医学分子生物学考试模式改革

考试是促使学生时课程全面系统再学习的一个好方法，是检查学生掌握本学科知识的重要手段．也是教学过程的重要组成部分。分子生物学是医学院校各专业一门重要的基础课程。通过多元化考试模式的不断完善．有助于教师及时发现判定教学工作的成效，采取有针对性的改进措施改进教学方法，保证教学质量。     

神经细胞体外分离培养的比较研究

目的：对神经元分离、培养的不同实验方法进行比较研究。方法：取成年小鼠和新生小鼠的脑皮质或全脑组织，经胰蛋白酶消化分离后，分别在普通RPMI-1640培养基、含阿糖胞苷的培养基、含Neurol Medium和B27的培养基3种不同条件下进行培养，观察神经元的生长情况。结果：采用普通RPMI-1640培养基培养的神经元被胶质细胞掩盖，形态不典型，神经元比例小；用含阿糖胞苷的培养基培养的神经元所含比例较高，但形态不太典型；用含Neurol Medium和M27的培养基培养的神经元形态典型，生长良好。结论：采用含Neurol Medium和M27的培养基可以从的乳鼠的全脑组织中培养出形态典型，生长良好，较为纯净的神经元，方法简便，得率高，这为进一步深入探讨其功能奠定了良好基础。     

类法尼醇X受体在巨噬细胞中下调单核细胞趋化蛋白1的表达

目的研究小鼠巨噬细胞株ANA-1中类法尼醇X受体的表达情况,并进一步研究类法尼醇X受体天然配体鹅脱氧胆酸在ANA-1中对单核细胞趋化蛋白1表达的影响,以探讨类法尼醇X受体在动脉粥样硬化发生发展中的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应检测类法尼醇X受体在ANA-1细胞中的表达,及鹅脱氧胆酸处理后单核细胞趋化蛋白1的转录水平,Westernblot检测类法尼醇X受体的表达及其激活后对自身蛋白表达的调节,以及单核细胞趋化蛋白1蛋白的表达水平。结果类法尼醇X受体在ANA-1中表达,并依赖鹅脱氧胆酸浓度自我上调,鹅脱氧胆酸能显著下调单核细胞趋化蛋白1的表达水平(P<0.05)。结论类法尼醇X受体在小鼠巨噬细胞株ANA-1中组成型表达并呈配体浓度依赖性自我上调,类法尼醇X受体激活后可通过直接或间接方式下调单核细胞趋化蛋白1的表达。     

蛋白质组学技术与肿瘤研究

蛋白质组学作为后基因组研究的一个重要组成部分 ,借助蛋白质组学研究技术 ,可在蛋白质水平进一步揭示肿瘤的发病机制 ,筛选、鉴定肿瘤特异性标记和特异性抗原以及有效的药物靶蛋白。     

神经元蛋白质磷酸化修饰分析方法的初步研究

目的　建立一种对神经细胞中的磷酸化蛋白质进行分离分析的方法。方法　培养新生乳小鼠神经细胞 ,加入 32 P- Na H2 PO4 2 .78× 10 6 Bq/ ml,37℃孵育 1.5 h。刺激组分别加入表皮生长因子 (EGF) 2 0 ng/ m l或胰岛素10 0 nm ol/ L,对照组加入等量的培养基 ,作用不同时间后液氮终止反应。裂解细胞 ,用 Bio- Rad DC Protein Assaykit测定细胞蛋白质含量 ,双向电泳分离细胞蛋白。放射自显影。结果　 1双向电泳自显影图谱显示近数十个蛋白质斑点 ,绝大部分集中于 p H偏酸性和中性区域 ,p H4 .6～ 6 .5 ,其相对分子质量主要介于 2 0× 10 3～ 130× 10 3之间。2 EGF、胰岛素刺激不同时间后虽出现有磷酸化蛋白质斑点的增加或消失 ,但更多表现为某些磷酸化蛋白质斑点灰度的增强或减弱。 3对比分析发现 ,放射自显影图谱中只有少数斑点出现在双向电泳 Coom assie Brilliant BlueR- 2 5 0染色图谱中 ,提示神经细胞中的大多数磷酸化蛋白质为低丰度蛋白。结论　采用本研究建立的双向电泳和放射自显影技术可对神经细胞中的蛋白质可逆磷酸化修饰状态进行较为全面、动态的分析 ,方法灵敏、特异性强 ,可为细胞信息传递功能蛋白质组的研究奠定了基础     

ERK信号通路通过CXCR-4作用于乳腺癌细胞的侵袭转移研究

目的:ERK信号通路与肿瘤的侵袭转移密切相关,本研究拟阻断ERK通路,检测乳腺癌细胞CXCR-4表达变化,分析ERK信号通路对乳腺癌细胞CXCR-4表达的影响,探讨乳腺癌转移的分子机制。方法:以培养的人乳腺癌MDA-MB-435细胞为研究对象,加入ERK特异性阻断剂PD98059为实验组,加入等量生理盐水为对照组,作用于人乳腺癌MDA-MB-435细胞24 h后,采用Western blotting法检测ERK通路重要因子ERK1/2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达;采用流式细胞术检测细胞表面CXCR-4表达;采用Transwell侵袭实验观察空白对照组、CXCR-4配体SDF-1α组、ERK通路阻断组和SDF-1α+ERK阻断组细胞的侵袭转移情况。结果 :ERK通路被有效阻断后,CXCR-4表达量明显下调;在趋化因子受体CXCR-4的配体SDF-1α的作用下,细胞侵袭能力提高,而在ERK通路阻断后,细胞侵袭能力明显降低且SDF-1α不能逆转这种降低效应反而具有协同作用。结论:在人乳腺癌MDA-MB-435细胞中,ERK信号通路可能通过上调CXCR-4的表达参与乳腺癌细胞的侵袭和转移。     

去甲斑蝥素体外抑制人胰腺癌细胞株PANC-1增殖的实验研究

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)体外抑制人胰腺癌细胞株PANC-1的增殖作用.方法 以不同浓度NCTD处理PANC-1细胞24 h后,采用MTT法检测其对PANC-1细胞的生长抑制作用;Hoechst 33258染色观察PANC-1细胞形态的变化;Western blot印迹法检测NF-κ B p65和AKT蛋白的表达.结果 NCTD可导致处理的细胞增殖速度减慢,且抑制效应随药物剂量的增加而增强,细胞出现典型凋亡形态学改变,NF-κB p65和AKT蛋白的表达均出现明显下降(P＜0.01).结论 去甲斑蝥素能明显抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能是通过下调NF-κB p65和AKT的表达来实现的.     

培养神经元及肝细胞蛋白质样品制备方法的比较研究

目的 :优化神经元和肝细胞蛋白样品的制备方法 ,以提高双向电泳分析结果的正确性和可靠性。方法 :采用不同的细胞裂解液在不同的裂解条件下提取培养神经元或肝细胞的全细胞蛋白质 ,考马斯亮蓝G - 2 5 0测定蛋白质含量 ,SDS -PAGE、双向电泳对蛋白质进行电泳分离。结果 :蛋白质含量测定及电泳图谱的对比分析可见 ,用酶消化法和机械收集法所得蛋白质样品含量均较直接裂解法低 ;蛋白质抽提液中还原剂及去污剂的不同选择对结果的影响较大。结论 :采用培养瓶中细胞直接裂解法较酶消化或机械收集法收集细胞再提取蛋白质更为有效 ,还原剂TBP有利于提高蛋白质双向电泳结果的质量 ,在去污剂的使用方面神经元裂解宜采用 4 %CHAPS ,而肝细胞裂解则宜采用 2 %TritonX - 10 0。     

不同剂量胰岛素对缺血再灌注肾组织的影响

目的 :观察家兔肾缺血再灌注 (ischemicreperfusion ,IR)过程中 ,外源性胰岛素对肾组织功能和超微结构的影响。方法 :日本大耳白兔分为 :对照组、单纯缺血再灌注组 (IR组 )、胰岛素处理组 (Ins +IR组 ) 3组 ,Ins +IR组再灌注的同时给予胰岛素溶液 (Ins 3IU ,6IU ,12IU/kg.wt) ,对照组和IR组则给予等量生理盐水。分别观察 3组动物缺血再灌注 2h、4 8h时 ,血清尿素氮 (BUN)含量变化 ,以及肾组织结构改变。结果 :肾缺血再灌注 4 8h ,IR组血清BUN较对照组显著升高 (P <0 .0 0 1) ,而小剂量胰岛素组与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;中剂量胰岛素组血清BUN仍显著高于对照组 (P <0 .0 0 1) ,大剂量胰岛素组BUN比IR更高 (P <0 .0 5 )。光镜及电镜结果显示 ,对照组结构未见异常 ,IR组肾组织呈变性和坏死改变 ,小剂量胰岛素组肾组织轻度变性 ,中、大剂量胰岛素组与对照组结构改变类似。结论 :外源性小剂量胰岛素具有抗家兔急性缺血再灌注性肾损伤的作用。