训练免疫机制与作用

卡介苗(BCG)接种的目的是预防结核分枝杆菌感染,但研究发现BCG可以激活天然免疫,引起髓样细胞表观遗传重编程和代谢改变,形成天然免疫记忆.当髓系细胞再次受到病原体刺激后,诱导产生更强的天然免疫反应,增强了宿主的非特异性防御能力.天然免疫记忆又称为训练免疫,BCG诱导训练免疫的研究近年来受到重视,对于疫苗设计有一定的借...     

ABCG2与CD133在宫颈癌的表达及意义

目的:探讨ABCG2及CD133蛋白在宫颈癌的表达及临床意义。方法:用免疫组化SP法检测92例宫颈癌、40例宫颈上皮内瘤变(CIN)和30例正常宫颈组织中AB-CG2及CD133蛋白的表达。结果:ABCG2在宫颈癌、CIN和正常宫颈组织的阳性表达率分别为69.6%、42.5%、23.3%,CD133为57.6%、37.5%、23.3%,两者在宫颈癌的表达均高于CIN及正常组织,差异均有统计学意义(P0.05);两者表达与宫颈癌患者年龄、肿瘤大小、临床分期无相关性(P0.05),而在不同分化组间表达的差异有统计学意义(P0.05)。结论:ABCG2和CD133蛋白异常表达与宫颈癌的发生、发展有关,二者联合检测可作为评估宫颈癌恶性程度、指导治疗的重要参考指标。     

人PKM2基因克隆、表达及纯化的研究

目的:构建人PKM2(M2-type pyruvate kinase)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达,镍离子柱亲和层析法纯化融合蛋白.方法:用PCR方法从宫颈癌Hela细胞全基因组中扩增出目的基因PKM2,通过克隆载体pET30a(+)构建质粒载体pET30a(+)-PKM2.经双酶切和DNA测序证实正确后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化.结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果和报道一致.经SDS-PAGE分析,纯化后的蛋白约在58 KDa位,条带单一,无杂带出现.结论:成功表达纯化了PKM2融合蛋白,为肿瘤疫苗研制和肿瘤标志物快速诊断的研究奠定基础.