GL1-EGFP融合蛋白的原核表达及对神经胶质瘤细胞的靶向作用分析

[目的]构建、纯化神经胶质瘤靶向肽GL1和EGFP融合蛋白表达载体(GL1-EGFP),并且分析其靶向作用。[方法]通过PCR扩增目的基因GL1-EGFP,并连接到pET-22b(+)载体上构建原核表达质粒,重组体转到感受态大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达,重组蛋白利用Ni2+-树脂柱亲和层析纯化,利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达纯化蛋白,激光共聚焦显微镜检测GL1-EGFP对神经胶质瘤细胞的靶向作用。[结果]构建了GL1-EGFP原核表达载体,在IPTG诱导下获得了高效表达。Western blotting分析证明纯化蛋白为目的蛋白GL1-EGFP。体外细胞实验表明GL1-EGFP融合蛋白对神经胶质瘤细胞U87△EGFR具有靶向作用。[结论]GL1-EGFP靶向融合蛋白对恶性神经胶质瘤细胞有明显的靶向定位作用。     

反义TIMP-1基因转染对肺纤维化大鼠肺组织TIMP-1和Ⅰ型胶原表达的影响

[目的]观察反义金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因转染对博来霉素(BLM)诱导的大鼠肺纤维化肺组织中TIMP-1和Ⅰ型胶原的影响。[方法]SD大鼠随机分为T1组(正义TIMP-1转染组)、T2组(反义TIMP-1转染组)、T3组(空载体转染组)以及C组(正常对照组)、C1组(肺纤维化组)。C组不给予任何干预措施;T1、T2、T3组在给予BLM后第1、3、7、14、28、60、90天分别将含正、反义人TIMP-1cDNA逆转录病毒载体、空载体导入大鼠肺内,转染后28 d处死大鼠;C1组仅给予BLM,时间与转染组相同。HE染色、Masson染色法观察肺组织病理形态学变化,RT-PCR和免疫组织化学检测TIMP-1和Ⅰ型胶原的表达。[结果]给予BLM后第1、3天T2组与同一时间点的C1组及T3组比较纤维化程度减轻,TIMP-1和Ⅰ型胶原基因和蛋白的表达下降(P<0.05);而T1组纤维化程度加重,TIMP-1和Ⅰ型胶原基因和蛋白的表达增高。给予BLM后第7、14、28、60、90天T1和T2组与同一时间点的C1组及T3组比较均无明显不同。[结论]给予BLM后第1、3天进行反义TIMP-1基因转染可以在一定程度上抑制肺纤维化的发生和发展。     

2,5-己二酮致大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的研究

目的：研究2,5-己二酮（2,5-HD）对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的凋亡作用及其机制。方法从大鼠骨髓分离、提取和培养大鼠BMSCs ,经形态学观察,流式检测特异细胞标记物表达,成骨、成脂细胞诱导分化,确认其为BMSCs。将BMSCs暴露于10 mmol/L,20 mmol/L,40 mmol/L 2,5-HD,培养24 h,并设立空白对照组。用MTT法观察细胞存活率;用HE染色法观察染毒后细胞形态变化;用Hoechst染色法检测细胞凋亡;用Western Blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果2,5-HD染毒组BMSCs存活率显著低于对照组（P＜0．05）。 HE染色观察显示,染毒BMSCs胞体变小,胞核固缩,突起变短。 Hoechst 染色观察结果表明,染毒BMSCs可见核的固缩及新月形等凋亡特征的核形态变化。 Western Blot结果表明,与对照组比较,染毒组BMSCs的Bax蛋白水平显著升高（P＜0．05）,Bcl-2蛋白水平显著下降（P＜0．05）。结论2,5-HD能诱导大鼠BMSCs凋亡,且其凋亡诱导机制可能与Bax/Bcl-2蛋白的表达紊乱有关。     

间充质干细胞移植对正己烷致周围神经病大鼠神经电生理的影响

目的：观察大鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）移植对正己烷致周围神经病大鼠神经电生理的影响。方法 SD大鼠54只随机分为对照组、低剂量染毒组和高剂量染毒组,低剂量组和高剂量组均用2,5-己二酮（2,5-HD）,分别以200 mg/kg和400 mg/kg的剂量进行腹腔注射染毒,对照组用生理盐水进行腹腔注射。染毒6周后,以上各组均随机分为2组,分别任取1组大鼠尾静脉移植MSCs,每只大鼠移植1×106个MSCs。染毒及MSCs移植过程中,观察大鼠的一般状态和步态变化,并用肌电图与诱发电位仪记录大鼠尾神经传导潜伏期和神经传导速度。结果大鼠染毒6周时,低、高剂量组的步态评分分别升高至2.87±0.28和3.78±0.24、神经传导潜伏期分别延长为（5.15±0.29） ms和（6.75±0.35） ms、神经传导速度分别减低为（13.20±0.51） m/s和（8.00±0.43）m/s。 MSCs移植后,随移植时间的延长,模型大鼠步态评分下降,神经传导潜伏期和神经传导速度逐渐恢复。移植5周后,低、高剂量组的神经传导潜伏期分别恢复21.63％和16.08％,神经传导速度分别提高13.38％和38.71％,与未移植MSCs的对照组相比,差异有显著性意义（P＜0.05）。结论 MSCs移植能明显改善正己烷致周围神经病大鼠的行为学和神经电生理。     

血清可溶性髓细胞表达触发受体-1对社区获得性肺炎的诊断意义

目的评价血清可溶性髓细胞表达触发受体-1(sTREM-1)对社区获得性肺炎(CAP)的诊断意义。方法选择CAP患者60例为肺炎组,24例健康成人为对照组。根据美国感染病学会/美国胸科协会重症CAP标准、CURB-65评分、PSI评分对病情严重程度评估。入院24 h内抽取肘静脉血,检测血清sTREM-1、CRP、Fbg及D-二聚体含量。结果肺炎组患者血清sTREM-1、CRP、Fbg及D-二聚体水平均高于对照组(P<0.05)。重度肺炎组血清sTREM-1水平为(120.21±39.24)ng/L,轻中度肺炎组血清sTREM-1水平为(54.48±9.87)ng/L。重度肺炎组血清Fbg、sTREM-1水平与轻中度肺炎组比较差异有显著性意义(P<0.05),两组血清CRP、D-二聚体水平比较差异无显著性意义(P>0.05)。中高危肺炎组血清sTREM-1水平为(126.06±21.23)ng/L,低危肺炎组为(39.45±8.08)ng/L。中高危肺炎组血清Fbg、sTREM-1水平高于低危肺炎组,差异有显著性意义(P<0.05),两组血清CRP、D-二聚体水平比较差异无显著性意义(P>0.05)。在重症肺炎组血清sTREM-1水平为(122.34±24.14)ng/L,高于非重症肺炎组(44.74±9.22)ng/L。重症肺炎组血清Fbg、D-二聚体水平高于非重症肺炎组(P<0.05),两组血清CRP水平比较差异无显著性意义(P>0.05)。应用ROC曲线研究各生物指标诊断价值,结果显示sTREM-1的诊断效能最强(AUC为0.847),其次为CRP(AUC为0.753)、Fbg(AUC为0.675)及D-二聚体(AUC为0.668)。当血清sTREM-1水平>15.79 ng/L时,诊断肺炎的敏感度为63.30%,特异度为83.30%,准确率为71.40%。结论血清sTREM-1水平在CAP患者中明显升高,对CAP的诊断提供重要参考,其水平高低能够反映CAP的严重程度及预后情况。     

飞行时间质谱仪监测不同聚合温度下义齿基托树脂中甲基丙烯酸甲酯释放量的研究

目的探讨使用飞行时间质谱仪监测不同聚合温度下自凝树脂反应时释放的甲基丙烯酸甲酯(methylmethacrylate,MMA)的量,分析MMA释放量的变化趋势,研究聚合温度对MMA释放量的影响。方法按生产厂家要求的比例把自凝仿生义齿基托树脂粉2 g和液1 g调拌40 s后,立即用飞行时间质谱仪连续监测MMA释放量,待释放量的变化稳定后停止监测。室温20℃和40℃、60℃水浴下各监测5个样本,每分钟记录1次监测结果,并加以比较。结果不同聚合温度下自凝树脂反应时释放的MMA的量的变化趋势相像:在反应初期20℃、40℃和60℃时MMA释放量低,变化不明显,而分别在11 min、(46.2±3.5)mg/L;6 min、(6.4±0.5)mg/L;2 min、(7.2±1.2)mg/L时开始快速升高,之后分别在13 min、(225.4±23.1)mg/L;7 min、(57.7±5.4)mg/L;4 min、(38.1±4.9)mg/L时到达最高,然后由快速下降到缓慢下降并分别在23 min、(9.4±1.6)mg/L;12 min、(1.3±0.1)mg/L;6min、(1.3±0.2)mg/L时趋于稳定。40℃与20℃、60℃与20℃相比MMA释放量小,并且到达稳定期的时间短(P<0.05),40℃与60℃相比MMA的释放量无明显差异(P>0.05)。结论把聚合温度从室温20℃升高到40℃或60℃时可以降低自凝树脂反应过程中释放的MMA的量,但从40℃继续升高到60℃时MMA的释放量无显著变化。     

合用氟喹诺酮类药物对金黄色葡萄球菌突变选择窗的影响

[目的]探讨FQ药物联合用药对金黄色葡萄球菌突变选择窗(MSW)的影响.[方法]采用琼脂二倍稀释法测定3种药物对38株临床分离金黄色葡萄球菌株和金黄色葡萄球菌质控菌株ATCC25923的最低抑菌浓度(MIC)以及两种FQ的防突变浓度(MPC),计算FQ单药和联合用药后的MPC50、MPC90、MPC/MIC[选择指数(...     

基于Meta分析的血栓通注射剂治疗急性脑梗死临床评价研究

摘 要 目的：科学评价血栓通注射剂治疗急性脑梗死(ACI)的临床疗效及安全性。方法：计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI)、中文科技期刊全文数据库(VIP)、中国生物医学文献数据库(SinoMed)、万方数据库、Embase、PubMed和Cochrane Library等数据库,全面搜集血栓通注射剂治疗急性脑梗死的随机对照试验,采用Cochrane风险评价表评价其研究质量,提取资料并通过RevMan 5.3软件进行数据分析。结果：共纳入31篇文献,累计2 903例受试者。Meta分析结果：在常规用药的基础上,联合使用血栓通注射剂,临床总有效率明显提高（RR＝1.21,95% CI：1.17~1.26,P<0.000 01）。此外,血栓通注射剂还可提高日常生活能力评分,降低神经功能缺损程度评分、血浆黏度(mPa·s)等,且未见严重的不良反应发生。结论：在西医常规治疗的基础上联合使用血栓通注射剂对急性脑梗死有较好的疗效,但其安全性仍需进一步探讨。     

感染患者关于万古霉素治疗药物监测的价值观与意愿调查

摘 要 目的：探索潜在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin resistant Staphylococcus aureus, MRSA)感染患者关于万古霉素治疗药物监测（therapeutic drug monitoring,TDM）的价值观和意愿,并为中国万古霉素治疗药物监测指南的建立提供参考。方法：纳入中国5个省市的潜在MRSA感染的患者,调查其对万古霉素输注方式、是否给予负荷剂量及TDM必要性三项干预措施的的观点。使用视觉模拟评分（Visual Analogue Score,VAS）测量患者在安全、有效、经济、适当等方面评价药物治疗方案和措施的价值观。对于离散型变量和连续型变量分别采用χ²检验和秩和检验。结果：本研究共纳入167名患者,其中有22名（13.17%）儿童。134名（80.24%）患者认为如果存在MRSA感染在治疗期间有必要进行万古霉素TDM,高医保报销比例患者与低医保报销比例患者间认为有必要进行万古霉素TDM的比例差异有统计学意义(65.77%vs55.36%, P<0.05）。有104名（62.28%）患者更倾向于持续输注,儿童与其他人的差异有统计学意义(86.36% vs 58.62%, P<0.05。109名（65.27%）患者倾向于不接受万古霉素负荷剂量。患者对临床疗效的意愿强度为9,肾毒性意愿强度为9,花费意愿强度为5,负担意愿强度为5,其他因素的意愿强度为4。患者的医保类型(中位数5vs6.5, P<0.05）及收入(中位数6 vs 4, P<0.01)可能潜在影响患者在花费方面的价值观。结论：潜在MRSA感染患者对万古霉素治疗及万古霉素TDM的价值观和意愿在不同情况下出现较大差异。其可能是临床医生做临床决策的一个重要因素。在临床指南的建立过程中应考虑患者的价值观和偏好。     

氟维司群500 mg治疗晚期乳腺癌的卫生技术评估

摘 要 目的：评估氟维司群500 mg（F500）治疗晚期乳腺癌的有效性、安全性和经济性,为医保决策和临床用药提供证据支持。方法：以氟维司群250 mg（F250）为媒介,对F500与其他常用内分泌治疗药物进行比较。按纳入排除标准,系统检索已发表的卫生技术评估报告、系统评价/Meta分析、随机对照试验、药物经济学分析,提取数据并评价其研究质量。对随机对照试验进行Meta分析,对其他研究进行定性分析。结果：共纳入37篇文献,系统评价/Meta分析、随机对照试验及药物经济学分析分别为12、18和7篇。F250与其他常用内分泌治疗药物相比,有效性相似,并可降低部分不良事件发生率,具有显著的经济性优势;F500与F250、阿那曲唑相比,有效性具有显著优势,可显著延长疾病进展时间/无进展生存时间 [HR=0.79(95%CI：0.68~0.91), HR=0.66(95%CI：0.47~0.92)]和总生存时间 [HR=0.81(95%CI：0.69~0.96), HR=0.70(95%CI：0.50~0.98)],安全性指标差异无统计学意义,并具有显著的经济性优势。结论：F500治疗晚期乳腺癌具有良好的有效性、安全性和经济性。