新型隐球菌脑膜炎的临床分析

目的 分析新型隐球菌脑膜炎的临床及脑脊液改变特点。方法 对2例新型隐球菌脑膜炎进行回顾性分析。结果 2例病人均有发热、头痛、脑膜刺激征阳性。突出特点是颅内压力显著增高，脑脊液涂片墨汁染色1例在入院后首次检查发现新型隐球菌，另1例反复多次检查才发现新型隐球菌。死亡1例，痊愈1例。结论 新型隐球菌脑膜炎除脑膜炎的表现外，突出特点是颅内压力显著增高，脑脊液墨汁染色查见新型隐球菌是确诊的依据，但需多次检查才能发现新型隐球菌，导致诊断困难，不能及时抗真菌治疗，本病预后差，病死率高。     

佛山市认知功能障碍患者就诊状况调查

目的了解本地区综合性医院神经内科门诊认知功能障碍患者的就诊情况及痴呆中各种亚型的分布情况,及早发现轻度认知功能障碍患者,以助于提高认知功能障碍患者的临床诊断治疗水平,为政府制定相关政策提供客观数据资料。方法对2009-09-15-12-25我院神经内科门诊就诊病人进行认知功能调查。采用初筛、筛查、评定和临床诊断三阶段法。痴呆及其亚型的诊断均采用国际通用标准。结果第一阶段调查神经内科门诊患者8 003例,完成老年人认知功能减退知情者问卷(IQCODE)表2 693例,其中IQCODE得分阳性406例;第二阶段接受简易精神状态检查表(MMSE)检查者323例,正常189例,异常者134例,失访/拒查MMSE 83例;第三阶段完成综合量表评估111例,其中轻度认知障碍38例,痴呆69例,假性痴呆(抑郁障碍所致)4例,痴呆患者中,阿尔茨海默病25例,血管性痴呆24例,混合型痴呆13例,其他类型痴呆7例;家属/照料者完成问卷31例,结果显示19.4%家属/照料者认为对痴呆完全不了解,67.7%家属/照料者认为对痴呆了解有限,9.7%认为对痴呆了解较好,仅3.2%认为对痴呆非常了解。结论神经科门诊患者老年期痴呆较常见,阿尔茨海默病与血管性痴呆患病率相当,对60岁以上门诊患者进行常规认知功能筛选,有利于早期诊断痴呆,及早发现轻度认知功能障碍患者。     

质粒表达型siRNA对人近端肾小管上皮细胞cubilin表达的抑制作用

目的 观察cubilin siRNA真核表达载体对人近端肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell line,HKC)cubilin基因的特异性抑制作用.方法 针对人cubilin基因设计并构建siRNA真核表达载体pSUPER EGFP-C1和pSUPER EGFP-C2,转染HKC,经荧光定量PCR(FQ-PCR)检测cubilin mRNA的表达、不同浓度的人血清白蛋白(HSA)刺激正常HKC及转染重组质粒的HKC 24 h后cubilin mRNA的表达,并通过激光共聚焦扫描荧光显微镜观察HKC对白蛋白摄取情况的变化.结果 FQ-PCR显示HSA刺激正常HKC后cubilin mRNA表达具有剂量依赖性.与正常对照组相比,两个重组质粒均可部分抑制HKC cubilin表达,抑制效率分别为66%和37%,HSA刺激转染pSUPER EGFP-C1、pSU-PER EGFP-C2的HKC后cubiin mRNA水平较正常对照组比较分别下降50%、34%,转染了重组质粒的HKC对白蛋白的摄取明显减少.结论 成功地构建了针对人cubilin基因的RNA干扰真核表达载体,表达型siRNA可抑制肾小管上皮细胞cubilin基因的表达及对白蛋白的摄取.     

人NaDC1基因近端启动子生物信息学分析及载体构建

目的对人NaDC1（hNaDC1）基因近端启动子进行生物信息学分析,预测可能的调控区域及顺式元件,并构建相应基因序列萤火虫荧光素酶报告基因表达载体。方法使用First EF程序分析并获得hNaDC1基因近端启动子序列,使用MatInspector5.0软件对近端启动子序列中的转录因子结合位点进行预测。PCR法扩增hNaDC1基因近端启动子序列,PCR产物经KpnⅠ和HindⅢ双酶切后定向克隆到pGL3-Basic载体。重组质粒行KpnⅠ和HindⅢ双酶切及测序鉴定。结果使用FirstEF程序获得长度为2.4kb（-2232/＋136）的hNaDC1基因近端启动子序列。MatInspector5.0程序分析显示该基因序列共含有152个74种顺式作用元件。KpnⅠ和HindⅢ双酶切及测序鉴定证实构建的pGL3-hNaDC1A质粒插入片段正确无误。结论成功构建hNaDC1基因近端启动子转录调控序列萤火虫荧光素酶报告基因表达载体,为利用双荧光素酶报告基因检测系统研究hNaDC1基因近端启动子转录调控元件的分布及其性质提供了基本试验条件。     

肿瘤免疫检查点靶向治疗的研究进展

 靶向免疫检查点的治疗是众多抗肿瘤免疫的有效策略之一,在抗肿瘤免疫治疗中诱发持续的肿瘤缓解。抗CTLA-4单抗,抗PD-1单抗以及抗PD-L1单抗的安全性及临床疗效研究为肿瘤治疗带来了新突破,针对免疫检查点的靶向治疗已成为肿瘤治疗的新方向。本文对近年来与肿瘤免疫靶向治疗的研究进展进行综述。     

肝癌复发转移的研究

目的：通过实验和临床研究为肝部根治性切除后复发转移提供预测指标和预防方法,方法：用组织块肝原位移植建立高转移人肝癌裸鼠模型,用该模型建立高转移潜能人肝癌细胞系,用分子生物学方法研究肝部侵袭性有关变化,并由此设计实验性干预治疗,开展预防复发转移的临床实验。结果：（1）建成在肺、肝和淋巴结高转移的人肝癌裸鼠模型LCI－D20,建成高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97。（2）初步摸清与肝癌侵袭性呈正、负相关的分子水平变化。（3）发现染色体8p缺失与肝癌转移有关。（4）验血提示血栓调节蛋白与肝内播散呈负相关,细胞间粘附分子－1、纤溶酶原激活物受体的抑制剂（PAI－1）和血内皮生长因子（VEGF）水平与肝癌侵袭转移呈正相关。（5）用LCI－D20模型,证实TNP470、苏拉明、反义VEGF、突变型flk-1相基因转染、羧基胺基咪唑,Endostain、干扰素α等抗血管生成剂有抑制肝癌生长和转移作用。反义H-ras、BB94或肝素也有类似作用。（6）根治性切除后经动脉化学药物治疗（化疗）,化学药物栓塞合并干扰素或LAK细胞治疗使3年复发率有所降低。结论：肝癌侵袭性相关的分子水平变化与其他实体瘤相仿,小肝癌的生物学特性比大肝癌略好, 这些研究为复发转移的预测和预防提供了有潜在意义的线索。     

滑膜肉瘤X线、CT及MRI表现

目的:分析滑膜肉瘤的X线、CT和MRI表现,旨在提高对本病的认识及早期诊断水平。方法:回顾性分析17例经病理证实的滑膜肉瘤X线平片、CT、MRI表现。结果:13例位于四肢、3例位于躯干、1例位于左肺上叶;X线、CT显示肿块密度低于肌肉,密度多不均匀,其中4例肿块内出现骨化或钙化,3例出现相邻骨骨质破坏,4例邻近骨受压骨吸收。3例肿块MRI表现为卵圆状、分叶状团块,边界清晰,信号均一,T1WI与肌肉信号相同,T2WI呈明显高信号;8例肿块在T1WI为"三重信号",T2WI压脂像见"铺路石"征;T1序列增强扫描,5例均表现为肿块内絮片状明显不均匀强化,间隔明显强化。结论:①滑膜肉瘤影像学具有一定的特征。②对于滑膜肉瘤,X线、CT联合MRI可更全面显示其影像学特征,有利于肿瘤定性和鉴别。     

人宫颈癌致癌基因的原核表达与多克隆抗体制备

目的构建人宫颈癌致癌基因HCCR-1167-360片段的重组质粒,在原核细胞中表达并鉴定。方法从培养的人肝癌细胞株HepG2中提取总RNA,经RT-PCR扩增出HCCR-1167-360的cDNA片段,将其克隆到pGEM-T-Easy克隆载体中,将测序正确的HCCR-1167-360基因连接到pET30a(+)表达载体中,IPTG诱导在BL21中进行表达,用SDS-PAGE检测表达产物。采用初步纯化和割胶纯化方法,获得较纯的重组蛋白,采用弗氏佐剂方法免疫兔子,收获多克隆抗体,用Wastern blot鉴定重组蛋白的免疫原性。结果经测序证明获得了HCCR-1167-360基因片段。SDS-PAGE分析,HCCR-1167-360在BL21中获得表达,其相对分子质量为26kD左右,主要以包涵体形式存在。免疫兔子获得了HCCR-1167-360多克隆抗体,经Wastern blot检测结果表明获得了特异性的多克隆抗体。结论获得具有抗原性的HCCR-1167-360原核表达蛋白。     

小续命汤“从风论治”思想对骨痹辨治的启示

骨痹为伤科常见病证,历代医家多认为该病因感受风寒湿邪所致,初起为实证,病久不愈则肝肾不足,或虚实夹杂。病机多因风而起,故治当"从风论治";小续命汤方善治风病,以运化气血、调和阴阳为用,各经咸宜,可用于骨痹初期及后期的治疗;临证中,在"从风论治"思想指导下,以小续命汤方加减治疗各类骨痹,每获良效,值得推广运用。     

DNA载体介导的RNAi抑制肝癌细胞的骨桥蛋白表达及侵袭性

目的探讨骨桥蛋白(OPN)对高转移潜能人肝癌细胞系HCCLM3侵袭性影响。方法构建两个针对人OPN mRNA干扰质粒pENTR~(TM)/U6-INF(pINF-1、2)及对照质粒pENTR~(TM)/ U6-CTR(pCTR),并将其转染HCCLM3细胞。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定OPN的mR—NA表达量；Western印迹测定OPN蛋白的表达量；噻唑蓝(MTT)比色法实验检测HCCLM3的增殖力；Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭力的改变；结果与仅加转染试剂的空白对照组(2．01±0．13)相比。转染24h后,plNF-1组OPN mRNA用RT-PCR无法检测到,pINF-2组mRNA(1．00±0．12)下降50%,而pCTR组mRNA(2．02±0．13)表达差异无统计学意义(P＞0．05)。转染48h后plNF-1组OPN蛋白表达(0．11±0．02)与空白对照组(1．02±0．11)相比下降90%；转染plNF-1后,HCC-LM3细胞的增殖力下降2%。但与对照组相比差异无统计学意义(P＞0．05)。Matrigel侵袭实验结果显示,与空白对照组(28．4±1．5)相比,转染plNF-1后HCCLM3细胞穿过人工基底膜的数量(10．2±0．8)明显减少,差异有统计学意义(P＜0．01)。结论pINF-1可以特异性抑制高转移肝癌细胞系HCCLM3中OPN的表达,并显著降低其侵袭力,但对细胞增殖力影响不大,此技术有望成为抑制肝癌侵袭转移的新途径。