用不同方法从大容量噬菌体抗体库中筛选抗完整食管癌细胞的单链抗体

目的:初步探索从天然的单链大容量噬菌体抗体库中筛选肿瘤细胞抗体的技术策略.方法:通过两种方法,即2%多聚甲醛固定细胞筛选法(PF)及活细胞直接筛选法(NF),经过4轮"吸附-洗脱-扩增"的淘筛过程,对食管癌KYSE-170细胞进行筛选,得到抗食管癌细胞的噬菌体抗体,完善了噬菌体抗体库筛选完整细胞的特异性抗体的技术策略.并且进一步制备了其可溶性抗体.结果:活细胞NF组的筛选阳性率高于2%多聚甲醛固定PF组,筛选特异性抗体的阳性率分别为25.00%和12.50%,两组的差异具有统计学意义.结论:利用单链大容量抗体库可以采用不同的筛选方法成功制备与肿瘤细胞结合的噬菌体抗体,为今后的研究和应用奠定基础.     

间歇小剂量胰岛素静注治疗糖尿病酮症酸中毒30例疗效分析

本文总结30例间歇小剂量胰岛素(0.1单位/公斤/小时)静注治疗糖尿病酮症酸中毒(DKA)的治疗效果,显示与持续静滴小剂量胰岛素治疗DKA同样有效。在治疗后的6～8小时内血糖稳步降至适当水平(降至≤250毫克/分升),无出现血糖明显波动、低血糖反应及脑水肿。间歇静注时在补充血容量时不需另建立输液途径以求纠正失水,故方法更为简便,更易掌握。此外积极补溶、抗感染、加强临床观察是DKA抢救成功的关键。     

黄芪对黄曲霉毒素B_1致突变作用的影响

1 材料 中药黄芪自福建省中医学院国医堂购得,经鉴定为豆科多年生草本植物黄芪[Astragalus mem-branaceus(Fisch ge]的根。水煎浓缩至相当每ml含生药0.12g、0.2g、0.5g、1g、2g5个浓度。AFB_1为sigma公司产品,溶剂为二甲基亚砜(DMSO,上海金山化工厂)由福建省卫生防疫站分装成1mg/ml安瓿,低温避光保存,用时以DMSO稀释至相应浓度。实验动物由福建中医学院实验动物中心提供,昆明种小白鼠56只,体重18～22g,雌雄各半,按完全随机区组分成7组。设AFB_1阳性对照组,DMSO溶剂对照组和5个中药剂量组(2.5g/kg、5g/kg、10g/kg、20g/kg、40g/kg组)。每组8只,分为2笼,25℃按清洁级标准饲养。     

未经治疗的原发性甲状旁腺功能亢进的长期随访

愈来愈多人认为原发性甲状旁腺功能亢进(甲旁亢)是一种常见病。在美国每年有60,000新发病例;通过常规检查血清钙在英国估计每年有13,000新发病例。很多病人没有症状,典型症状包括骨痛、肾石和腹痛,但实际上却不常见。过去对所有甲旁亢患者都主张手术探查,其理由是此病可发生急性高钙血症、进行性骨痛及肾功能减退,如不及时手术,至晚期则因身体情况不能手术而失去治疗机会。本文报告14例     

经肝动脉化疗栓塞联合射频消融术对中晚期原发性肝癌的近期疗效分析

目的探讨经肝动脉化疗栓塞(TACE)联合经皮肝穿刺射频消融术(RFA)治疗中晚期原发性肝癌(PHC)的临床疗效和安全性。方法将125例中晚期PHC患者按治疗方法不同分为TACE组(40例)、RFA组(38例)及TACE+RFA组(47例),观察3组近期疗效和并发症发生情况;采用Kaplan-Meier法计算复发率、生存率及中位生存期,比较采用Log-Rank时序检验。结果 TACE+RFA组总有效率为74.5%,明显高于TACE组的52.5%和RFA组的47.4%(P0.05);TACE+RFA组1、2年复发率分别为17.0%、31.9%,均明显低于TACE组(37.5%、57.5%)和RFA组(42.1%、60.5%)(P0.05);TACE+RFA组1、2年生存率分别为89.4%、70.2%,均明显高于TACE组(70.0%、47.5%)和RFA组(68.4%、44.7%)(P0.05);且TACE+RFA组中位生存期(26个月)明显长于TACE组(21个月)和RFA组(19个月)(P0.05)。结论 TACE联合RFA可有效治疗中晚期PHC,减少术后复发率并提高生存率,延长患者生存期,其疗效优于单纯TACE或单纯RFA治疗。     

用噬菌体蛋白Ⅸ展示抗HBsAg分子Fab段

目的　用丝状噬菌体外壳蛋白Ⅸ (pⅨ )展示抗体Fab段 ,并与外壳蛋白Ⅲ (pⅢ )展示效果进行比较。方法　采用PCR方法钓取噬菌体蛋白Ⅸ基因 ,构建pⅨ展示抗乙肝表面抗原Fab的表达载体 ,制备噬菌体抗体 ,鉴定其抗原结合活性和Fab呈现水平 ,观察了噬菌体洗脱回收效率 ,并与pⅢ展示进行比较。结果　噬菌体pⅨ可以展示有功能活性的抗体Fab段 ,但对Fab的展示率低于pⅢ ,展示率的高低可能与pⅨ展示的外源蛋白分子量大小有关。“结合 洗脱 回收”实验显示 ,酸洗脱法回收的Fab pⅢ噬菌体的感染活性大为下降 ,而对Fab pⅨ噬菌体无影响。结论　pⅨ成功展示Fab段 ,讨论了pⅨ展示体系可能具有的优越性     

热点突变法提高人源抗TNF-α抗体的亲和力

目的　通过热点突变法对一株人源抗TNF αScFv进行体外亲和力成熟。方法　根据体内抗体亲和力成熟时V基因体细胞突变的热点 ,设计引物进行多步重叠PCR ,在本株ScFv的H CDR3和L CDR3热点部位引入随机突变 ,构建噬菌体抗体库 ,采用硫氰酸盐洗脱法对抗体库进行筛选 ,对选出的克隆测定其相对亲和力 ,并进一步将 4株转换表达成为可溶性Fab ,以非竞争ELISA法测定其亲和常数。结果　构建了库容为 1.8× 10 7的热点突变抗体库 ,筛选得到了多株亲和力明显提高的抗TNF α抗体的突变体 (最多达 10倍 )。结论　热点突变法是体外提高抗体亲和力的有效和可行的方法。     

重组人粒细胞集落刺激因子对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的治疗作用

目的观察重组人粒细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte colony stimulating factor,rhG CSF）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠的治疗效果并探讨相关机制。方法将40只小鼠随机分为2组,对照组10只不作处理,30只用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（纯度＞95%）多肽诱发建立EAE小鼠模型,死亡6只,剩余24只随机分为模型组和治疗组,各组12只,治疗组皮下注射rhG-CSF,模型组给予同等量的生理盐水。治疗期间对3组小鼠进行神经功能评分和体重检测;治疗2周后,取脑和脊髓制作标本行病理观察,劳克坚劳蓝染色进行脱髓鞘评分;流式细胞仪检测调节性T细胞和自然杀伤细胞比例的变化;蛋白质印迹法检测EAE小鼠胶质纤维酸性蛋白和髓鞘碱性蛋白的表达。结果与模型组相比,治疗组小鼠神经功能评分显著降低,髓炎性细胞浸润评分和脱髓鞘评分降低;调节性T细胞显著增加,自然杀伤细胞显著减少;蛋白质印迹法的结果提示治疗组小鼠胶质纤维酸性蛋白表达量下降,而髓鞘碱性蛋白表达量明显高于模型组。结论rhG-CSF对EAE具有显著治疗效果。     

赵智强辨治慢性萎缩性胃炎

赵智强教授认为,对于慢性萎缩性胃炎的中医论治,应当重点分析其病因病机,病因主要与外邪侵袭、饮食不节、情志失调、禀赋不足等有关,病机认为慢性萎缩性胃炎存在变迁的过程,脾胃虚弱为发病之本、气机阻滞为致病之标、痰瘀搏结为久病之源,在临证运用上以辛开苦降、寒温并用,治分虚实、攻补兼施,中西结合、预防癌变等3个方面为特点,处方上常常运用半夏泻心汤、左金丸、栀子干姜汤、连朴饮等,并善于根据患者不同的临床表现加减用药,思路灵活多变,切不可拘泥于一方一法。     

心理干预对功能性消化不良伴焦虑抑郁的疗效分析

目的分析功能性消化不良（FD）伴焦虑抑郁患者临床症状、SAS、SDS评分,探讨心理干预对FD伴焦虑抑郁患者临床症状及心理状况的影响。方法筛选出FD伴焦虑抑郁患者162例,随机分为两组,对照组75例,除药物治疗外无其它治疗,观察组87例,在药物治疗的基础上进行心理干预,比较干预前后的临床症状、心理状况的变化。结果干预后FD伴焦虑抑郁患者临床症状显著改善（P〈0.05）,SAS、SDS评分显著降低,干预前后差异有统计学意义（P〈0.05）,FD症状积分与SAS、SDS积分呈明显的直线正相关。结论焦虑抑郁水平和FD症状显著相关,对功能性消化不良（FD）伴焦虑抑郁患者进行心理干预,可以有效改善其临床症状及焦虑抑郁情绪。