类糖尿病环境对P19细胞分化为心肌细胞的影响

目的:探讨在类糖尿病环境下诱导P19细胞向心肌细胞分化过程中心肌转录因子GATA结合蛋白4(GATA binding protein 4,GATA4)和心肌特异标志物心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)的表达水平?方法:体外类糖尿病环境下,诱导P19细胞向心肌细胞分化,通过Real-time PCR和蛋白质印迹法分别检测其cTnT和GATA4在不同时间点的mRNA以及蛋白表达水平?结果:在分化过程中,类糖尿病组P19细胞分化形成的胚胎样小体较正常组增殖缓慢,形成的生长晕松散零乱?类糖尿病环境下GATA4 mRNA的表达量在分化第6?8?10天(0.05 ± 0.06?0.11 ± 0.04?0.45 ± 0.12)均明显低于同时间点的对照组(1.00 ± 0.04?0.44 ± 0.06?0.78 ± 0.20),cTnT mRNA的表达量(0.12 ± 0.03?0.07 ± 0.04?0.46 ± 0.11)均明显低于同时间点的对照组(1.02 ± 0.25?0.25 ± 0.02?0.71 ± 0.21)?蛋白质印迹法结果用积分光密度值量化数据,类糖尿病环境下分化第6?8?10天GATA4蛋白表达(0.40 ± 0.06?0.25 ± 0.03?0.92 ± 0.13)均明显低于同时间点的对照组(0.69 ± 0.09?0.75 ± 0.08?1.05 ± 0.07)?类糖尿病环境下分化第6?8天cTnT蛋白表达(0.39 ± 0.08?0.37 ± 0.05)均明显低于同时间点的对照组(0.79 ± 0.05?0.54 ± 0.07)?统计结果表明在分化第6?8天时,类糖尿病环境下GATA4和cTnT mRNA和蛋白的表达量与对照组相比,差异均有统计学意义?结论:类糖尿病环境培养降低了P19细胞向心肌细胞的分化?     

Nodal信号通路相关基因NOMO1在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达

目的:研究斑马鱼NOMO1基因在早期胚胎发育过程中的时空表达情况?方法:首先克隆斑马鱼NOMO1同源基因全长cDNA,然后运用半定量RT－PCR技术初步检测NOMO1基因在斑马鱼早期胚胎的表达情况,最后通过原位杂交技术检测NOMO1基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的时空表达情况?结果:通过半定量RT－PCR及原位杂交技术显示NOMO1从受精卵时期开始即有表达,在24 hpf(受精后24 h)之前,NOMO1基因表达广泛,并主要集中在中?内胚层?从24 hpf开始其表达主要集中于神经系统如前脑?中脑?小脑?脊索前板?眼和耳囊等处?在心脏处也有少量表达?结论:NOMO1基因对斑马鱼早期胚胎发育具有一定的作用,推测NOMO1基因影响早期心脏发育?     

继发孔房间隔缺损的Amplatzer封闭器介入外科手术治疗的对比研究

目的　对继发孔房间隔缺损 (ASDⅡ )的Amplatzer间隔封闭器 (ASO)介入和外科治疗的疗效和安全性进行比较研究。方法　 1998年 5月～ 2 0 0 2年 12月接受ASO治疗的 72例和接受外科手术治疗的 6 6例ASDⅡ病人进行对比研究。结果　ASO组和外科组技术成功率分别为 97.2 % (70 /72例 )和 10 0 % ;ASO组的手术和住院时间明显短于外科组 (71.8± 11.6 )min和 (15 8.4± 31.8)min ;(8.8± 2 .3)d和 (2 6 .9± 9.9)d ,(P<0 .0 5 ) ;ASO组的手术并发症发生率明显低于外科组 (7.1%和 2 2 .7% ,P <0 .0 5 ) ;ASO组无病人接受输血 ,外科组接受输血率 89.1% (5 9/6 6例 ) ;ASO组费用明显高于外科组 (4 .4 5± 0 .5 3)万元和 (1.87± 0 .5 4 )万元 ,(P <0 .0 5 )。结论　继发孔ASD的ASO治疗在有适应症的范围内可替代外科手术 ,降低ASO费用有助于更广泛推广作用。     

成人继发孔房间隔缺损的Amplatzer间隔封闭器介入治疗

目的:探讨成人继发孔房间隔缺损(ASD Ⅱ)的Amplatzer间隔封闭器(ASO)介入治疗的疗效和安全性。方法:对接受ASO治疗的49例成人ASDⅡ患者的疗效、安全性进行研究。结果:全组患者技术成功率为95.6％(47/49例);ASDⅡ平均大小(28.2±5.3)mm,ASO平均大小(31.1±6.5)mm;术前平均肺动脉收缩压(39.3±13.4)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),肺动脉血流量/主动脉血流量(Qp/Qs)平均为2.4±1.1,ASD的成功封闭率即刻为91.5％(43/47例),术后24 h为100％;手术并发症发生率4.3％(2/47例);平均随访(11.7±3.6)个月,无ASO移位或破损。结论:成人ASD Ⅱ的ASO治疗疗效和安全性均好,在有适应证的范围内可替代外科手术。     

壳聚糖/肝素和壳聚糖/重组水蛭素共价包被镍钛合金片的体外生物相容性

目的:体外评价生物活性分子共价包被镍钛金属片后的生物相容性。方法:实验于2005-11/2006-10在南京医科大学心血管药理实验室完成。实验材料:镍钛合金片(镍含量55.3%～55.6%,钛含量43.5%～44.2%,厚度0.05cm,激光切割为0.5cm×0.5cm);壳聚糖(脱乙酰度90%,Mr200000);肝素、重组水蛭素。实验分组:①实验分4组:未包被组、壳聚糖组、壳聚糖/肝素组、壳聚糖/重组水蛭素组。将壳聚糖、肝素(1g/L)和重组水蛭素(20mg/L)用共价化学交联法包被于镍钛金属片单面。②溶血实验:将各组样品加0.2mL稀释血液和10mL生理盐水。阳性对照和阴性对照分别用10mL蒸馏水和10mL生理盐水各加0.2mL稀释血,与样品同样操作。③人全血动态接触实验:各组镍钛合金片分别放入10mL新鲜的人全血后行扫描电镜检查,并检测血常规(红细胞计数、白细胞计数、血小板计数)及凝血3项(部分凝血活酶活化时间、凝血酶原时间、凝血酶时间)。④内皮细胞种植、培养:人脐静脉内皮细胞培养、传代后,植入每孔已放入1片镍钛金属片的24孔板中,倒置显微镜下观察人脐静脉内皮细胞生长情况及细胞形态。⑤免疫荧光标记:Fn免疫荧光染色(红色激发波长510nm)观察细胞生长和黏附情况,Ki67免疫荧光标记(绿色激发波长510nm)观察细胞增殖情况。实验评估:①各组血液样本溶血率。②各组人全血接触实验后血液样本血细胞计数和凝血活性。③扫描电镜下各组人全血接触实验后镍钛金属片表面形态。④倒置显微镜下人脐静脉内皮细胞形态。⑤荧光显微镜下镍钛金属片表面人脐静脉内皮细胞生长、黏附情况。⑥荧光显微镜下镍钛金属片表面人脐静脉内皮细胞增殖情况。结果:①溶血率:各组镍钛金属片溶血率均小于1.7%。②血细胞计数和凝血活性:各组接触血液后红细胞、白细胞和血小板计数与未接触血液无差别;壳聚糖/重组水蛭素组与壳聚糖/肝素组部分凝血活酶活化时间、凝血酶原时间和凝血酶时间值较未包被组和壳聚糖组明显延长,差异有显著性意义(P<0.001);壳聚糖/重组水蛭素组部分凝血活酶活化时间和凝血酶时间值较壳聚糖/肝素组延长,差异有显著性意义(P<0.005)。③扫描电镜下各组人全血接触实验后镍钛金属片表面形态:镍钛合金片表面有纤维蛋白黏附、血小板黏附和聚集,顺序依次为壳聚糖组>未包被组>壳聚糖/肝素组>壳聚糖/重组水蛭素组。④倒置显微镜下人脐静脉内皮细胞形态:与人脐静脉内皮细胞72h孵育,见各组镍钛金属片边缘细胞生长、移行良好,无细胞变形。⑤荧光显微镜下镍钛金属片表面人脐静脉内皮细胞生长、黏附情况:利用Fn免疫荧光标记人脐静脉内皮细胞,镍钛金属片表面的人脐静脉内皮细胞黏附和生长顺序如下:壳聚糖组>未包被组>壳聚糖/重组水蛭素组>壳聚糖/肝素组。⑥荧光显微镜下镍钛金属片表面人脐静脉内皮细胞增殖情况:利用Ki67免疫荧光标记人脐静脉内皮细胞,镍钛金属片表面的人脐静脉内皮细胞增殖顺序如下:壳聚糖组=未包被组>壳聚糖/重组水蛭素组>壳聚糖/肝素组。结论:壳聚糖/肝素与壳聚糖/重组水蛭素包被镍钛金属后具有良好抗凝血活性,但壳聚糖/重组水蛭素与壳聚糖/肝素相比更有利于人脐静脉内皮细胞的生长。     

应用经胸超声心动图评估快速左心耳起搏心房颤动模型心脏结构及功能的变化

目的:应用经胸超声心动图观察高频率左心耳起搏致猪慢性心房颤动模型心脏结构和功能的变化。方法:实验于2005-09/2006-08在南京医科大学第一附属医院江苏省实验动物中心完成。①12只苏钟种猪随机分为实验组及对照组各6只,所有动物均开胸,将起搏电极固定在左心耳根部,高频率脉冲发生器植入左侧胸部囊袋。实验组术后恢复1周后起搏器以500次/min的频率快速起搏左心耳8周;对照组始终不起搏。②术后心电图定期监测起搏、心房颤动的发生情况;于术前、起搏后1周、起搏后4,8周超声心动图观察实验动物左房内径、心室收缩及舒张末左房面积、左房和左室射血分数、左室舒张及收缩末内径、左心室短轴缩短率等变化。结果:①实验组5只完成了实验,术后2周复查心电图,1只动物发生房颤,起搏8周3只发生阵发性房颤,1只未发生房颤;对照组则未发生任何心律失常情况。②左心房相关指标:起搏后1周,实验组左房内径、收缩末期左心房面积和舒张末期左房容积均较起搏前增加[(2.70±0.12),(2.50±0.12)cm;(6.78±0.81),(6.21±0.93)cm2;(4.66±0.53),(3.78±0.57)mL;P均<0.05],左房射血分数较起搏前下降[(55.6±6.0)%,(63.8±4.0)%,P<0.01],至起搏4,8周,左房射血分数进一步降低,左房内径等指标则继续增大。③左心室相关指标:起搏后1周,实验组左室舒张、收缩末期内径较起搏前增加[(3.64±0.13),(3.46±0.15)cm;(2.48±0.08),(2.14±0.09)cm;P均<0.01],左心室短轴缩短率和左室射血分数较起搏前下降[(31.6±2.0)%,(37.8±3.0)%;(60.8±2.0)%,(69.2±4.0)%;P均<0.01];至起搏4,8周,左心室短轴缩短率和射血分数进一步降低,左室舒张、收缩末期内径则继续增大,与对照组比较也差异显著(P<0.05,0.001)。结论:①超声心动图是监测房颤模型建立过程中心房、心室结构和功能变化的有效手段。②高频起搏左心耳是建立猪心房颤动模型的有效方法,快速心房起搏可导致左心房左心室增大及心功能减退。     

介入治疗膜周部室间隔缺损术后传导阻滞的危险因素再分析

目的：在前期总结的膜周部室间隔缺损（perimembranous ventricularseptal defect,pmVSD）介入治疗策略指导下,观察后续pmVSD介入封堵术后传导阻滞发生状况,分析其危险因素和预防措施。方法：分析2012年1月—2020年7月间成功接受介入封堵的196例pmVSD患者术后发生传导阻滞的情况,采用Logistic单因素和多因素回归模型进行危险因素分析和探索。结果：术后新发传导阻滞18例（18/196,9.2%）,包括完全性和不完全性右束支传导阻滞、左前分支传导阻滞、室内传导阻滞和Ⅰ度房室传导阻滞,未发生完全性左束支传导阻滞及高度房室传导阻滞,所有术后传导阻滞均在2个月内恢复。基底封堵组传导阻滞发生率（12.7%,17/134）较瘤内封堵组（1.6%,1/62）更高（P=0.014）。在基底封堵亚组,pmVSD上缘与主动脉瓣右冠瓣的距离（distance from the aortic valve to the defect,DAVD）越长（P=0.015）、破口直径越大（P=0.022）,术后发生传导阻滞的风险越大。结论：基底封堵组传导阻滞发生率较高。在基底封堵组,DAVD及破口直径是术后传导阻滞发生的独立影响因素。     

房间隔缺损患者心房肌组织凋亡基因表达谱特征的初步分析

目的:探讨房间隔缺损(atrial septal defect,ASD)患者心房肌组织与正常人心房肌组织凋亡基因表达谱的差异,寻找差异表达的凋亡相关基因,初步分析ASD患者心房肌组织凋亡基因表达谱的特征.方法:提取ASD患者及正常人心房肌组织mRNA,标记cDNA探针,分别与含有218个人类细胞凋亡相关基因片段的cDNA微矩阵芯片杂交,对二者差异表达基因进行生物信息学分析.结果:①差异表达的凋亡相关基因17个,其中11个基因具有促凋亡作用,6个基因具有凋亡抑制作用;②ASD患者心房肌组织中抗凋亡基因均明显下调,而促凋亡基因中3个基因表达下调外,其余基因均明显上调.结论:ASD患者心房肌组织的凋亡基因表达谱已发生明显变化,心房肌细胞凋亡可能与ASD的病因及病理生理学有关.     

血清碱性磷酸酶水平预测维持性血液透析患者冠状动脉钙化

目的：探究维持性血液透析（maintenance hemodialysis,MHD）患者冠状动脉钙化的相关危险因素。方法：纳入2018年3月—2020年3月在南京医科大学第一附属医院血液净化中心规律血液透析,且透析龄≥3个月的 MHD患者188 例,收集患者临床资料和实验室指标,冠状动脉多层螺旋CT测定冠状动脉钙化积分（coronary artery calcification score,CACS）,分析冠状动脉钙化的相关危险因素。结果：冠状动脉钙化（CACS＞100分）的发生率为54.8%（103/188）,CACS中位数为143（0,728）分。与CACS＜100分组相比,CACS≥400分组患者年龄、透析龄、血清钙、甲状旁腺激素（intact parathyroid hormone,iPTH）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）等指标显著增高（P＜0.05）。Spearman相关分析显示,CACS与年龄（r=0.292,P＜0.001）、透析龄（r=0.242,P＜0.001）、收缩压（r=0.167,P=0.024）、血钙（r=0.263,P＜0.001）、iPTH（r=0.191,P=0.009）及ALP（r=0.171,P=0.019）呈正相关（P＜0.05）;多因素线性回归显示ALP与CACS显著相关（P=0.012）。受试者工作特征曲线分析示ALP预测重度冠状动脉钙化的曲线下面积是0.615（P=0.009）,最佳临界值为226.5 U/L。多因素Logistic回归分析显示经过多因素校正后ALP≥226.5 U/L组患者重度冠脉钙化风险显著升高（OR=3.05,95%可信区间：1.30~7.18,P=0.011）。结论：血清ALP水平是MHD患者冠状动脉钙化的独立预测因子,ALP有望成为MHD患者心血管钙化的预测指标和干预靶点。