HCC患者GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化状态研究

目的 检测人原发性肝癌（HCC）中抑癌基因GSTP1的启动子区CpG岛甲基化的状况，并探讨其在肝癌发生中的作用。方法 以已知的GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化阳性的乳腺癌细胞株MCF-7为阳性对照，以11例正常人外周血单核细胞（PBMC）DNA为阴性对照，用甲基化特异性PCR（MSP）的方法对26例肝细胞癌患者的癌、远癌组织中GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化的状态进行检测。结果 在26例原发性肝癌中GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化在癌组织为88％（23／26），在远癌组织中为69％（18／26）；而在11例正常人外周血单核细胞均为甲基化阴性。结论 抑癌基因GSTP1基因启动子区CpG岛高甲基化可能是肝癌发生早期的分子事件，在人原发性肝癌的发生发展中具有重要的作用。     

限制性内切酶结合半巢式PCR法检测人肝癌P16抑癌基因启动子区甲基化研究

目的 建立甲基化敏感的限制性内切酶结合半巢式降落PCR方法,研究原发性肝癌P16基因启动子区甲基化状态.方法 针对P16基因启动子区富含CpG的序列,设计3条引物,进行半巢式降落PCR扩增,检测原发性肝癌P16基因启动子区甲基化状态;并将P16基因启动子区340 bp片段克隆到pMD18-T载体,E.coli JM109扩增此质粒后经CpG甲基化酶M.Sss Ⅰ处理,再用Hpa Ⅱ酶切验证获得P16基因启动子区甲基化阳性的质粒P16Pm 并进行特异性和灵敏度实验.以此甲基化敏感的限制性内切酶结合半巢式降落PCR方法检测40例人原发性肝癌和3例正常人肝组织DNA样品的P16基因启动子区甲基化状态.结果 所采用的Hpa Ⅱ酶切后半巢式PCR方法的特异性强,灵敏度达100 fg;对40例人原发性肝癌组织DNA样品P16基因的启动子区甲基化状态检测显示甲基化阳性率为30%(12/40),3例正常人肝组织均为阴性(0/3).结论 P16抑癌基因启动子区甲基化可能与肝癌发生发展有关.本实验方法简便、成本低廉,并有高度的特异性与灵敏度,在大规模检查中有实际应用价值.     

不同亚类小鼠IgG对SpA和SpG单结构域构成的随机组合噬菌体文库的体外进化研究

目的判断不同亚类小鼠IgG Fc段构像及与SpA或SpG的结合特点,采用不同亚类小鼠IgG对SpA和SpG单结构域构成的随机组合噬菌体展示文库进行亲和筛选。方法不同亚类小鼠IgG对噬菌体文库进行亲和筛选,获得具有结合优势的单结构域排列组合,噬菌体ELISA法来比较其与不同亚类小鼠IgG的结合特性,优势组合分子经原核表达蛋白,HRP标记后,ELISA法进一步来比较其与小鼠不同亚类IgG的结合特性。结果小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3分别经过5、4、5和5轮亲和筛选后,其文库的展示片段大小均为2个domain,表明进化完全。测序分析显示：小鼠 IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3筛选得到的具有结合优势组合分子分别是D-D、D-D、A-C和D-C。噬菌体 ELISA验证结合优势组合分子对小鼠不同亚类IgG的结合能力;蛋白经HRP标记后的ELISA结果和筛选不完全一致,但其结合强弱具有一致性,均为：IgG3>IgG2a>IgG2b>IgG1。结论得到3种不存在于天然SpA、SpG分子中,分别与不同亚类小鼠IgG具有较强结合作用的新型组合分子D-D、A-C和D-C,为进一步研究IgG Fc段构像及与SpA或SpG的结合特点提供了新的参考分子。     

基孔肯雅病毒包膜蛋白E2的全基因合成及原核表达

目的通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1～404 aa)及其跨膜疏水区(351～378 aa)缺失突变体E2(1～350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响。方法利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析,根据GenBank数据库中CHIKV-E2氨基酸序列获得其对应的基因序列。结合重叠延伸PCR(OE-PCR)原理设计用于全基因合成的核酸引物对CHIKV-E2全长基因(404 aa)进行体外合成,构建全长E2蛋白及其缺失突变体原核表达质粒,将序列正确的两种重组质粒分别转至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组质粒的表达情况。结果 OE-PCR法成功合成了大小为1 212 bp的编码CHIKV-E2(1～404 aa)蛋白的全长基因,构建了全长E2蛋白及其缺失突变体重组表达质粒pET21b-E2(1～404)和pET21b-E2(1～350),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果显示缺失突变体pET21b-E2(1～350)融合蛋白表达量较pET21b-E2(1～404)有明显提高。结论 E2蛋白跨膜疏水区(351～378 aa)对该蛋白的原核表达具有重要影响,缺失该疏水区的突变体在大肠杆菌中表达量比全长E2蛋白表达量明显提高。     

药品不良反应117例报告分析

目的分析义乌市药品不良反应（ADR）的发生情况,探讨发生不良反应的因素,促进临床合理用药。方法对117例ADR报告分别从患者年龄、给药途径、药品种类以及临床表现等方面进行统计分析。结果117例ADR中,老年患者69例,占58．97％;以静脉滴注方式给药引发的ADR最多,共67例,占57．26％;抗菌药引起的ADR,共56例,占47．86％;临床表现以皮肤及其附件的损害最为常见。结论ADR监测可减少和避免药物不良事件的发生。     

"一个半综合征"1例

患者，男，70岁。“高血压”病史5年，因“突然头晕、复视、左侧肢体无力1小时”而于2001-04-15入院。检查：嗜睡、血压26.7/13.3kPa，右眼内收及外展均不能，左眼上、下视正常，双侧瞳孔小，直径1.0mm，光反应( )，右侧额纹消失，右侧睫毛征( )，右侧鼻唇沟浅，右侧面部痛、温觉减弱，左侧上下肢肌力Ⅰ级，肌张力高，左侧Babinski征( )，双侧Chaddock征( )，颈强( )。头部CT示：桥脑右侧被盖部出血，破入脑室，量约4ml。降血压、降颅压等内科保守治疗，一个月后患者显效出院。讨论：桥脑出血主要在被盖部，出现交叉瘫是常见的。但此患者…     

噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库的构建

目的构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选及结构和功能的研究打下基础。方法应用overlapping PCR制备Protein A的Z结构域。用含随机核苷酸序列的引物,制备对Z结构域的第10、13、27、28、31和32位氨基酸进行随机突变的定点随机突变体库。并在突变体片段两端引入KpnⅠ位点,3′端引入3个氨基酸大小随机连接肽的序列。经KpnⅠ酶切后随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S。克隆产物转化大肠杆菌TG1,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示定点随机突变组合文库。结果该定点随机突变组合文库的转化子数目为6.4×106个,滴度为1.4×1015TU/L;文库中含0.72以上的阳性克隆,其中有2个单结构域的阳性克隆占0.15;15个样品的序列分析显示各突变位点和随机连接肽的氨基酸序列呈随机性分布。结论成功构建了噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,该库库容量在一级结构上具有良好的随机性和多样性,可满足体外分子进化研究的要求。     

高效液相色谱法测定康尔心胶囊中人参皂苷Rgl的含量

目的:建立康尔心胶囊中人参皂苷Rgl的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法(HPLC法)测定.色谱柱为Lichrospher 5-C18柱(5μm,200 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-水(25:75),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为203nm.结果:人参皂苷Rgl在1.005 6～10.056μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 8.平均回收率为99.9%,RSD为1.03%.结论:HPLC法简便、准确、重现性好,可用于康尔心胶囊含量测定和质量控制.     

肝癌相关基因甲基化谱研究进展

研究发现肝细胞癌的发生发展涉及到多条分子途径的基因启动子区CpG岛甲基化改变,基因启动子区CpG岛甲基化异常可能是一个早期分子事件,其发生具有基因特异性和肿瘤特异性.由此为原发性肝癌的早期诊断和疾病监测找到了新的分子标志物.现对与肝细胞癌发生相关基因甲基化的研究现状作一综述.     

蓖麻油餐用于足月妊娠引产158例临床观察

静滴催产素是足月妊娠引产广泛应用的方法之一。近几年来，有资料表明蓖麻油餐对终止晚期妊娠有一定作用"'。X观察蓖麻油餐在足月妊娠引产中的效果及反应，我们进行了本组实验。1资料与方法1．1病例选择本组为1996年4月～1998年4月在我院分娩的初产妇158名，纳人标准为单胎头位足月妊娠，无内、外科并发症，因胎膜早破、胎盘老化及孕周超过42周需行引产及计划分娩者，排除头先露以外的胎位异常、头盆不称等引产禁忌证，随机分为实验组（蓖麻油餐组）和对照组（催产素组）c两组年龄、孕周、孕次及宫颈成熟度等方面相差无显著性（7＞005），…