链脲佐菌素对大鼠海马p-CREB表达的影响及APP5肽类似物165的治疗作用

目的探讨链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对大鼠海马磷酸化环磷腺苷反应成分结合蛋白(phosphatedcylinc AMP response element binding protein,p-CREB)表达的影响以及APP5肽类似物165的治疗作用。方法将42只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和APP5肽类似物165治疗组。将STZ溶解于人工脑脊液,新鲜配制成浓度为25mg/mL,分别于第1、3天按体重3mg/kg行双侧脑室注射。APP5肽治疗组于3周后开始行APP5肽类似物165灌胃,连续4周。对照组和模型组则以等量生理盐水灌胃。4周后取脑组织海马行免疫组织化学染色和Western-blotting检测p-CREB。结果模型组p-CREB阳性神经细胞数(137.44±22.62)较对照组(27.33±9.91)明显增多(P<0.05),胞质淡染;APP5肽治疗组p-CREB阳性神经元数目(29.78±10.72)与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组海马p-CREB表达多于对照组和APP5肽治疗组,APP5肽治疗组与对照组接近。结论脑室注射小剂量STZ可使海马p-CREB阳性神经元表达增多,而APP5肽类似物165可使p-CREB阳性神经元表达恢复至正常水平。     

小鼠全脑缺血模型海马区Bcl-2和Bax的表达

背景由C57black/6小鼠制成的全脑缺血模型在实验性脑缺血的研究中使用在明显增加,目前需要对这种模型的神经元损伤死亡在分子生物学方面的改变进行全面深入的研究,此项研究正是观察两种与缺血神经元死亡密切相关基因的表达水平.目的在小鼠全脑缺血模型上观察缺血后海马区Bcl-2和Bax的表达,在蛋白分子表达水平对该模型进行研究,为这种模型在今后脑缺血研究中的应用提供实验依据.设计以实验动物为研究对象,随机对照前瞻性研究.单位一所大学生理学和病理解剖学教研室.对象实验于2002-11/2003-05在首都医科大学生理系完成.选择C57black/6小鼠12只,随机分为假手术组和对照组,每组6只.干预双侧颈总动脉夹闭15 min诱发全脑缺血模型,24 h后取脑组织.全脑缺血后应用免疫组织化学染色,观察海马Bcl-2和Bax的表达水平.主要观察指标海马Bcl-2和Bax的表达水平.结果缺血组海马CA1区Bax阳性反应神经元数目为(57.3±2.9个)个,假手术组Bax阳性细胞数目为(17.2±1.3)个,两组比较,差异有显著性意义(t=30.91,P＜0.05).缺血组CA3区和齿状回Bcl-2阳性反应神经元数目为(43.9±1.1)个,假手术组Bcl-2阳性细胞数目为(28.6±1.7)个,两组比较,差异有显著性意义(t=18.51,P＜0.05).阳性着色区灰度值测定结果显示缺血组海马CA1区Bax阳性细胞染色灰度值为90.45±5.23,假手术组Bax阳性细胞染色灰度值为168.39±4.55,两组比较,差异有显著性意义(t=27.54,P＜0.05);缺血组CA3区和齿状回Bcl-2阳性细胞染色灰度值为113.10±4.20,假手术组Bcl-2阳性细胞染色灰度值为157.25±7.68,两组比较,差异有显著性意义(t=12.35,P＜0.05).结论小鼠全脑缺血模型在缺血24 h后,Bcl-2和Bax表达发生改变,Bax表达增加在CA1区,Bcl-2表达增加在CA3区和齿状回.     

应用SDS-PAGE观察顺式氯氰菊酯对斯氏按蚊和嗜人按蚊成蚊血淋巴与幼虫蛋白的影响

目的：为合理使用顺式氯氰菊酯，配制新的高效杀虫剂复方，选择合适的药物浓度和开展蚊虫抗药性研究，观察了顺式氰氰菊酯对斯氏按蚊和嗜人按蚊成蚊血淋巴与幼虫蛋白的影响。方法：为SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果：与对照组相比，无论蚊幼虫蛋白还是成蚊血淋巴蛋白的电泳图谱均有明显差异。结论：顺式氯氰菊酯对两种按蚊幼虫和成蚊血淋巴蛋白有明显的影响。     

谷氨酸单钠对大鼠骨发育的影响

观察出生１０ｄ内皮下注射ＭＳＧ的Ｗｉｓｔａｒ大鼠，新生期（１１日龄）、青春期（５２日龄）、成年期（１００日龄）长骨发育情况。结果表明：青春期及成年期上、下肢各长骨骨干长度、胫骨骺板厚度及骺板增殖区厚度，ＭＳＧ组均落后于对照组（Ｐ＜０．０５或０．０１），１１日龄时两组长骨骨干长度虽无显著性差异，但决定长骨生长速度的骺板增殖区厚度已出现了显著性差异。各年龄期ＭＳＧ组骺板结构及骨生长发育过程无明显异常，仅厚度变薄。有别于因维生素类、甲状旁腺素等因素引起的生长迟缓。结合各年龄期ＭＳＧ处理鼠垂体湿重分别为对照组的５５．５６％、４２．３９％和４７．７０％，ＭＳＧ处理鼠身长、体重均比对照鼠低２个标准差以下。认为骨的发育及骺板变化符合ＧＨ分泌减少所致。     

结蛋白提纯及抗血清制备

<正> 结蛋白是肌源性组织中起源较早的被称为中间丝的结构抗原。近来研究发现,实性肿瘤细胞中不产生新的中间丝,因此可用于低分化肌源性肿瘤的诊断。但是目前在临床上难以广泛推广,其主要原因是难以获得抗血清。我们通过提纯鸡沙囊平滑肌 Desmin,免疫新西兰大白兔获取较纯的 Desmin 多克隆抗血清,探索提纯、鉴     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠Aβ及Aβ寡聚体表达的影响

目的运用免疫组织化学方法和蛋白质印迹(Western-blot)方法观察淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因小鼠治疗前后β淀粉样蛋白42(Aβ42)、β淀粉样蛋白40(Aβ40)和可溶性Aβ寡聚体(ADDLs)的变化,判断姜黄素(curcumin)对Aβ级联反应的影响。方法将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组(罗格列酮组)及姜黄素大、中、小剂量组。灌胃3个月后,以免疫组织化学方法和Western blot方法检测Aβ42、Aβ40和ADDLs蛋白表达量的变化。结果免疫组织化学检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞均较正常组增加,Aβ40和Aβ42相比,阳性细胞计数增加以Aβ42更加明显,各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞明显降低。Western blot检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达比正常对照组明显增加(P<0.01);与模型组小鼠相比,虽然各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达均减少,罗格列酮组和姜黄素中剂量组小鼠海马Aβ40和Aβ42的蛋白表达显著减低(P<0.01);罗格列酮组小鼠海马ADDLs的蛋白表达减低显著(P<0.01),姜黄素大、中剂量组小鼠海马ADDLs的蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论姜黄素给药3个月能显著减少APP/PS1双转基因小鼠脑内海马CA1区Aβ40、Aβ42和ADDLs的表达,对Aβ42减低更为明显。其潜在的神经保护机制是否通过下调Aβ42和ADDLs的产生,增强Aβ42和ADDLs的降解影响Aβ级联反应,有待进一步研究。     

脑缺血叠加寒冷诱导血瘀证表征模型的建立

目的由线栓法大脑中动脉闭塞致脑缺血叠加寒冷诱导建立血瘀证表征模型,通过与寒凝血瘀证表征模型和脑缺血诱导血瘀证表征模型比较,选择一种最合适的血瘀证表征模型。方法选择大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠模型、冰水冷冻大鼠模型、大脑中动脉闭塞叠冰水冷冻大鼠模型,进行脑缺血后1、3、5、7d不同时间点大鼠证候模型表征变化(舌、舌下脉络)及其对模型大鼠进行行为学、血液流变学检测。结果脑缺血后3dMCAO组、冰水组与冰水MCAO组大鼠的舌质色度值与正常组比较均存在统计学差异(P<0.05);脑缺血后5d冰水MCAO组大鼠的舌质色度值与正常组比较存在统计学差异(P<0.05);脑缺血后3d冰水MCAO组舌质色度值为各时间点最高值(舌质色度值60.12±5.15),但各组间舌质色度值比较统计学无差异(P>0.05)。各组血液流变学统计结果显示,MCAO组、冰水冷冻组、冰水MCAO组全血及还原黏度、血球压积、血浆黏度、聚集指数、变形指数均较正常组升高,部分时间点值升高与正常组比较有统计学差异(P<0.01,P<0.05),其中又以冰水MCAO组脑缺血后3d血液黏度、血球压积、血浆黏度、聚集指数均为各组最高值,变形指数为各组最低值。结论在3种模型中,大脑中动脉闭塞叠加寒冷模型可能为最合适的诱导血瘀证表征模型的动物模型。     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠突触 相关蛋白表达的影响

目的:观察姜黄素对AD模型APP/PS1双转基因小鼠突触相关蛋白突触后致密蛋白-95(postsynaptic densityprotein-95,PSD-95)和骨架蛋白Shank1表达的影响。方法:将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮阳性对照组(10 mg.kg-1.d-1)、姜黄素高、中、低剂量组(400,200,100 mg.kg-1.d-1),正常对照组为相同背景非转基因小鼠。灌胃3个月后,应用免疫组织化学和Western blot方法进行检测。结果:行为学检测,治疗组与模型组相比定位航行实验和空间探索实验存在不同程度的差异(P<0.01或P<0.05)。PSD-95和Shank1免疫组化,模型组小鼠大脑海马CA1区较对照组阳性细胞明显减少(P<0.01),姜黄素干预组有所恢复。Western blot检测海马PSD-95的蛋白结果显示,模型组小鼠海马PSD-95的蛋白表达条带均比对照组小鼠明显变细、颜色变浅(P<0.01);姜黄素干预组小鼠海马PSD-95的蛋白表达条带均明显增粗、颜色加深(P<0.05)。结论:姜黄素增加APP/PS1双转基因小鼠突触相关蛋白shank1和PSD-95表达,改善APP/PS1双转基因小鼠突触的结构和可塑性,提高空间学习记忆能力。     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠海马IRS-1和p-IRS-1表达的影响

目的:观察姜黄素对AD模型APP/PS1双转基因小鼠胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)和磷酸化胰岛素受体底物-1(p-IRS-1)表达的影响.方法:将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照罗格列酮组(10mg.kg-1·d-1)、姜黄素高、中、低剂量组(400,200,l00mg.kg-1·d-1),正常对照组为相同背景非转基因小鼠.灌胃3个月后,应用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR方法进行检测.结果:IRS-1和p-IRS-1免疫组化染色,模型组小鼠大脑海马CA1区IRS-1阳性细胞较对照组明显增加(P＜0.01),p-IRS-1明显减少(P＜0.01);与模型组相比,姜黄素各干预组可减少IRS-1阳性细胞数(P＜0.05或P＜0.01),并升高p-IRS-1阳性细胞数(P＜0.05或P＜0.01).Westem blot检测海马IRS-I和p-IRS-1的蛋白表达结果与免疫组织化学检测结果一致.RT-PCR检测IRS-1 mRNA表达结果与免疫组织化学和Western blot结果相反.结论:姜黄素可以使APP/PS1双转基因小鼠海马增加的IRS-1和减少的p-IRS-1得以恢复,并增加IRS-1 mR-NA表达,改善APP/PS1双转基因小鼠胰岛素信号转导,提示姜黄素可能通过调节胰岛素信号转导机制发挥抗AD作用.     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠海马PI3K及p-PI3K表达的影响

目的:观察姜黄素对AD模型APP/PS1双转基因小鼠磷酯酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)和磷酸化磷酯酰肌醇-3激酶(phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)表达的影响.方法:将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组(10 mg· kg-1·d-1)、姜黄素高、中、低剂量组(400,200,100 mg·kg-1·d-1),对照组为同月龄同背景的非转基因小鼠.连续灌胃3个月后,应用免疫组织化学和Western blot方法检测小鼠海马中PI3K和p-PI3K的蛋白表达.结果:免疫组化染色模型组小鼠大脑海马CA1区PI3K和p-PI3K阳性细胞均较对照组明显减少(P＜0.05);与模型组相比,各干预组PI3K及p-PI3K阳性细胞均有不同程度的增加,而以罗格列酮组与姜黄素中剂量组阳性细胞恢复最为显著(P＜0.01).Western blot检测结果与免疫组化结果基本一致.结论:姜黄素可以使APP/PS1双转基因小鼠海马中已减少的PI3K和p-PI3K蛋白有所恢复,提示姜黄素可能通过调节PI3K途径的胰岛素信号转导通路发挥抗AD作用.