血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗接种后保护力的观察

为了探讨血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护性作用,采用１０６ＣＦＵ和１０８ＣＦＵ重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗皮下接种ＢＡＬＢ／Ｃ鼠,接种后８周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染后６周剖杀小鼠,计算减虫率、减卵率,同时进行虫卵肉芽肿周长和面积测量,以及抗体水平和抗原水平测定,同时设有ＰＢＳ对照组。结果表明重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫小鼠后,１０６ＣＦＵ、１０８ＣＦＵ组与对照组相比,减虫率分别为２７．３４％、１６．６４％,减卵率分别为５５．７５％、６０．５０％,虫卵肉芽肿的平均周长和平均面积、免疫后血清抗体水平差别均具有非常显著意义;１０８ＣＦＵ与１０６ＣＦＵ组相比,血清抗原水平差别具有显著意义,说明血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗是一种比较理想的新型疫苗,值得进一步深入研究     

日本血吸虫DNA疫苗pCDSj32不同免疫次数及末次免疫后不同攻击时间对小鼠保护性免疫力的观察

目的　观察日本血吸虫 DNA疫苗 p CDSj32不同免疫次数及末次免疫后不同攻击时间对小鼠保护性免疫力的影响。方法　分别以 10 0 μg/ 10 0 μl的 p CDSj32经股四头肌注射免疫 BAL B/ c小鼠 ,并分为一次免疫组合三次免疫组。各组于末次免疫后 4wk或 8wk,每只小鼠用 40条日本血吸虫尾蚴攻击感染。 6 wk后剖杀小鼠 ,观察各组小鼠的减成虫率和肝组织减卵率。结果　各免疫组与对照组相比均产生较好的保护免疫效果 ,减成虫率为 35 .6 1%～ 44 .44 % ,肝组织减卵率为 39.6 4%～6 9.0 6 %。结论　 DNA疫苗不同免疫次数及末次免疫后不同攻击时间对小鼠抗血吸虫尾蚴攻击感染效果有一定的影响。该疫苗免疫一次及免疫后 8wk攻击感染可获得最佳免疫效果     

血吸虫病间接红细胞凝集试验的标准化研究——抗原的筛选及标准化

分别用日本血吸虫的虫卵可溶性抗原(SEA)、成虫尿素提取抗原(AUA)、成虫表皮膜抗原(ATA)以及SEA与AUA、SEA与ATA的混合抗原致敏绵羊红细胞,并用于检测198例日本血吸虫病人血清,IHA的阳性符合率分别为95.45％、84.67％、90.23％、98.08％、96.25％;检测100例健康人血清,结果全部阴性;检测191例肺吸虫病,旋毛虫病、华枝睾吸虫病和囊虫病患者血清,其总交叉反应率分别为13.61％(SEA)、3.14％(AUA)、4.71％(ATA)、8.37％(SEA+ATA)和3.66％(SEA+AUA)。结果表明:SEA+AUA的制备方法简单,并具有较高的敏感性和特异性。     

白细胞介素-12在日本血吸虫脂肪酸结合蛋白诱导小鼠保护性免疫力中的佐剂作用

目的 研究白细胞介素-12（IL-12）对日本血吸虫脂肪酸结合蛋白（Sj14FABP）DNA疫苗的免疫增强效果。方法　 分别构建pVIVO2-Sj14FABP 和pVIVO2-IL12-Sj14FABP疫苗，鉴定构建成功后免疫小鼠。48只雄性BALB/c小鼠随机分为A、B、C和D等4组, 分别用0.9% NaCl（对照组）、pVIVO2、pVIVO2-Sj14FABP和pVIVO2-IL12-Sj14FABP肌注免疫1次（100 μg/只）。免疫后30 d各组小鼠感染40±2条尾蚴, 感染后45 d剖杀, 计数成虫及肝内虫卵；同时用ELISA法检测小鼠血清中IgG抗体水平，用双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经伴刀豆球蛋白A（ConA）和可溶性虫卵抗原（SEA）刺激后培养上清中白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）和干扰素-γ（IFN-γ）含量。 结果 经PCR和酶切鉴定，成功构建pVIVO2-Sj14FABP和pVIVO2-IL12-Sj14FABP重组质粒；C、D组免疫后分别获得24.1%和39.4%的减虫率、27.2%和32.8%的减卵率；细胞因子检测结果，D组经ConA和SEA诱生的IL-2和IFN-γ水平显著增高（P　<　0.01），而IL-4水平显著降低，差异有统计学意义（P　<　0.01）；免疫后30 　d小鼠血清IgG水平无明显升高，各实验组间差异也无统计学意义(P　>0.05)。 结论 Sj14FABP DNA疫苗可诱导BALB/c小鼠产生部分抗血吸虫感染保护作用, 细胞因子IL-12能够诱导机体免疫反应向Th1型优势分化，并增强血吸虫病DNA疫苗免疫保护性效果。     

日本血吸虫混合DNA疫苗免疫效果观察

目的 为提高日本血吸虫DNA疫苗免疫效力,观察日本血吸虫抗原分子的混合DNA疫苗诱导小鼠的抗攻击感染的保护性免疫。方法 大量制备真核质粒pBK-CMV-Sj26和pBK-CMV-Sj23,然后将单价DNA疫苗pBK-CMV-Sj26和pBK-CMV-Sj23混合后免疫小鼠。实验分为4组：混合疫苗组、单价疫苗pBK-CMV-Sj23组、空质粒对照组及生理盐水对照组。各组于0周、3周、5周在小鼠股四头肌注射相应质粒DNA或生理盐水,第9周小鼠用血吸虫尾蚴攻击感染,第15周剖杀小鼠计算减虫率及减卵率。结果 与对照组比较,实验组小鼠减虫率及减卵率有极显著性意义（P＜0．01）;与单价pBK-CMV-Sj23组比较,混合DNA疫苗组的减虫率及减卵率有显著性意义（P＜0．05）。结论 血吸虫混合DNA疫苗诱导小鼠对血吸虫的保护力优于单价DNA疫苗。     

含两种不同肽段的血吸虫多抗原肽疫苗的合成及其对BALB/c小鼠的免疫保护作用

目的　设计合成由曼氏血吸虫28 KDa GST抗原肽段26-43(P₂₆), 116-131(P₁₁₆), 141-153(P₁₄₁)和日本血吸虫26　KDa GST抗原肽段187-202(J₁₈₇)中的两种不同肽段组成的血吸虫混合多抗原肽疫苗,通过活性试验考察其抗原性、免疫原性及对BALB/c小鼠的保护性免疫效果。方法　用Boc化学和Fmoc化学相结合的策略合成含两种不同抗原肽的多抗原肽疫苗,产物经斑点酶联免疫吸附试验测定抗原性,在无免疫佐剂存在下接种小鼠,ELISA试验检测血清抗体,并用日本血吸虫尾蚴攻击感染,6周后剖杀小鼠进行体内成虫和肝内虫卵计数。结果和结论　合成的混合多抗原肽能够与感染日本血吸虫的病人或病兔血清结合,并能诱导BALB/c小鼠产生对日本血吸虫天然抗原特异的抗体应答。且合成的混合多抗原肽疫苗能够诱导BALB/c小鼠产生显著的抗日本血吸虫感染的保护性免疫力,这种免疫力不仅降低成虫负荷数,还能显著减少肝组织内虫卵检获数,其中(P₁₁₆)₄(P₂₆)₄-MAP的减虫率和减卵率均达70％以上,因此有希望发展成为有效的抗血吸虫疫苗。     

免疫印斑试验在血吸虫病现场诊断中的应用

本文报告用免疫印斑试验(immunoblot)以成虫31/32kD诊断蛋白检测52例血吸虫病患者血清抗体,结果阳性率为100％,而20例健康人均无反应。同时对肺吸虫病患者36例,旋毛虫病50例和囊虫病26例进行交叉反应测试,结果均无交叉反应出现.以免疫印斑试验与间接血凝试验(IHA)和酶免疫吸附试验(ELISA)对上述血清进行测试比较,结果后两种方法均出现不同程度的交叉反应,个别高达58.3％,显示了免疫印斑试验的优越性和诊断价值. 应用此法对流行区进行现场人群调查,136例中抗体阳性率为58.1％,对两项血清学检查均为阳性反应的65例,再进行粪检,结果24例虫卵阳性. 该法敏感、特异,重现性好,是一种新的血吸虫病血清学诊断方法,现将固相酶免疫试验常规法改进为微量法并制成试剂盒供基层使用。     

日本血吸虫和曼氏血吸虫减毒尾蚴免疫小鼠淋巴细胞表型的动态

目的：宿主经照射减毒血吸虫尾蚴免疫后能获得显著的抗攻击感染的抵抗力。本文探讨紫外线减毒尾蚴免疫小鼠淋巴细胞表型的动态变化。方法：小鼠分别感染减毒日本血吸虫和曼氏血吸虫尾蚴（５００条／只），对照组分别感染两种正常尾蚴（２００条／只），免疫后第３、５、７、１０、１４和２１ｄ各组剖杀６－７只，摘取两侧腋窝淋巴结和脾脏分离细胞，采用双染色免疫荧光标记的单抗及ＦＡＣＳｃａｎ流式细胞仪进行细胞表型分析。结果：免疫小鼠腋窝淋巴结细胞总数增加，第１０ｄ达高峰，其中尤以Ｔ细胞显著，而Ｔ细胞总数增加主要是由于ＣＤ＋４Ｔ细胞的增加，而不是ＣＤ＋８Ｔ细胞。与对照组相比，免疫组的反应是非常显著。结论：ＣＤ＋４Ｔ细胞在紫外线减毒血吸虫疫苗保护性免疫机制中可能起重要作用。     

人白细胞抗原—DRB1等位基因与中国西部泡状棘球蚴病易感性？…

目的 了解人白细胞抗原（ＨＬＡ）＝ＤＲＢ１等位基因与泡球蚴病相关性,阐明泡球蚴病的免疫学发病机制,探寻 球蚴病的易感基因或抗病基因提供线索。方法 应用ＰＣＲ／ＳＳＲ技术,对中国西部甘肃省漳县、岷县泡球蚴病高流行区４个 的３５例口才１０４例正常人九进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因型分析。结果 且ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０４０Ｘ基因频率为２６％（１８／７０）,正常对照组籽１０％（２０／２０８）（ＲＲ＝４．４５,Ｘ     

日本血吸虫基因工程BCG多价疫苗的研究

用日本血吸虫（Ｓｊ）成虫提取的总ＲＮＡ逆转录合成ｃＤＮＡ第一链，并设计合成引物，经ＰＣＲ扩增，扩增出２６ｋＤａ的编码区基因，并进行了测序，结果表明Ｓｊ中国大陆株（ＳｊＣ）、Ｓｊ菲律滨株（ＳｊＰ）２６ｋＤａ ＧＳＴ基因核苷酸同源性９９．８％。然后，构建了大肠杆菌－分枝杆菌穿梭表达质粒ＰＢＣＧ－Ｓｊ２６Ⅰ￣Ⅳ。再将其依次分别转化大肠杆菌、耻垢分枝杆菌和ＢＣＧ中，筛选出重组耻垢分枝杆菌疫苗和重组ＢＣＧ多