Notch1在人乳腺癌细胞中的表达及其与乳腺癌耐药的关系

目的 检测乳腺癌细胞株MCF-7与MCF-7/ADR的 Notch1 表达、成球能力、干细胞池比例及干细胞内Notch1的表达,探讨Notch1 在逆转乳腺癌化疗耐药中的意义.方法 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot 法检测乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADR 及表型为ALDH1+/CD44+/CD24- 乳腺癌干细胞中Notch1 的表达;无血清培养检测MCF-7及MCF-7/ADR 的成球能力;流式细胞仪检测MCF-7与MCF-7/ADR的干细胞比例并分选干细胞.结果 MCF-7/ADR的Notch1 的表达明显高于MCF-7(0.0748±0.0043比0.0461±0.0022,P＜0.05),微球体形成能力也明显高于MCF-7 (P＜0.05);流式细胞仪检测干细胞比例,MCF-7/ADR高于MCF-7(11.40％比1.89％);分选出的干细胞Notch1 的表达明显高于非干细胞(0.3096±0.0324比0.0428±0.0061,P ＜0.05).结论 Notch1 在乳腺癌及乳腺癌干细胞中高表达,干预Notch1 可能可以逆转乳腺癌治疗的耐药.     

Dnmt1,Dnmt3a,Dnmt3b和HMT在不同结肠癌细胞系的表达及意义

目的:探讨不同结肠癌细胞系中表观遗传学酶谱的表达水平.方法:RT-PCR分别检测结肠癌细胞系HT-29、Lovo和Caco-2中Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b和HMT mRNA表达水平.结果:Dnmt3b mRNA在结肠癌细胞系HT-29、Lovo中高度表达,Dnmt1与HMT次之,Dnmt3a表达水平最低;Dnmt3b、Dnmt3a在不同结肠癌细胞系之间的表达水平存在显著的差异.结论:不同分化程度的结肠癌细胞系可能存在不同的表现遗传学发生机制;Dnmt3b在建立和维持结肠癌细胞系DNA甲基化模式中可能起更为重要的角色.     

一氧化氮对急性出血坏死性胰腺炎肺组织Toll样受体2/4 mRNA表达的影响

目的研究一氧化氮(NO)对急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)肺组织Toll样受体(TLR)2/4表达的影响。方法采用逆行胰胆管牛磺胆酸钠注射制造AHNP大鼠模型,动物分为假手术组、胰腺炎组和L精氨酸(LArg)治疗组。RTPCR方法检测肺组织TLR2和TLR4mRNA表达变化。结果与假手术组比较,胰腺炎组大鼠从3h时肺组织TLR2/4mRNA表达开始增高,在12h时肺组织TLR2/4mRNA表达达到峰值;同时肺损伤加重,肺组织TNFα浓度升高,NO浓度逐渐降低(P<0.05)。给予LArg治疗后,NO浓度明显升高,TLR2/4mRNA表达降低,肺损伤程度减轻,肺组织TNFα浓度降低(P<0.05)。结论急性出血坏死性胰腺炎时,肺组织内TLR2和TLR4mRNA表达上调,肺组织损伤加重。NO可以明显抑制AHNP肺组织TLR2/4mRNA的表达,从而减轻肺损伤。     

对不同培养条件下MCF-7中干细胞池变化的研究

目的了解乳腺癌细胞系MCF-7中是否存在乳腺癌干细胞,以及在不同的培养条件下,干细胞池的变化情况。方法采用流式细胞技术检测在不同的培养条件下MCF-7中CD44和CD24的表达情况以及乳腺癌组织原代细胞中的CD44和CD24表达情况。结果MCF-7中存在乳腺癌干细胞,而且干细胞所占的比例会随培养过程中细胞数量的不断增加而逐渐下降;当化疗药物干预后导致细胞数量下降时,干细胞的比例则会明显上升。结论MCF-7中存在乳腺癌干细胞,而且MCF-7的干细胞池会随着微环境中生长信号的变化而变化。     

β-catenin反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖和紫杉醇敏感性的影响

目的 探讨β-catenin反义寡核苷酸(ASODN)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,及其与紫杉醇(paclitaxel)联合时对MCF-7细胞的抑制作用.方法 不同浓度的β-catenin ASODN和错义对照(SODN)作用于MCF-7细胞48 h后,测定细胞凋亡比例.以终浓度为10 μmol/L的ASODN、SODN和空白对照培养细胞10 d后,计算各自的集落形成率.按不同组合分别在培养细胞中加入ASODN、SODN、紫杉醇,于培养24、48 h用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 检测β-catenin mRNA 表达,培养72 h后MTT法计算各组细胞存活率.结果 MCF-7细胞凋亡比例随β-catenin ASODN作用浓度升高而略有升高,与SODN、空白对照组比较差异有显著性意义(均P<0.05).ASODN组平均集落形成率(12.5%)与SODN组(34.0%)和空白对照组(37.0%)差异有统计学意义(均P<0.05).MTT实验和荧光定量RT-PCR结果显示,ASODN联合紫杉醇组与单用ASODN组或单用紫杉醇组比较,细胞生长抑制率明显增高,β-catenin mRNA表达相对值明显降低,均存在显著性差异.结论 β-catenin ASODN抑制MCF-7细胞增殖,促进凋亡,并且同紫杉醇联合作用时显著抑制细胞生长和β-catenin mRNA 表达.     

Significance of Rosiglitazone Inhibiting TLR4 Expression in Partial Hepatic Ischemia/Reperfusion of Mice

The effect of rosiglitazone as the ligand of peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) inhibiting the TLR4 expression in ischemic lobes in partial hepatic ischemia/reperfusion injury (IRI) in BABL/C mice and the action of rosiglitazone inhibiting the TLR4 receptor-mediated inherent immune response were investigated. The model of the mouse partial hepatic ische- mia/reperfusion injury was established. All the animals were randomly divided into 3 groups: rosiglitazone group, vehicle (dimethylsulphoxide, DMSO) group and sham operation group. The hepatic samples were collected when mice were sacrificed 0, 2, 4 and 6 h after reperfusion following 1 h ischemia to analyze the acute phase of hepatic IRI. The dynamic expression of TlR4 mRNA was de- tected quantitatively by real-time-PCR, and the levels of TNF-α, IL-10 and ALT in portal vein were determined in all groups. After restoration of blood supply, the expression of TLR4 mRNA in ischemic lobes was detected in 0, 2, 4 and 6 h after reperfusion following 1 h ischemia in rosiglitazone group and vehicle group. The most intensive expression of TLR4 mRNA was present at 4 h after reperfusion in ischemic lobes in vehicle group. As compared with vehicle group, the expression of TLR4 mRNA in ischemic lobes in rosiglitazone group was significantly decreased at 4 h after reper- fusion. The level of IL-10 in portal vein was markedly up-regulated in rosiglitazone group as compared with vehicle group. Contrarily, the levels of TNF-α and ALT in portal vein were markedly down-regulated in rosiglitazone group as compared with vehicle group at every time point in mouse partial hepatic IRI model. Rosiglitazone could alleviate the hepatic IRI by inhibiting TLR4 receptor-mediated inherent immune response.     

检验科管理要点

1.人员控制。检验科的各级技术人员都要有与技术职称相称的专业理论与操作技术水平。一要有熟练的操作技术;二要有一丝不苛的科学作风;三要有良好的医德修养。检验科主任应严格考核各级技术人员的工作水平。     

Toll样受体参与小鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的探讨Toll样受体是否参与小鼠肝脏缺血再灌注损伤及其机制. 方法用Toll样受体缺损小鼠(C3H/Hej,Hej组)和野生型(C3H/Heouj,Heouj组)小鼠复制部分肝脏缺血再灌注损伤模型,于缺血45min,再灌注1h和3h处死动物,检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和血清肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量;并以northern blot及髓过氧化物酶(MPO)试验分别检测缺血肝组织TNFα mRNA的表达和MPO的含量. 结果 (1)再灌注1、3h,与假手术组相比,小鼠血浆AST明显升高,但Hej组明显低于Heouj组(661.83U/L±106.09U/L和1215.5U/L±174.03U/L,t＝-6.65,P<0.01;1145.17U/L±132.43U/L和2958.17U/L±186.81U/L,t＝-5.57,P<0.01);(2)再灌注3h时,与假手术组相比,Hej组和Heouj组小鼠血清TNFα浓度明显升高,且前者明显低于后者(152.39pg/ml±43.3pg/ml和249.12pg/ml±51.89pg/ml,t＝-3.13,P<0.05);(3)再灌注1h,除假手术组外,Hej组和Heouj组小鼠缺血肝组织内可见TNFα mRNA的表达,但前者的表达水平明显低于后者,杂交带密度分析显示两者之间差异有显著性 (80.3±28.8与189.4±24.6,t＝-3.25,P<0.05);(4)再灌注3h,与假手术组相比,Hej组和Heouj组小鼠缺血肝组织内MPO含量明显升高,且前者含量明显低于后者(0.059±0.004和0.173±0.025,F＝33.49,P<0.01). 结论 Toll样受体可能通过其介导的炎性通路参与了小鼠肝脏缺血再灌注损伤.     

持续温热腹腔灌注对大鼠外周血NK细胞活性和腹腔器官的影响

通过在大鼠建立温热灌注模型，研究了（42±1）℃、1h温热生理盐水腹腔持续灌注对外周血NK细胞活性和腹腔内器官的影响。结果发现温热灌注后外周血NK细胞活性短暂上升，2周时恢复正常。术后2周内可见脾小体普遍增大，动脉周围淋巴鞘增宽。腹腔内无明显粘连。肝、肾无肉眼可见病变。术后1d时血浆谷丙转氨酶显著升高，2周内恢复。白蛋白术后下降较快。术后1d时镜下见肝浅层细胞胞浆疏松化，5d时正常。2（2／10）例术后1d时肠粘膜糜烂，2周可恢复。结果表明（42±1）℃、1h腹腔温热灌注可增强大鼠NK细胞杀伤活性，对术后早期抗肿瘤免疫可产生有利影响。同时对大鼠腹内器官损伤作用轻微。易受热损伤的器官为肠粘膜及肝脏。     

核素显像早期诊断急性绞窄性肠梗阻的实验研究

实验用兔制成急性绞窄性肠梗阻的动物模型。制模后1h及4h,静脉注射显像剂~(99m)Tc—PYP。然后用SPECT(单光子发射计算机断层)进行腹部平面显像的动态观察,并测定感兴趣区的摄取比值。结果显示所有实验组动物注射显像剂后绞窄肠段所在腹侧出现放射性浓聚。显像部位感兴趣区摄取比值明显大于对照组。说明早期绞窄缺血肠段有显像剂的聚集。提示采用SPECT的核素显像可作为早期诊断急性肠绞窄的有价值的辅助手段。