短发卡结构状RNA体外抑制呼吸道合胞病毒M2基因 mRNA水平和病毒蛋白表达的研究

目的观察针对人类呼吸道合胞病毒(RSV)M2基因mRNA构建的短发卡结构状RNA重组质粒在细胞水平对RSV复制的影响,为利用RNA干扰技术抑制RSV感染的研究奠定基础。方法将已成功构建的重组质粒pshRNA7816/8330转染HEp-2细胞,通过显微镜观察pshRNA7816/8330对RSV感染细胞病变(CPE)的抑制效率,利用四甲基偶氮唑盐比色实验检测pshRNA7816/8330的细胞毒性,经RT-PCR方法检测pshRNA7816对RSVM2mRNA表达的影响,免疫细胞化学染色法检测pshRNA7816对细胞内RSV蛋白的影响。结果pshRNA7816/8330对HEp-2细胞的正常生长没有明显的细胞毒性作用,2个重组质粒均能抑制RSV所致的CPE,但pshRNA7816对CPE抑制作用较pshRNA8330要强,RT-PCR和免疫细胞化学染色法结果显示pshRNA7816能明显降低RSVM2基因mRNA和RSV蛋白表达水平。结论针对RSVM2-1基因所构建的短发卡结构状RNA重组质粒pshRNA7816在细胞水平能有效抑制RSV的CPE形成降低RSVM2mRNA和病毒蛋白表达水平,从而干扰RSV的复制。     

急慢性特发性血小板减少性紫癜TPO水平的调控及对抗核抗体的观察

特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)是一种由于血小板破坏增多而引起的常见出血性疾病.临床特征主要是皮肤黏膜自发性出血,严重者出现颅内出血而危及生命.血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是一种作用于巨核细胞,血小板系统的造血调控因子.儿童急慢性ITP时,TPO水平如何变化及调控?抗核抗体(anti-nuclear antiboby,ANA)阳性率如何?现分析如下.     

儿童自身免疫性甲状腺疾病Th1/Th2细胞极化偏移的研究

目的 从T淋巴细胞分化的多环节观察儿童自身免疫性甲状腺疾病Graves病(GD)和桥本甲状腺炎(HT)Th1/Th2类细胞的极化偏移方向,探讨其免疫学发病机制.方法 采用ELISA和RT-PCR法同步检测GD(46例)和HT(64例)患儿的转录因子、细胞因子以及游离CD30(sCD30)水平,另设24例健康体检儿为对照组.结果 GD、HT患儿外周血单个核细胞(PBMC)转录因子GATA-3的表达较正常组明显降低,T-bet、T-bet/GATA-3比值明显升高.GD、HT患儿PBMC产生IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4比值较正常组明显增加,而IL-4水平明显减少.GD、HT患儿sCD30水平高于正常对照组.结论 GD及HT患儿的前体T细胞具有向Th1分化发育的趋向.     

结核菌素反应与哮喘患儿T_H细胞亚群的关系

目的　探讨纯结核杆菌蛋白衍生物（ＰＰＤ） 反应与哮喘患儿辅助性Ｔ 细胞（ＴＨ）亚群失衡和临床症状的关系。方法　根据哮喘患儿皮肤ＰＰＤ 反应将其分为阳性和阴性反应组,比较两组患儿哮喘发作严重度,血清ＩｇＥ水平,外周血单个核细胞培养上清干扰素－ γ（ＩＦＮ－ γ） 和ＩＬ－ ４ 产生及Ｂ细胞ＣＤ２３ 表达水平。结果　ＰＰＤ阴性组患儿哮喘发作程度、血清ＩｇＥ水平、ＩＬ－ ４ 产生和ＣＤ２３ 表达较明显高于ＰＰＤ 阳性组,而ＩＦＮ－ γ则明显低于ＰＰＤ阳性组。结论　生后早年成功地接种卡介苗可诱导ＴＨ１ 反应,这对其后减轻哮喘患儿ＴＨ１／ＴＨ２ 失衡及临床症状有一定作用。     

一氧化氮与Ⅰ型辅助细胞因子在过敏性紫癜中的作用

目的观察过敏性紫癜（ＨＳＰ）患儿急性期的一氧化氮（ＮＯ）及Ⅰ型辅助细胞（ＴＨ１）因子水平,以探讨其在该病全身血管炎发病机制中的作用。方法用镉还原法测定血浆ＮＯ水平,用ＥＬＩＳＡ法检测血浆及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）培养上清中白细胞介素－２（ＩＬ－２）及干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）水平。结果ＨＳＰ急性期血浆ＮＯ水平较对照组明显增高（Ｐ＜００５）,血浆ＩＬ－２及ＩＦＮ－γ与正常对照组比较无显著性差异（Ｐ＞００５）,但患儿的ＰＢＭＣ培养上清的ＩＬ－２及ＩＦＮ－γ明显低于正常对照组（Ｐ＜００５）。结论ＮＯ及ＴＨ１细胞因子在ＨＳＰ全身血管炎的发生、发展中起作用     

TGF-β1、VEGF在儿童原发性肾病综合征中的表达及其临床意义

目的研究转化生长因子β1（TGF—β1）和血管内皮生长因子（VEGF）与儿童原发性肾病综合征（PNS）蛋白尿的关系及其在不同病理类型肾组织中的表达差异,探讨PNS蛋白尿的可能发生机制及导致肾纤维化的影响因素。方法应用ELISA法测定正常对照组与NS组患儿血清TGF—β1、VEGF水平,比较两指标与蛋白尿、肾病不同病理类型间的关系及两者间的相关性;应用免疫组化法检测不同病理类型PNS与正常肾组织中TGF—β1、VEGF的蛋白表达,并比较其差异。结果①蛋白尿阳性NS组,其血清TGF—β1、VEGF水平均分别较对照组和蛋白尿阴性组显著增高（P〈0．05）,两指标间呈正相关（r=0．4305）。②在不同病理类型中,局灶节段硬化性肾炎（FSGS）组血清TGF—β1水平显著高于微小病变型肾病（MCNS）组、系膜增生型肾小球肾炎（MSPGN）组及对照组（P〈0．01）。③FSGS及MSPGN组血清VEGF水平较MCNS组与对照组显著增高（P〈0．05）。④TGF-β1、VEGF在病变肾组织中阳性表达面积均显著高于对照组（P〈0．05）。⑤TGF—β1的蛋白表达强度在MCNS、MSPGN、膜性肾病（MN）、FSGS4组中呈逐渐增强趋势,其中FSGS组TGF—β1表达较无纤维化组明显增强（P〈0．05）;而VEGF蛋白表达强度在不同病理类型之间以及有无间质纤维化之间差异无显著性（P〉0．05）。结论①血清TGF—β1、VEGF水平与PNS蛋白尿的产生有关,且与肾脏病理损害类型有关;②NS患儿肾组织均存在TGF-β1、VEGF蛋白表达增强,尤以TGF—β1表达增强为著,且表达强度可能与小管间质纤维化程度有关。     

小儿呼吸道人偏肺病毒感染25例流行病学和临床特征分析

目的 探讨小儿呼吸道人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)的感染阳性率、流行病学及其临床特征.方法 2002年12月至2003年12月在本科固定时间收集新入院的急性呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物,一式两份.1份采用免疫荧光快速诊断方法用于分析包括呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、腺病毒(adenovirus)、流感病毒(influenza virus) A、B副流感病毒(parainfluenza virus)1、2、3 这7种常见呼吸道病毒;另1份采用RT-PCR的方法检测上述患儿鼻咽分泌物中hMPV的L基因和M基因,鼻病毒与冠状病毒的基因.结果 检出 hMPV阳性标本25例,阳性率为9.7%,主要分布在秋冬季;25例hMPV阳性标本中单纯hMPV感染10例,占40%,15例(60%)系hMPV与其他病毒合并感染,其中包括8例hMPV与RSV合并感染,hMPV与鼻病毒、冠状病毒合并感染各2例,3例标本同时检出hMPV、RSV、鼻病毒为阳性;分析hMPV阳性呼吸道感染患儿的临床特征:男:女=16:9,12例(48%)临床诊断为毛细支气管炎,9例(36%)临床诊断为肺炎,4例(16%)为哮喘急性发作患儿,除hMPV和其他病毒合并感染更容易出现发热外,单纯hMPV感染与hMPV与其他病毒混合感染在发病年龄、性别、病程及临床表现上无明显差异.结论 hMPV是小儿急性呼吸道感染的重要病原,可与呼吸道其他常见病毒混合感染,仅从临床表现上很难将hMPV感染与其他呼吸道病毒感染区别.     

大剂量静脉注射免疫球蛋白对新生儿肺炎患儿T、 B细胞功能的抑制作用

目的 观察两种剂量静脉注射免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)对新生儿肺炎患儿的疗效及其免疫抑制作用,为IVIG在新生儿肺炎的应用提供依据.方法 随机选取41例新生儿肺炎患儿,分为对照组,500~700mg/kg IVIG组及1000~1200mg/kg IVIG组,后两组分别于病程之l~4天接受IVIG治疗,其余治疗方法三组同.观察疗效并检测治疗前后患儿血清IgG、IgA、IgM、IgG亚类,T、B细胞增殖反应,外周血单个核细胞产生IgG亚类、IL-2、IL-4及IL-6能力.结果 两种剂量IVIG组患儿临床恢复情况与对照组相比无显著差异.与对照组比较,大剂量IVIG组治疗后血清IgG及IgG亚类水平明显升高,但其T、B细胞增殖反应、PBMC产生IL-2及IgG1、IgGZ2、IgG3水平明显下降.对照组治疗前后各指标均无明显变化.结论 IVIG对新生儿肺炎似无明显疗效,大剂量使用IVIG可能因其至少短期内具有抑制T、B细胞功能作用而加重新生儿期暂时免疫缺陷,故建议应据新生儿的免疫系统功能状态针对性选用IVIG.     

氯喹对哮喘小鼠气道高反应性的抑制作用

目的探讨氯喹对哮喘小鼠气道高反应性的作用及其可能机制。方法Balb/c 小鼠随机分为对照组、哮喘组、氯喹治疗组、
地塞米松治疗组、氯喹+地塞米松治疗组,除对照组外,其余各组小鼠均给予OVA致敏和激发,建立哮喘小鼠模型,于每次激发
前腹腔注射给药,对照组则于同一时间予等量PBS处理,末次激发后24 h 内小鼠肺功能仪检测小鼠气道高反应性;检测支气管
肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及分类计数;制作肺组织病理切片,HE 染色后光镜下观察病理变化;ELISA检测支气管肺泡灌
洗液中细胞因子IL-6、PGF2α水平。结果氯喹可明显降低哮喘小鼠气道高反应性（吸入25 mg/ml Ach 时4.5±0.4 vs 6.1±0.9,P<
0.05,吸入50 mg/ml Ach 时4.6±0.5 vs 8.2±1.0,P<0.001）;明显降低哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞数（P<0.01）;显著降
低哮喘小鼠病理评分（P<0.05）;可一定程度降低哮喘小鼠BALF中PGF2α因子水平;与地塞米松合用可明显减轻哮喘小鼠支气
管细支气管周围炎症（P<0.05）、血管周围炎症（P<0.01）、肺组织病理评分（P<0.001）,明显降低哮喘小鼠BALF中IL-6因子水平
（P<0.05）。结论氯喹可抑制哮喘小鼠气道高反应性;地塞米松与氯喹合用较单独用药效果更好,可能对中性粒细胞参与的哮
喘有效。
     

小儿哮喘急性发作的病原学研究

目的 :探讨重庆地区小儿哮喘急性发作与呼吸道病毒及肺炎支原体 (MP)、肺炎衣原体 (CP)感染的相关性。方法 :采取患儿鼻咽分泌物用免疫荧光快速诊断方法检测包括呼吸道合胞病毒 (RSV)、腺病毒 (Adv)、流感病毒A、B(InfA、B)型、副流感病毒 1、2、3(PInf1、2、3)型在内的 7种病毒抗原及血清ELISA法检测CP、MPIgM抗体。结果 :4 5例婴幼儿哮喘患儿阳性检出有 18例 (40 % )其中感染RSV有 13例 (2 8.9% )居首位 ,其次为CP有 3例 (6 .7% ) ,MP有 1例 (2 .2 % ) ,PInf3有 1例 (2 .2 % )。 37例儿童哮喘阳性检出有 13例 (35 .1% )其中感染MP有 9例 (2 4 .3% )居首位 ,其次为RSV有 4例 (10 .8% ) ,其余均阴性。结论 :RSV及CP感染与婴幼儿哮喘急性发作关系密切 ,而MP感染与儿童期哮喘急性发作关系密切。