儿童过敏性紫癜发病中NF-κB对树突状细胞的调控与T辅助细胞分化失衡的关系

目的 了解儿童过敏性紫癜发病中NF-κB对树突状细胞的调控与T辅助细胞分化失衡的关系.方法 收集我院2008年6月至2009年3月肾脏免疫科收治的过敏性紫癜(henoch-schonlein purpura,HSP)患儿36例和过敏性紫癜肾炎(henoch-schonlein purpura nephritis,HSPN)患儿32例,以及门诊体检的健康儿童27例,抽取外周血,诱导培养树突状细胞(dendritic cells, DC),于第5天分别抽取7例以上3组外周血诱导培养的DC加入NF-κB抑制剂5 μg,分别采用ELISA、流式细胞技术、RT-PCR和细胞免疫化学方法,检测患儿血浆IL-4、INF-γ和DC培养上清IL-12、IL-10水平;DC表面CD86、CD80、CD83、CD-209的表达;DC内NF-κB亚型p50、p65 mRNA表达量和NF-κB活化情况.结果 与对照组比较,HSP组和HSPN组血浆中Th2类细胞因子IL-4升高(P<0.05),Th1类细胞因子INF-γ降低(P<0.05);DC培养上清中IL-10升高(P<0.05),IL-12降低(P<0.05);CD86、CD83升高(P<0.05),CD80降低(P<0.05);细胞内NF-κB p50、p65 mRNA 表达量也升高(P<0.05);NF-κB活化表达数量增多.但HSP组与HSPN组以上检测指标2组比较差异无统计学意义(P>0.05).加入NF-κB抑制剂后以上各项异常指标可逆转,且逆转后与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 HSP发病与DC异常调控Th1/Th2细胞失衡密切相关,NF-κB是DC免疫功能的关键性调控基因,抑制NF-κB的活化是阻断DC功能和依赖于T细胞免疫反应的一个有效靶点.     

辛伐他汀对阿霉素肾病大鼠的治疗作用及白细胞介素-1β表达的影响

目的观察炎症因子自细胞介素-1β（interleukin-1beta,IL-1β）在阿霉素肾病大鼠发生肾小球硬化过程中的表达,探讨辛伐他汀保护阿霉素肾病大鼠肾脏的机制。方法雄性SD大鼠分为正常对照组、阿霉素肾病组（模型组）和阿霉素肾病辛伐他汀治疗组（治疗组）,分别灌胃给药11周。免疫组化法观测。肾组织中IL-1β的定位表达,半定量RT—PCR技术检测肾组织IL—1βmRNA的表达,酶联免疫吸附法检测血清和肾组织中IL-1β的水平,光镜观察肾小球硬化的情况。结果模型组肾组织IL-1β的表达明显增强（P〈0．01）,伴有明显的肾小球硬化及肾功能损害（P〈0．01）;与模型组比较,治疗组肾组织IL—1β的表达、肾小球硬化及肾功能损害均减轻（分别P〈0．05、P〈0．01、P〈0．05）。结论辛伐他汀可能通过降低肾组织内IL-1β的表达,对肾脏起保护作用。     

屋尘螨诱导肠道菌群失调小鼠变应性气道反应模型的建立

目的:在肠道菌群失调小鼠模型上采用屋尘螨变应原诱导气道变应性,建立一种新的变应性气道反应模型.方法:60只BALB/c小鼠分6组,2组用于肠道菌群检测;其余4组用于气道变应性检测.结果:抗生素组小鼠出现肠道菌群失调伴体重减少,粪便含水量增加.肠道菌群失调后进行屋尘螨变应原激发的小鼠BALF中细胞总数、淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸粒细胞增加,IL-4水平增高,肺部GATA-3转录因子mRNA表达增加.结论:用屋尘螨变应原在肠道菌群失调小鼠模型上气道激发,诱导小鼠产生Th2细胞优势的变应性气道反应.     

白细胞介素-17对足细胞相关分子和凋亡的影响及其分子机制研究

目的 研究白细胞介素(interleukin,IL)-17对足细胞相关分子及其凋亡的影响,并探讨可能的分子机制.方法 以体外培养的足细胞作为研究对象,流式细胞仪检测不同浓度(1、10、50、100nm/ml)和不同作用时间(12、24、48、72h)IL-17对足细胞凋亡的影响;将足细胞分为空白对照组及100ng/ml IL-17诱导组,Real-time RT PCR法检测IL-17对足细胞相关分子Nephrin、WT1、Synaptopodin及阴离子蛋白Podocylaxin、凋亡受体Fas和FasL mRNA表达的影响;流式细胞仪检测足细胞Fas和FasL蛋白的表达;免疫细胞化学法检测足细胞WT1、Caspase8、Caspase3蛋白的表达.结果 (1)IL-17可促进足细胞凋亡,呈时间、剂量依赖性;同时IL-17可增加足细胞凋亡受体Fas的表达(P<0.01),并且增加其下游分子Caspase8、Caspase3的表达(P<0.01);(2)IL-17减低足细胞阴离子蛋白Podocylaxin的表达(P<0.05),对Nephrin、WT1、Synaptopodin的表达无影响(P>0.05).结论 IL-17可能通过抑制足细胞阴离子蛋白Podocylaxin表达,引起足细胞凋亡的方式来发挥对肾脏的损伤作用.     

丁酸氯维地平注射液的HPLC法测定

建立了高效液相色谱法测定丁酸氯维地平注射液。采用Venusil-XBP C18色谱柱,流动相为磷酸盐缓冲液(磷酸二氢铵1.15 g,加水900 ml溶解,用磷酸调至p H 4.0,再加水至1 L)∶乙腈(45∶55),检测波长240 nm。丁酸氯维地平在5~200μg/ml范围内线性关系良好,平均回收率为103.5%,RSD为1.6%。     

小儿单纯性肾病体外淋巴细胞产生β_2—m探讨

β_2--微球蛋白(β_2一m)为HLA分子的亚单位(1类抗原β链),主要由淋巴细胞产生并表达于细胞膜上,其它有核细胞均能不同程度地产生β_2一m．近来的研究已发现Sjogren’s综合征、类风湿性关节炎,系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病体液(血清、唾液及关节液等)β_2一m浓度提高,表明β_2一m异常可能与免疫调节功能紊乱有关。小儿单纯性肾病     

川崎病TH1/TH2功能状态的研究

川崎病(Kawasaki disease,KD)是一种急性弥漫性血管炎,婴幼儿发病多见,至今,该病病因及发病机理不明,从病人的流行病学特征推测可能与病原体感染或毒素超抗原引起免疫学异常有关.本研究通过对KD患儿急性期、恢复期PPD皮试的观察以及外周血血清IgE的变化、外周血CD4 T细胞CD30表达和外周血单个核细胞(PBMC)培养上清IL-4、IFN-γ水平的测定,了解KD急性期TH1/TH2功能平衡状态及免疫发病机理.     

CXCR4在哮喘小鼠肺组织中的表达及氯喹的干预作用

目的检测哮喘小鼠中趋化因子受体CXCR4的表达及其拮抗剂氯喹(CQ)的干预作用。方法将6~8周SPF级Balb/c小鼠随机分成对照组、哮喘组和氯喹干预组,哮喘组和氯喹干预组用鸡卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型,干预组于激发前30 min给予CQ,连续3 d,对照组用PBS代替。最后1次激发24 h内小鼠肺功能仪检测小鼠气道高反应;最后1次激发48 h内检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及细胞分类计数;HE染色光镜下观察肺组织的病理炎症改变,免疫组化染色检测肺组织CXCR4的表达;荧光定量PCR(Q-PCR)测定肺组织中CXCR4 mRNA的表达。结果哮喘组气道高反应及BALF中细胞总数明显高于对照组,干预组小鼠气道高反应及BALF中细胞总数与哮喘组相比显著降低;BALF中哮喘组嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和单核细胞数较空白组显著增加,而氯喹干预组较哮喘组显著减低;HE染色结果显示哮喘组肺部炎症细胞浸润明显,干预组与哮喘组相比明显减轻,病理评分降低;免疫组化显示哮喘组CXCR4在气道上皮细胞呈强阳性表达,干预组表达呈弱阳性;哮喘组CXCR4 mRNA的表达较对照组升高,氯喹干预组较哮喘组CXCR4 mRNA表达量降低;CXCR4表达量与BALF细胞总数呈正相关。结论 CXCR4可能参与哮喘小鼠的气道炎症和气道高反应的发生,氯喹能改善哮喘小鼠的气道高反应和气道炎症可能与拮抗CXCR4相关,为氯喹治疗哮喘提供理论和实验依据,为开发治疗哮喘新药提供新的思路。     

“10-23”脱氧核酶对突变型p53基因表达的抑制作用

目的探讨"10-23"脱氧核酶("10-23"DZ)抑制突变型p53基因表达的效应。方法设计合成针对mp53(R273H,CGT﹥CAT)的"10-23"DZ:p53DZ7、p53DZ9、p53DZ11及硫代修饰物p53DZ11-s。在无细胞体系观察"10-23"DZ对p53RNA的切割效应。经脂质体将DZ转染进HT29结肠癌细胞株,RT-PCR检测各种DZ对HT29细胞mp53mRNA的影响;免疫细胞化学及ImageProPlus4.5图像分析系统检测mp53蛋白,观察各种DZ及ASO对mp53蛋白表达的影响。结果p53DZ11和p53DZ11-s在无细胞体系能有效切割mp53RNA,而对wp53RNA的作用弱。在细胞内p53DZ11-s在浓度为250nM时,能下调HT29细胞mp53mRNA水平和mp53蛋白表达。结论针对mp53的273突变点所设计的p53DZ11、p53DZ11-s在细胞外均能有效切割mp53RNA,在HT29细胞内p53DZ11-s也能抑制mp53mR-NA及mp53蛋白的表达。     

甲基强的松龙对哮喘患儿体液免疫功能的影响

为探讨激素在哮喘防治中的免疫调节机制，我们以甲基强的松龙（ＭＰ）为例，观察其对婴幼儿哮喘的治疗效果和体液免疫指标，现报告如下。对象和方法一、对象　４０例哮喘急性发作期住院患儿均符合全国儿科哮喘协作组诊断标准［１］，随机分为两组，ＭＰ治疗组２２例，男１４例，女８例，年龄８ｍｏ～３ａ，平均２．１ａ。对照组１８例，男１０例，女８例，年龄１０ｍｏ～２．８ａ，平均２ａ。两组病情轻重及院外病程无显著性差异，均未曾用皮质激素治疗。均在治疗前、后５ｄ采血测免疫球蛋白。二、方法　入院后立即予治疗。对照组用抗感染、…