神经干细胞原代培养及GABA能神经元的诱导分化

目的探讨神经干细胞的原代培养及γ-氨基丁酸(GABA)能神经元的诱导分化.方法取孕16 dWistar大鼠的胚鼠全脑,进行体外培养,并对培养的神经干细胞以及诱导分化的GABA能神经元进行鉴定.结果培养24h后,出现2～4个细胞的细胞球.分化2d后,神经球贴壁后伸出细长突起,并可和周边神经球伸出的突起连接.神经球周边可见大量散在贴壁的双极或多极细胞.免疫荧光染色可见神经球均有nestin、NF200、GFAP阳性细胞.取第3代神经球行GABA能神经元定向分化.分化24h后,实验组细胞球贴壁.3d后,实验组细胞球周边有大量散在分布细胞贴壁生长,胞体圆形较大,有1～2个细长突起.免疫荧光显示,实验组周边散在的贴壁细胞多为GAD65阳性细胞.GAD65阳性细胞分化率实验组(85.97±2.78)%、对照组(18.16±2.29)%,P<0.01.结论本实验利用寡核苷酸序列特异性阻断了bHLH基因家族的调控因子之一Hes1,解除了其对bHLH的抑制,促进了神经干细胞向神经元的分化.实验还发现,阻断Hes1后大大提高了神经干细胞向GABA神经元分化的比率.     

EGF、bFGF、NGF、RA对小鼠神经干细胞定向分化的调控

目的 观察EGF、bFGF、NGF、RA对小鼠神经十细胞(NSCs)增殖及定向分化的影响。方法 用无血清培养与单细胞克隆技术对小鼠胚胎脑组织进行分离、培养，随后分别加人EGF、bFGF、NGF、RA等因子观察其对NSCs定向分化的影响。结果 EGF培养的小鼠NSCs，2d后见细胞集落形成(典型克隆球)；克隆球中的细胞成圆形，形态规则，未见细胞突起，呈桑椹状聚集；经血清诱导分化后，则主要为星形胶质细胞，仅有个别的神经元。而bFGF培养的NSCs，生长良好，但克隆球数目较EGF组少，克隆球体积略小。3bFGF与EGF共同培养的NSCs，除诱导分化后，分化的细胞性质与EGF组的不同外，其余同EGF组。NGF对神经球的形成无明显的影响。RA组的克隆球数目量很少，形态以球形为主，部分细胞贴壁并出现突起。结论 EGF，bFGF对NSCs的增殖及分化种类均有一定的影响。而NGF与RA则主要影响其细胞的分化，且两者的共同点都是促使其向神经元方向分化。     

Cyclin D1/D2/D3 在大鼠脑胶质瘤组织中的表达

目的探讨细胞周期素(cyclin)D1/D2/D3在大鼠脑胶质瘤动物模型肿瘤组织中的表达.方法将体外培养大鼠C6胶质瘤细胞(细胞数为3×105个),借助动物立体定向仪接种于Wistar大鼠左侧尾状核区,解剖标本,行组织病理学检查,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化定性监测.随后检测肿瘤组织中cyclin D1/D2/D3蛋白表达.结果 cyclinD1/D2/D3均呈阳性表达.cyclin D1/D3主要在细胞核表达;cyclinD2则主要在胞浆表达,部分细胞核呈阳性,不同存活期荷瘤鼠其瘤组织中cyclin D1/D2/D3表达量不同.结论 cyclinD1/D2/D3的过分表达,对大鼠脑胶质瘤细胞增殖的失控起着一定的调节作用.荷瘤鼠生存期与cyclin D族的表达量呈负相关关系.     

循证护理在显微神经外科临床中的应用体会

总结分析循证护理在显微神经外科临床工作中的实施体会。其具体过程为显微神经外科临床循证护理的内容程序和基本技能。充分发挥循证护理的科学性优势，实现最佳护理。     

不同剂量γ射线照射对体外培养胶质瘤细胞系的影响及对神经功能的保护作用

目的:比较不同剂量γ射线对胶质瘤细胞系C6和SHG-44的影响,建立γ射线诱导胶质瘤细胞系C6和SHG-44凋亡研究的生物模型,探索γ射线照射对胶质瘤细胞周期的影响。方法:采用对数生长期的C6和SHG-44胶质瘤细胞经4,8,16,32和64Gy的γ射线照射后培养48h,用流式细胞仪进行细胞凋亡检测并分析细胞周期的改变。结果:不同剂量γ射线照射均可诱导C6和SHG-44胶质瘤细胞凋亡。C6细胞对照组、4,8,16,32和64Gy组照射后48h的凋亡百分数分别为(3.1±0.5),(16.7±0.6),(27.9±0.8),(27.3±0.4),(33.8±0.7)和(36.7±0.7),照射组凋亡率均高于对照组(t=30.16～67.65,P<0.01)。SHG-44细胞对照组,4,8,16,32和64Gy组照射后48h的凋亡率均高于对照组(t=35.51～103.79,P<0.01),但两组细胞的坏死比例均无明显增加(P>0.05)。SHG-44细胞对电离辐射更加敏感。两种细胞G0/G1期的细胞比例与γ射线照射剂量呈正相关;S期的细胞比例与照射剂量呈负相关。结论:以γ射线照射C6和SHG-44胶质瘤细胞可建立理想的射线诱导的细胞凋亡模型,γ射线照射可引起两种胶质瘤细胞系G1期阻滞和S期延迟。     

奥拉西坦对高血压脑出血术后恢复期患者日常生活活动和认知功能的影响

目的:采用随机、双盲、安慰剂对照的方法观察奥拉西坦对高血压脑出血术后恢复期患者日常生活活动和认知功能的干预效应,并了解其安全性。方法:实验于2004-03/09在解放军第四军医大学西京医院全军神经外科研究所进行。高血压脑出血脑内血肿清除术后7d且生命体征稳定的患者159例,随机分为奥拉西坦组82例和安慰剂组77例。服用奥拉西坦(400mg/粒)或安慰剂每日6粒,共服3个月。每个月随诊1次,以Barthel指数和神经功能缺损量表评估患者的日常生活活动水平,以长谷川痴呆量表评估患者的认知能力。结果:148例最终完成了3个月随访,其中奥拉西坦组76例,安慰剂组72例。①Barthel指数在治疗后1,2,3个月奥拉西坦组分别为(89.2±14.3,93.3±14.2,97.3±12.3),均优于安慰剂组的(75.8±29.3,81.3±27,79.8±25.3),差异有显著性意义(t=3.26,P<0.05)。②神经功能缺损量表在治疗第1个月奥拉西坦组(6.7±4.7)优于安慰剂组(9.6±6.8),第2,3个月差异两组有显著性意义。③长谷川痴呆量表分在治疗1,2,3个月奥拉西坦组为29.4±4.6,30.4±4.7,31.4±3.6,安慰剂组为27.6±6.4,27.9±5.1,28.6±5.4,差异有显著性意义(t=4.15,P<0.05)。④奥拉西坦的不良反应主要表现为头晕、失眠,并不影响患者继续治疗,发生率为4.9%(3/76),安慰剂组为3.7     

犬颅脑枪弹伤模型建立及其超微结构观察

颅脑火器伤具有致死、致残率高 ,救治难度大等特点 ,其死亡率在 30 %～4 0 %左右 ,历来居各部位火器伤之首[1,2 ] 。在火器伤致死的总人数中 ,颅脑伤几乎占 5 0 %。笔者在建立犬颅脑枪弹伤致伤模型的基础上 ,检测了伤区组织的超微结构改变 ,旨在探讨颅脑火器伤组织病理学的变化及其影响。现总结报告如下。一、材料与方法1.动物及分组 :杂种犬 14只 ,雌雄不拘 ,体重 (18.6± 4 .3)kg ,随机分为脑贯通伤 (penetratingcraniocerebralinjury ,PCI)组 (7只 )和脑切线伤 (tangentbraininjury ,TBI)组 (7只 )。2 .致伤模型的建立、观察与检测 :3…     

纤维蛋白胶释放VEGF加速损伤动脉血管内皮化的实验研究

目的用含血管内皮生长因子(VEGF)的纤维蛋白胶(FG)作用于球囊损伤血管内膜来评估其对血管内皮化、细胞增殖和内膜增生的影响。方法研究FG、VEGF、肝素处理对犬颈动脉内膜损伤的影响。对比FG和FG、VEGF、肝素处理对内膜损伤修复的影响。根据新内膜和中层厚度比值(I/M)及BrdU掺入计算细胞增殖及扫描电镜观察内皮细胞覆盖情况。结果实验组内皮覆盖率术后10d和30d明显高于对照组[(67±31)vs(41±28),(97±10)vs(82±23),均P<0.05];新内膜和中层细胞增殖率术后30d明显增强;损伤血管近段和中段I/M比率30d和90d增加但远段没有变化。仅用FG者也有促进内膜增殖作用(P<0.05),而用FG、VEGF、肝素处理者30d内即可见到损伤血管近段和中段I/M比率增加。结论纤维蛋白胶释放VEGF加肝素能有效加速损伤血管内皮化,但伴有平滑肌细胞增殖和内膜增生。     

中西医结合治疗重症流行性出血热46例

自1998年以来，我院对46例重症出血热患者采取中西医结合的治疗方法，效果满意，报告如下。     

犬颅脑枪弹伤后弹道脑组织内Mg2+和水含量变化的实验观测

从近年的世界局部战争的统计资料来看 ,颅脑火器伤患者的病死率、致残率仍居高不下 ,救治难度有逐步上升的趋势 〔1 4〕。 Mg2 对颅脑损伤后脑组织的保护作用日益受到重视。我们采用已建立的德国小口径步枪弹直接射入造成犬颅脑贯通伤 (PCI)模型〔5〕 ,观测脑水肿的发生与弹道震荡区、挫伤区脑组织内Mg2 含量变化之间的关系 ,从一个方面探讨火器伤性脑水肿的发生机制。1　材料和方法1.1　动物模型建立与分组 :健康杂种犬16只 ,体质量 (18.5± 1.3) kg,雌雄不限 ,随机分为正常对照组和颅脑枪弹伤后 30 m in、2 h及 6 h组 (n=4 )。以德国…