肿瘤坏死因子α在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用

目的 观察TNF-α在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用,探讨纤维化疾病发生的机制. 方法 取健康胎儿脐带,体外酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用免疫荧光法进行鉴定.取第3～5代对数生长期HUVEC分别接种于12孔板和6孔板中,均按随机数字表法分为6组:对照组,培养液中不加任何刺激因素;5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组,分别在培养液中添加相应终浓度TNF-α,每组3个样本.培养72 h后倒置相差显微镜下观察各组细胞形态;免疫荧光法检测12孔板中各组细胞凝血因子Ⅷ和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,计算2种因子双阳性细胞数比值及吸光度值比值;RT-PCR检测6孔板中各组细胞钙黏蛋白、α-SMA和Ⅰ型胶原mRNA的表达(以灰度值比值表示).对数据行单因素方差分析及LSD检验. 结果(1)原代培养HUVEC为圆形、短梭形或扁平形,传代后细胞呈铺路石样旺盛生长.经第1、2、3、4、5次传代后HUVEC凝血因子Ⅷ阳性表达率分别为(85.5±1.8)％、(88 1±5 0)％、(93.6±3.7)％、(92.9±4 8)％、(89.5±1.1)％,明显高于原代培养HUVEC的(81.4±3.8)％,F值均为7.481,P值均小于0.05.(2)对照组细胞呈圆形、短梭形或扁平形,细胞间连接紧密;5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组随着TNF-α浓度的增加,细胞形态逐渐向长梭形转变,细胞间连接减少、间隙变大.(3)对照组中凝血因子Ⅷ、α-SMA双阳性细胞数比值和吸光度值比值分别为0.055±0 015、0.078±0 017,均显著低于5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组的0 257±0.106、0 280±0.129、0.505±0 059、0.817±0.035、0.929±0.101和0.437±0 040、0 456±0.097、0 496±0.082、0.787±0 131、0.885±0 087,F值分别为45 009、50.099,P值均小于0.01.(4)5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组细胞中钙黏蛋白mRNA水平分别为0.70±0.05、0.63±0 06、0 60±0.10、0.45±0.16、0 26±0.14,后4组显著低于对照组的0 83±0.03,F值均为11.593,P ＜0.05或P＜0.01.5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组细胞α-SMA和Ⅰ型胶原mRNA水平分别为0.45±0.10、0.51±0.16、0.49±0 12、0.60±0.09、0 76±0.03和0.38±0.18、0.45±0.15、0 52±0 12、0 66±0.17、0.76±0.20,后3组2项指标水平显著高于对照组的0.37±0.14、0 31±0 12,F值分别为7.839、2.898,P ＜0.05或P＜0.01. 结论 TNF-α呈明显浓度依赖性促进HUVEC向间质细胞转化,可能是瘢痕形成中纤维化组织内肌成纤维细胞的又一重要来源.     

孤束核与延鼠尾端腹外侧区微量注射GABA对交感传出活动的影响

本文观察了在家兔孤束核(NTS)与延髓尾端腹外侧区(CVL)微量注射GABA对电刺激上述区域时所诱发的肾交感传出放电(SND)和血压变化的影响。结果表明:(1)在NTS内微量注射GABA,未见肾交感自发放电有明显变化。注射后,刺激NTS诱发的肾交感神经传出放电(NTS—     

大白鼠皮层诱发电位的实验方法研究——用小动物代替大动物的教改探索

长期以来,生理实验中诱发电位实验在国内各院校均以兔为实验对象,但兔颅骨缝变异大,诱发电位投射定位分散,兔对实验环境耐受差以及费用昂贵等缺点,我们试用大白鼠代替兔进行该项实验,经过三年教学实践证明:改革后的实验,操作简单,费用经济,成功率较高,值得推广。 大白鼠用常规麻醉、开颅暴露一侧大脑皮层,电刺激一侧坐骨神经中枢端或用两根针灸针插入其大腿屈侧中部接近坐骨神经部位的皮肤和肌肉。以矢状缝和冠状缝交点为零点(AP_0,LP_0),记录对侧皮层诱     

青蒿水提物对小鼠生殖功能及胎鼠生殖发育的影响

目的:观察青蒿水提物对雌性小鼠生殖功能及胚胎发育的影响。方法:80只健康昆明种雌小鼠随机分成4组,实验组连续14 d分别腹腔给予青蒿水提物20 mg/kg(低剂量组)、100 mg/kg(中剂量组)和500 mg/kg(高剂量组),对照组以等量生理盐水代替,然后与雄鼠合笼,同组内一半雌鼠继续给药至交配成功后14 d处死;另一半雌鼠在受精后继续给药35 d,自然分娩,检测青蒿水提物对各组母鼠生育能力和胎仔生长发育的影响。结果:高剂量组青蒿水提物可以使孕鼠的胎仔数以及仔鼠平均体质量、胎盘质量下降,吸收胚胎数增加;但对雌鼠的交配指数、生育指数、活产指数及对出生仔鼠的存活指数、生长指数均无明显影响(P>0.05)。结论:青蒿水提物对孕鼠胚胎有影响,但对雌鼠的其它生殖功能无明显毒性作用。     

人参皂苷Rg1对人神经干细胞功能表达的膜片钳研究

目的:观察人参皂苷Rg1诱导人神经干细胞(neural stem cells of human,hNSCs)的功能表达.方法:采用全细胞膜片钳技术分析人参皂苷Rg1诱导hNSCs分化7d时,神经元样细胞的膜电生理特性以及钠、钾离子通道的功能表达.结果:人参皂苷Rg1(20 mg·L-1)诱导hNSCs分化7d时,神经元样细胞的膜静息电位为(-45.70 ±2.63)mV,膜电容为(26.89±1.91) pF,膜输入阻抗为(877.51±20.44) MΩ(与对照组相比均P＜0.05);电压依赖性的快速激活、快速失活的内向Na+电流,检出率50％,平均峰值为(711.48±158.03) pA(与对照组相比P＜0.05);外向K+电流的主要成分是快速激活快速失活的瞬时外向K+电流和延迟整流外向K+电流,其平均峰值为(1 070.42±177.18) pA(与对照组相比P＜0.05).结论:人参皂苷Rg1可以促进hNSCs功能表达和成熟.     

构建芯片技术探讨人参皂苷Rg1促进人神经干细胞分化的机制

目的:采用基因芯片技术筛选出人参皂苷Rg1促进NSCs分化的主要分子靶点。方法:通过基因芯片技术,观察Rg1诱导人神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元分化7 d时靶基因表达,通过数据演算筛选出Rg1促进NSCs分化的最主要的靶基因和信号转导途径,然后采用Western blot和免疫组化的方法对其中的ERK信号分子进行验证。结果:在Rg1诱导NSCs分化第7天时,获得差异基因675个,其中显著上调的基因255个,显著下调的基因420个;MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)通路中的ERK1/2(细胞外信号调节蛋白激酶)信号分子与NSCs分化直接相关。经Western blot和免疫组化证实,在Rg1诱导NSCs分化中,ERK1/2蛋白明显上调,磷酸化水平也明显增强,此作用能够被PD98059(ERK1/2阻断剂)所阻断,同时PD98059也可以明显阻断NSCs的分化。结论:ERK1/2是人参皂苷Rg1促进NSCs分化的重要分子靶点。基因芯片筛选出的差异表达基因可能为研究Rg1促进NSCs分化的分子机制提供线索。     

人参皂苷Rg1处理的人神经干细胞对缺氧缺血脑损伤的功能恢复研究

目的:观察人参皂苷Rg1诱导的神经干细胞(NSCs)在移植治疗缺氧缺血新生模型鼠中的作用。方法:体外用人参皂苷Rg1诱导分化NSCs,然后将诱导分化的NSCs移植入缺氧缺血的新生鼠模型侧脑室,采用TTC染色和行为学观察对模型进行评价。通过水迷宫、体感诱发电位观测其脑功能的恢复情况,免疫组化检测移植的NSCs生长、分化状况。结果:移植Rg1诱导后的NSCs,可以明显改善水迷宫的潜伏期、游泳路程、目标象限探索时间以及体感诱发电位的潜伏期和振幅,并在海马区域呈集中表达并围绕缺血损伤区域生长。结论:Rg1诱导后的NSCs移植在治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中发挥了较好的作用。     

兔颈迷走神经传入冲动对肾交感、颈交感神经传出放电及动脉血压的影响

本文观察了电刺激兔颈迷走神经中枢端对肾交感、颈交感传出放电(暂称迷走—交感反射)和动脉血压的影响。结果:电刺激颈迷走神经中枢端时,同侧肾交感传出放电抑制,血压下降,而同侧颈交感传出放电反应型式多样化。用较弱长串的电刺激施加予迷走神经中枢端为“背景刺激”,来改变中枢机能状态,其问又给予颈迷走短串的刺激,如背景刺激在同侧,则肾交感放电抑     

人参总皂甙体外诱导CD34+造血干/祖细胞增殖的作用

目的：探讨人参总皂甙(TSPG)协同造血生长因子体外诱导CD34~ 造血干/祖细胞(HSC/HPC)增殖的作用。方法：收集人脐血细胞,采用Stemsep TM干细胞分选系统分离纯化CD34~ HSC/HPC,经不同剂量TSPG加入不同造血生长因子组合进行培养,检测细胞总数、CD34~ 细胞及集落形成细胞总数(CFCs)的变化。结果：TSPG 10、20、50和70μg/ml均可不同程度地提高细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞扩增倍数,TSPG 50μg/ml是最佳刺激浓度,可使细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞分别增至(2470．50±79．96)倍、(53．96±4．29)倍和(21．86士3．09)倍。结论：合适剂量的TSPG能够促进CD34~ 造血干/祖细胞体外增殖。