抗人CD38分子单克隆抗体生物学功能研究

目的 研究抗人CD38单克隆抗体(1C6)的生物学功能.观察1C6对多种肿瘤细胞系生长增殖的影响,利用不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应,观察抗人CD38单克隆抗体(1C6)在人外周血淋巴细胞增殖反应中的作用.方法 以MTT法检测单克隆抗体抑制细胞增殖以及介导补体杀伤靶细胞的功能.利用抗人CD3单克隆抗体刺激人外周血淋巴细胞增殖、同种异型抗原诱导混合淋巴细胞反应,在加入或未加入抗人CD38单克隆抗体(1C6)的情况下,观察细胞形态并检测3H-TdR掺入量.结果 加入不同浓度的1C6的实验组与对照组相比,多种细胞系的生长受到不同程度的抑制.不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应中,加入1C6的实验组细胞克隆明显减少,3H-TdR掺入量明显下降,细胞增殖受抑.结论 1C6可抑制多种肿瘤细胞的生长,可介导补体杀伤多种靶细胞.1C6对抗CD3刺激的外周血淋巴细胞增殖以及混合淋巴细胞培养均具有明显的抑制效应.     

甲基硝基亚硝基胍诱发小鼠大肠癌的实验研究

大肠癌是我国常见的消化道肿瘤,我们采用直接化学致癌剂甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱发小鼠大肠癌,以求建立与人类大肠癌相似的实验性大肠癌动物模型,探讨癌变小鼠的免疫状态、肿瘤的形态学、组织化学及超微结构特征,提出小鼠大肠癌的病理诊断标准; 材料和方法昆明种小鼠13窝58只,体重22—38克,喂标准食团,自由饮水。按同源配对法将同窝、同月龄、同性别、体重相近的     

人参三醇皂甙对人淋巴结细胞IL—5基因表达的促进效应

应用mRNA麦胚无细胞体外转译体系,动态地观察了人参三醇皂甙(PTGS)对人淋巴结细胞IL-5基因表达的促进效应。结果表明,PTGS可以明显促进PHA活化人淋巴结细胞分泌IL-5,最大促进效应可达66.67％。PTGS+PHA共刺激后人淋巴结细胞浆IL-5 mRNA转译IL-5的量明显高于单纯PHA组,最大促进效应40％。上述结果首次证明PTGS对IL-5的促诱生效应是通过调节IL-5基因表达而实现的。     

膜型/分泌型MICA对NK细胞受体NKG2D的相反调节效应及其对NK细胞受体谱的影响

目的　观察膜型和分泌型MICA对NK细胞受体表达的影响 ,以探讨NK细胞抗肿瘤活化机制及肿瘤细胞表达MICA分子的意义。方法　用MTT法测定人NK细胞系 (NK92 )的细胞毒活性 ;用RT PCR或FACS检测NK细胞受体 (NKG2D ,NKG2A B ,KIR2DL1,KIR2DS1)及NKG2D的识别配体MICA的表达。结果　肿瘤细胞表面的MICA分子可上调NKG2D的表达 ,下调抑制性受体NKG2A B和KIR2DL1的表达 ;而分泌型MICA (sMICA)分子对NKG2D及抑制性受体的表达均有抑制作用。结论　膜型MICA分子可上调NKG2D的表达 ,激发NK细胞对肿瘤细胞的细胞毒效应 ;分泌型MICA分子则通过降低NKG2D的表达下调机体的抗肿瘤免疫效应 ,肿瘤细胞分泌sMICA分子为肿瘤发生免疫逃逸的机制之一。     

采用IL－6cDNA控针检测人IL－6基因表达

采用缺口平移技术对ＩＬ—６ｃＤＮＡ进行了生物素和同位素标记，证明两种标记的ＩＬ－６ｃＤＮＡ（３０ｎｇ／ｍｌ）均可检出低至５ｐｇ的同源ＤＮＡ，而模拟探针（５００μｇ／ｍｌ）对高达１００ｎｇ的同源序列无此反应。应用ＩＬ－６ｃＤＮＡ对富含ＩＬ－６ｍＲＮＡ的标本进行斑点杂交或Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，证明人参三醇皂甙促进了淋巴细胞ＩＬ—６基因表达（４倍），人胎脾单个核细胞、人胎脑组织匀浆和人胎胰岛细胞内均含有高浓度ＩＬ—６ｍＲＮＡ。     

同种LAK细胞制备的条件探讨

以健康人外周血为来源，采用简便易行的体外大规模分离和培养ＬＡＫ细胞工艺，加入ＬＡＫ细胞活性增强因子，可明显地提高同种异体外周血中ＬＡＫ前体细胞的体外扩增能力和抗肿瘤活性。结果表明，由此工艺扩增培养的ＬＡＫ细胞具有较强的抗肿瘤效应。     

LPS和IFN－γ对人不同胎龄脾M￠分泌单核因子的影响

制备不同胎龄水囊引产胎脾Ｍ，以ＬＰＳ（１０ｍｇ／Ｌ）为诱导剂，刺激４８ｈ，ＭＴＴ法检测不同胎龄胎脾Ｍ上清中ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ的含量，并与外伤成人脾Ｍ的分泌功能进行比较，发现不同的单核细胞团子，其胚胎发育状况极不一致：胎脾ＭＩＬ－１的分泌在胚胎３２周达成人水平（Ｐ＞０．０５）并保持至出生；ＩＬ－６的分泌在胚胎２０周时已与成人无差别（Ｐ＞０．０５），至出生前，已显著超过成人水平（Ｐ＜０．０１）；而ＴＮＦ的分泌，在胚胎期一直处于较低水平（Ｐ＜０．０１）。同时观察到免疫介质（ＬＰＳ、ＩＦＮ－γ）对胎脾Ｍ分泌ＩＬ－６、ＴＮＦ有协同刺激作用。     

诺如病毒表达衣壳蛋白单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用

目的:建立能稳定分泌抗诺如病毒(Norovirus)N蛋白的单克隆抗体(mAb)细胞株, 制备抗诺如病毒核衣壳蛋白的mAb, 为诺如病毒的早期快速检测及致病机制的研究提供实验材料.方法:用E.coli表达的GⅡ组广州株NVgz01(DQ369797)Norovirus-N蛋白免疫BALB/c小鼠, 通过PEG使小鼠脾细胞和Sp2/0细胞融合, 使用HAT选择性培养基培养融合细胞, 用间接ELISA和Western blot测定mAb的效价、免疫球蛋白亚型和mAb的特异性, 并将各mAb之间进行配对.结果:通过细胞融合和克隆化, 共筛选出4株分泌抗Norovirus-N蛋白抗体的杂交瘤细胞株N2C3、 N7C2、 N4B1、 N8A9.间接ELISA和Western blot检测结果表明, 这4株mAb都可以与E.coli表达的GⅡ组广州株Norovirus-N蛋白产生特异性反应, 并且能与天然粪便标本中的GⅡ组Norovirus产生特异性反应.配对结果显示N2C3和N7C2之间配对, 对表达蛋白和天然病毒都具有较强的检测灵敏度.结论:获得了诺如病毒GⅡ组特异性mAb, 为制备免疫诊断试剂盒及致病机制的研究奠定了基础.     

NK细胞耗竭与卡控点免疫治疗

天然杀伤细胞(NK细胞)作为宿主免疫的第一道防线,通过直接抗肿瘤或辅助T细胞等方式,在抗肿瘤免疫应答过程中发挥重要作用。然而NK细胞在肿瘤微环境中往往处于功能低下的免疫耗竭状态,伴随着异常表达的细胞表面受体谱系,限制着NK细胞效应功能的发挥。NK细胞的卡控点免疫治疗作为肿瘤治疗的崭新思路,主要通过阻断NK细胞表面抑制性受体,解除NK细胞在肿瘤局部接收到的抑制性信号,逆转NK细胞的肿瘤免疫耗竭状态,从而触发抗肿瘤效应。随着研究的深入,我们将进一步揭示NK细胞特定卡控点分子的作用机理、适应证及生物标志物,从而充分发挥NK细胞卡控点免疫治疗的潜力。     

血清Cortisol和血浆AT-Ⅱ在围手术期开胸患者体内水平的探讨

目的:通过测定开胸患者术前及术毕血清皮质醇(Cortisol)和血浆血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)的水平,探讨应激前后开胸患者体内血清Cortisol和血浆AT-Ⅱ的变化。方法:无严重高血压、心脏病、垂体瘤及其它相关影响体内Cortisol、AT-Ⅱ水平疾病且具有手术指征的开胸患者35例(男18,女17),平均年龄(58.1±10.6)岁,分别在术前及术毕时采血,应用放射免疫分析测定血清Cortisol和血浆AT-Ⅱ的水平。结果:经配对t检验,结果显示开胸患者术毕血清Cortisol和血浆AT-Ⅱ与术前相比明显增高,存在显著性差异(t=-3.686～-3.575,P≤0.01);收缩压及心率,存在显著性差异(t=-2.35～4.72,P=0～0.025<0.05)。控制性别与年龄后,经部分相关分析,术毕心率与AT-Ⅱ呈显著正相关(r=0.41,P=0.035<0.05);与术毕Cortisol呈正相关(r=0.42,P=0.019<0.05)。结论:开胸患者术毕血清Cortisol、血浆AT-Ⅱ和心率明显增高。术后应密切监测开胸患者血清Cortisol及AT-Ⅱ的水平,作好相应的护理,以减少其它并发症的发生几率。