慢性肾衰竭大鼠主动脉弹性功能与血管基质金属蛋白酶2表达及钙化间的关系

目的　探讨主动脉基质金属蛋白酶2（MMP-2）在慢性肾衰竭大鼠主动脉弹性功能变化中的作用及机制。方法　将20只大鼠随机分为正常对照组、慢性肾衰竭组、慢性肾衰竭血管钙化组。8周造模成功后测量大鼠主动脉脉搏波传导速度（PWV）,分别用逆转录-聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测大鼠主动脉核心结合因子α1（Cbfα1）及MMP-2　mRNA和蛋白的表达。EVG染色方法检测主动脉弹性纤维的改变。结果　慢性肾衰竭血管钙化组PWV值和主动脉Cbfα1、MMP-2的mRNA及蛋白表达均高于慢性肾衰竭组及正常对照组（P<0.05）,PWV与主动脉MMP-2表达呈正相关（r＝0.754,P＝0.02）。结论　慢性肾衰竭大鼠血管弹性功能下降的可能机制之一是血管壁MMP-2表达升高导致弹性蛋白降解,同时后期的血管钙化也参与其中。     

肾癌组织EphA2、E-cadherin表达及其与肾癌临床病理特征的关系

目的探讨Eph受体酪氨酸激酶A2(Eph A2)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)在肾癌组织中的表达及其与肾癌临床病理特征的关系。方法选择52例肾癌患者的手术标本,采用免疫组化SP法检测肾癌组织Eph A2及Ecadherin蛋白的表达,计算每张切片的阳性细胞百分数及HSCORE分值。分析Eph A2表达、E-cadherin表达与患者临床病理特征(包括年龄、性别、TNM分期、肿瘤直径、病理类型)的关系,计算3年生存率,应用COX比例风险模型分析肾癌患者预后影响因素。结果肾癌组织中Eph A2蛋白高表达率为71.2%,E-cadherin蛋白低表达率为76.9%。肿瘤直径≥5 cm者的Eph A2蛋白高表达率高于直径<5 cm者(P<0.05),肿瘤直径≥5 cm者E-cadherin蛋白低表达率高于直径<5 cm者(P<0.05)。Eph A2蛋白高表达是肾癌患者预后的独立影响因素(P<0.05)。结论肾癌组织中Eph A2蛋白表达增加、E-cadherin蛋白表达降低,Eph A2蛋白高表达是肾癌患者预后的独立影响因素。     

高镁对高磷诱导血管钙化的影响及其机制

目的 探讨高镁对高磷诱导血管钙化的影响及其可能的机制.方法 体外原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs),用β甘油磷酸盐(β-GP)诱导钙化.VSMCs细胞被分为4组:对照组、高磷组(10 mmol/L β-GP)、镁干预组(10 mmol/L β-GP+3 mmol/LMgSO4)、镁通道抑制剂(2-APB)干预组(10 mmol/L β-GP+3 mmol/L MgSO4+10-4 mol/L 2-APB).采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-PCR法和Western印迹法检测细胞核心结合因子α-1(Cbfα-1)的表达.24只雄性SD大鼠被随机分为3组:对照组(甲基纤维素灌胃+高磷饮食)、血管钙化组(硫酸腺嘌呤灌胃+高磷饮食)、高镁干预组(硫酸腺嘌呤灌胃+高磷高镁饮食).造模成功后测定大鼠主动脉脉搏波速率(PWV);采用yon Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测胸主动脉钙化情况;免疫组织化学方法检测胸主动脉Cbfα-1表达.结果 细胞培养14 d后,与高磷组相比,镁干预组VSMCs钙盐沉积明显减少,ALP活性降低(P＜0.05),Cbfα-1表达下调;2-APB可抑制高镁对VSMCs的保护性作用.Cbfα-1的动态观察结果显示,镁干预组第3天Cbfα-1的表达下调(P＜0.05),其抑制效应随时间延长呈增强趋势.体内实验中,大鼠慢性肾衰竭血管钙化模型制备成功.和体外实验一致,与血管钙化组相比,高镁干预组大鼠血浆镁离子水平明显升高,胸主动脉PWV明显降低(P＜0.05),血管钙盐沉积程度亦明显减轻.免疫组织化学结果显示高镁可明显降低高磷诱导的Cbfα-1表达(P＜0.05).结论 高镁可抑制血管钙化,其机制可能与其抑制VSMCs骨源性分化相关.     

miR-30b在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的:观察微小RNA-30b(miR-30b)在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化中的作用及其机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术(sham)组和慢性肾衰竭所致血管钙化(CRF+VC)组.采用硝酸银染色检测血管钙化情况;免疫组织化学法检测成骨转录因子Runx2的表达.体外培养原代大鼠胸主动脉VSMCs并分为...     

miRNA103在高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的 观察微小RNA103(microRNA103,miR-103)在高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化过程中的作用及机制.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,将VSMCs随机分为正常组和高磷(HP)组(给予10 mmol/Lβ-甘油磷酸盐刺激),刺激...     

尿毒症误诊为支气管哮喘3例临床分析

例１：女,５０岁。因间断鼻衄１月,呼吸困难１天入院。无哮喘、慢性支气管炎及高血压病史。查体：呼吸２８／ｍｉｎ,血压１６／１２７ｋＰａ。急性病容,端坐位,呼吸急促,无深大呼吸及颈静脉怒张,两肺满布哮鸣音。心率９０／ｍｉｎ,心尖区可闻及Ⅱ级收缩期杂音,...     

镁离子对大鼠血管平滑肌细胞钙化相关因子表达的影响

目的 探讨镁离子对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化相关因子表达水平的影响。方法 选择5周龄健康雄性SD大鼠6只。以组织贴壁法进行原代VSMCs培养,至3～5代时用于细胞实验。将VSMCs采用随机数字表法分为正常对照组、高磷组（加入10 mmol/L β-甘油磷酸）、镁干预组〔加入10 mmol/L β-甘油磷酸＋3 mmol/L硫酸镁（MgSO4）〕、2-氨基乙氧基二苯基硼酸（2-APB）干预组（10 mmol/L β-甘油磷酸＋3 mmol/L MgSO4＋10-4 μmol/L 2-APB）。采用邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞培养14 d后钙化情况,酶联免疫吸附法检测细胞培养14 d后碱性磷酸酶（ALP）活性,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测0、3、6、10、14 d时细胞内基质G蛋白（MGP）mRNA和骨桥蛋白（OPN）mRNA的表达水平。结果 细胞培养14 d后,4组钙水平比较,差异有统计学意义（F=409.800,P＜0.05）;高磷组、2-APB干预组钙水平高于正常对照组和镁干预组 （P＜0.05）。4组ALP活性比较,差异有统计学意义（F=490.901,P＜0.05）;高磷组、2-APB干预组ALP活性高于正常对照组和镁干预组 （P＜0.05）。培养14 d后,4组MGP mRNA和OPN mRNA的表达水平比较,差异有统计学意义（F=1 279.905、1 157.247,P＜0.05）;镁干预组MGP mRNA和OPN mRNA的表达水平高于高磷组及2-APB干预组 （P＜0.05）。动态观察MGP mRNA和OPN mRNA的表达变化,结果显示在培养第3天时,高磷组MGP mRNA和OPN mRNA表达水平均降低（P＜0.05）,并随着时间的延长呈下降趋势|镁干预组MGP mRNA和OPN mRNA表达水平均升高（P＜0.05）,并随着时间的延长呈上升趋势。结论 高浓度镁离子在抑制VSMCs钙化过程中可上调MGP及OPN的表达,并呈一定时间依赖性,为临床进一步研究提供了参考依据。     

维持性血液透析患者贫血治疗达标情况及影响因素研究

目的 了解维持性血液透析患者的贫血治疗达标情况,并探讨其影响因素。方法 选取2013年10月-2014年10月在河北医科大学第四医院行维持性血液透析的患者158例,根据贫血治疗达标情况分为贫血治疗达标组和贫血治疗未达标组。收集并比较两组患者的临床资料,包括基本情况、治疗情况及实验室检测指标,采用多元线性回归分析探讨维持性血液透析患者贫血治疗达标情况的影响因素。结果 共有贫血治疗达标患者73例,未达标患者85例,贫血治疗达标率为46.2%。两组患者性别、年龄、原发病、血管通路、重组人红细胞生成素（r-HuEPO）使用剂量、血清铁、铁蛋白、转铁蛋白、转铁蛋白饱和度、透析前血清磷、透析前钙磷乘积、全段甲状旁腺素（iPTH）、血浆清蛋白、血浆前清蛋白、透析前血肌酐、透析前尿素氮、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;贫血治疗达标组患者的透析时间长于贫血治疗未达标组,透析前血清钙高于贫血治疗未达标组,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）低于贫血治血清铁、疗未达标组,差异有统计学意义（P＜0.05）。Pearson相关分析结果显示,维持性血液透析患者血红蛋白（Hb）水平与透析时间、血清铁、转铁蛋白饱和度、透析前血清钙、血浆前清蛋白呈线性正相关,与LDL-C呈线性负相关（P＜0.05）。多元线性回归分析结果显示,透析前血清钙、iPTH、血浆前清蛋白对维持性血液透析患者Hb水平的影响有统计学意义（P＜0.05）。结论 维持性血液透析患者的贫血治疗达标率较低,透析前血清钙、iPTH、血浆前清蛋白是其影响因素。     

细胞外pH值及其波动对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡的作用及机制研究

目的 探讨细胞外pH值的变化及其波动对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡的作用及机制。方法 2014年11月—2015年3月,选取8~10周龄健康雄性SD大鼠6只。采用简单随机抽样法选取2只大鼠,体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs。采用随机数字表法将VSMCs分为pH 7.4组和高磷组,高磷组又分为pH 6.8+磷组、pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组和pH 6.8/7.7+磷组。pH 7.4组采用含10% 胎牛血清（FBS）的DMEM培养基培养。高磷组采用高磷培养基（10 mmol/L β-甘油磷酸）培养,并根据数字酸度计的读取值酌情加入1 mol/L HCl或7.4% NaHCO3调整pH值;pH 6.8/7.7+磷组第1天给予pH 7.7刺激、第2天给予pH 6.8刺激。将剩余4只大鼠按照上述方法培养,重复2次。采用免疫组织化学（SP法）进行细胞鉴定。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）mRNA相对表达水平及B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）mRNA/Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA。采流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 倒置相差显微镜下可见：大鼠胸主动脉组织块贴壁3~4 d后细胞从组织块边缘爬出,细胞为长梭形,呈束状排列;5~6 d成同心圆状细胞团,形成明显的细胞生长晕,并围绕组织块边缘呈束状、放射状延伸;6~7 d后细胞融合成片,细胞体梭形或不规则三角形,细胞质向外伸出2~3个长短不等的突起。免疫组织化学检测可见：细胞质表达强阳性。pH 6.8+磷组Caspase-3 mRNA表达水平低于pH 7.4组,pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组Caspase-3 mRNA表达水平高于pH 7.4组（P＜0.05）;pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组、pH 6.8/7.7+磷组Caspase-3 mRNA表达水平高于pH 6.8+磷组（P＜0.05）;pH 7.7+磷组Caspase-3 mRNA表达水平高于pH 7.4+磷组,pH 6.8/7.7+磷组Caspase-3 mRNA表达水平低于pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组（P＜0.05）。pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组、pH 6.8/7.7+磷组Bcl-2 mRNA/Bax mRNA分别小于pH 7.4组、pH 6.8+磷组（P＜0.05）;pH 7.7+磷组Bcl-2 mRNA/Bax mRNA小于pH 7.4+磷组（P＜0.05）;pH 6.8/7.7+磷组Bcl-2 mRNA/Bax mRNA大于pH 7.7+磷组。pH 6.8+磷组、pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组、pH 6.8/7.7+磷组细胞凋亡率大于pH 7.4组（P＜0.05）;pH 7.4+磷组、pH 7.7+磷组、pH 6.8/7.7+磷组细胞凋亡率大于pH 6.8+磷组（P＜0.05）;pH 7.7+磷组细胞凋亡率大于pH 7.4+磷组,pH 6.8/7.7+磷组细胞凋亡率小于pH 7.4+磷组（P＜0.05）;pH 6.8/7.7+磷组细胞凋亡率小于pH 7.7+磷组（P＜0.05）。结论 细胞外酸性环境能够抑制高磷培养的大鼠VSMCs凋亡,而细胞外碱性环境能够促进其凋亡。其具体机制可能是影响了Bcl-2、Bax的表达水平进而影响了Caspase-3的表达水平,从而影响了细胞凋亡。     

镁离子对大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响 , 镁离子对大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

目的 探讨不同浓度镁离子对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响。方法 原代培养获取 VSMCs,进行形态学及免疫细胞鉴定,后将VSMCs随机分为阴性对照组、高磷组、镁干预组。阴性对照组采用含10%胎牛血清培养,高磷组采用高磷培养基培养,镁干预组在高磷培养基的基础上分别加入不同浓度氯化镁,使镁离子终浓度分别为1、2、3 mmol/L（镁干预组1~3）,刺激7 d后行钙化检测,测定钙含量及碱性磷酸酶（ALP）活性,并行反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞内核心结合因子α1（Cbfα1）mRNA的表达。结果 高磷组和镁干预组VSMCs均有钙盐沉积,其钙含量均高于阴性对照组;镁干预组随镁离子浓度增大钙化结节逐渐缩小,除镁干预组1钙含量与高磷组无差异外,镁干预组2和镁干预组3均低于高磷组（均P＜0.05）。VSMCs ALP活性和Cbfα1 mRNA的表达除镁干预组3与阴性对照组无差异外,其余组均高于阴性对照组（P＜0.05）。镁干预组随镁离子浓度增大,ALP活性和Cbfα1 mRNA的表达水平均逐渐降低,且均低于高磷组（P＜0.05）。结论 镁离子可在一定程度上抑制高磷诱导的VSMCs钙化和成骨样转分化,其可能是通过降低VSMCs中Cbfα1的表达来实现的。