血清髓鞘碱性蛋白对急性闭合性颅脑损伤程度的判断价值

用酶联免疫吸附检测法测定１１２例急性闭合性颅脑损伤患者入院时血清中髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）．结果：血清ＭＢＰ含量在脑震荡组与对照组基本一致（Ｐ＞０．０５）。脑挫裂伤组、硬膜外血肿组、脑内血肿组分别与脑震荡组比，差别均有显著性（Ｐ＜０．０５）；脑挫裂伤组和脑内血肿组升高比硬膜外血肿更明显（Ｐ＜０．０５）；脑挫裂伤组与脑内血肿组比较差别无显著性（Ｐ＞０．０５）．血清ＭＢＰ含量与颅内血肿的血肿量和脑挫裂伤的范围呈一致关系。以上结果表明：检测血清ＭＢＰ含量，对判断颅脑损伤的程度有重要价值。     

bax和p53基因共转染对人舌癌细胞增 殖和凋亡的影晌

目的　探讨诱导凋亡的bax基因和p53抑癌基因共转染对人癌细胞增殖和凋亡的作用。方法　构建pSV-CIP-bax-CAT嵌合基因。在其bax基因上游含人a1(Ⅰ)型胶原基因的第一内含子217bp片段（+822～+1093）和317bp启动子片段。经阳离子转染试剂DOSPER介导,分别用pSV-CIP-bax-CAT转染、pSV-CIP-bax-CAT和pSV-p53-CAT共转染培养的人舌癌Tca8113细胞系(LCC)。结果　免疫狭缝印迹和ELISA检测证实,转染组和共转染组比对照的bax和p53基因表达量明显增加。MTT显色分析、TUNEL荧光显微镜和流式细胞仪监测结果显示,bax基因或p53基因均具抑制LCC增殖和诱导凋亡的作用(bax组和bax+p53组的抑制率分别为23.9%和26.1%)。结论　人a1(Ⅰ)型胶原基因的顺式作用元件能促使bax基因在LCC异位表达;bax与p53共转染48小时,对LCC抑制增殖和诱导凋亡的作用具明显协同效应。     

人21.5kDa MBP基因对肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡作用研究

目的 探讨人21.5kDa髓鞘碱性蛋白(MBP)对肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡的影响.方法 用含21. 5kDa MBP基因的pSVCEP-MBP-CAT质粒转染肝癌细胞(HepG-2),设空质粒转染为对照组,用RT-PCR、Western blot杂交检测转染效果,后以H2O2处理上述细胞,通过MTT测定细胞增殖曲线,DNA琼脂糖电泳、免疫细胞化学分析、彗星电泳、TUNEL原位杂交等多种方法检测凋亡及相关蛋白的表达情况.结果 人21.5kDa MBP基因在肝癌HepG-2细胞转染成功, MTT测定细胞增殖曲线显示阳性转染组细胞有增殖和抗凋亡的作用,DNA琼脂糖电泳显示对照组有大量的DAN ladder形成,Caspase-3免疫组化证实对照组细胞Caspase-3表达显著升高,彗星电泳和TUNEL原位杂交显示对照组DNA损伤及凋亡严重而转染组较轻. 结论人21.5kDa MBP对肝癌HepG-2细胞有促进增殖和抗凋亡的作用.     

核酶切割per基因所致的缓解吗啡成瘾作用研究

目的　探讨 per基因与阿片类成瘾的相关性 ,进而寻找治疗阿片成瘾的基因戒毒疗法。方法　设计并合成特异性 per锤头状核酶基因和 per核酶靶 m RNA组分基因 ,并分别重组入体外转录质粒 ,而后将经体外转录反应得到 per核酶 RNA和地高辛标记的 per核酶靶 m RNA组分。将转录产物混合 ,在不同条件下进行体外切割反应后 ,采用地高辛化学发光法检测 per核酶的体外切割效率。小鼠脑室注射直接导入脂质体包裹的重组质粒 pc DNA3.1- per RZ DNA,按剂量递增法建立吗啡依赖动物模型 ,用纳洛酮催瘾 ,观察戒断反应的变化。结果per核酶对 per核酶靶 m RNA组分的体外切割效率达到 6 0 %。重组质粒组小鼠的刻板跳跃、“湿狗”样抖动和打洞次数与空质粒组、生理盐水组相比明显减少 ,但并不抑制小鼠的体重下降。结论　 per核酶具有体外定点切割 per基因 m RNA组分的活性。经小鼠吗啡成瘾模型检测 ,该重组质粒能成功转染活体小鼠脑细胞并在脑组织内稳定表达 per核酶 ,发挥阻断 per基因表达的作用 ,有效地减轻吗啡成瘾的戒断症状。     

老年期痴呆患者血清淀粉样蛋白免疫印迹分析

目的探讨测定血清淀粉样蛋白(Alz90)对老年期痴呆患者的意义.方法应用单克隆抗淀粉样蛋白抗体(Alz90)和免疫狭缝印迹(ISB)技术对112例老年期痴呆患者[包括老年期痴呆(Alzheimer disease,AD)75例、多发性梗塞性痴呆(multi-infarct dementia,MID)37例]和24名老年健康人的血清淀粉样蛋白(Alz90)水平进行分析.结果AD组血清淀粉样蛋白(Alz90)含量(CI=0.218±0.04)不仅低于对照组(CI=0.235±0.03),还低于MID组(CI=0.234±0.05),差异均有显著性(P＜0.05);而血清淀粉样蛋白含量在MID组与对照组之间的差异无显著性.有ε4的AD患者组血清淀粉样蛋白含量(CI=0.209±0.03),既低于有ε4的对照者组(0.246±0.03),又低于有ε4的MID患者组(CI=0.239±0.08),差异均有显著性(P＜0.05).结论血清淀粉样蛋白含量降低结合apo E4等位基因(ε4)的存在,有助于AD的早期诊断及其与MID的鉴别诊断.     

人脑发育过程中髓鞘碱性蛋白基因的表达

为探索人脑髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）基因表达的时空秩序与髓鞘发生和形成之间关系，采用３２Ｐ－和生物素标记鼠ＭＢＰｃＤＮＡ和地高辛标记人ＭＢＰｃＲＮＡ探针，对发育过程中人脑进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交和原位杂交研究。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点分析结果显示：１６周胎龄脑ＭＢＰｍＲＮＡ表达已明显，Ａ５９０值近２．０／μｇＲＮＡ，随发育逐渐增加，至成年其表达增至９倍（Ａ５９０值为１８／μｇＲＮＡ）。８～２５周胎龄脊髓和延脑切片以及２０、２２和２５周胎龄桥脑、中脑、丘脑、小脑和大脑切片原位杂交结果表明：在８～９周胎龄人脑脊髓前角和近延脑第四脑室底区域中，其散在细胞的核周胞浆内有ＭＢＰｍＲＮＡ表达信号，该阳性细胞比少突细胞大，而且胞浆丰富，它们究竟是神经元或胶质前体仍待鉴定。在２０周胎龄期，ＭＢＰｍＲＮＡ表达在脊髓和延脑区骤增，并沿少突细胞突起延伸呈网状；此期桥脑该基因表达已明显，在其他脑区该表达信号也有散在分布     

重组人脑髓鞘碱性蛋白及其抗体的制备与研究

背景:中枢神经系统髓鞘中蛋白部分的1/3为髓鞘碱性蛋白。作为一个蛋白质家族在人脑中有4种分子形式。目的:探讨重组人脑脊髓碱性蛋白表达及其免疫学的功能。设计:单一样本研究。单位:四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室。材料:实验于2003-08/2004-03在四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室完成。人脑hMBP相对分子质量为21500,T4DNALigase,小牛肠碱性磷酸酶,RNase,PEG8000等,硝酸纤维滤膜,抗人脑髓鞘碱性蛋白ELISA试剂盒。干预:①采用EcoR1和BamH1酶切人脑髓鞘碱性蛋白基因cDNA克隆片段。②重组表达载体p5TMP的构建及转化。③重组表达载体转化菌的生长及其诱导表达。④重组hMBP抗体制备主要观察指标:①蛋白表达产物的检测与鉴定。②人脑hMBP抗体检测与鉴定。结果:①分别有4999bppGEX-5TDNA和557bp人脑髓鞘碱性蛋白插入片段。②原对照质粒一条浓区带消失,而重组体有特异蛋白质区带出现。相对分子量为42000。③5次注射人脑髓鞘碱性蛋白后抗体效价达到1/16。并证实其hMBP抗原特异性。结论:本文构建了含相对分子质量为21500人脑髓鞘碱性蛋白外显子Ⅰ-Ⅶ编码序列的表达载体,还成功制备了重组人脑髓鞘碱性蛋白抗体。     

Variation of Myelin Basic Protein and Its Antibodyin Serum in Senile Dementia Patient

Trying to explore whether the senile dementiapatients had the cranial neuron myelinoclasis,wedetected the content of myelin basic protein(MBP) andits antibody (Anti- MBP) in serum in 113seniledementia patients(74 Alzheimer’s disease patients,39multi- infarct- dementia patients) and 6 6 old healthypersons using the method of the simple enzyme linkimmunesorbent assay.The results were as following:　　 We selected 113senile dementia(SD) patients(53males and 6 0 females) whose age was 78± 8(…     

脑源性神经营养因子基因转染培养肌母细胞的表达

目的了解含脑源性神经营养因子(BDNF)基因的表达质粒PSVCEP BDNF-CAT在培养肌母细胞中的表达情况及Lipofeot AMINE阳离子脂质体介导的转染效率.方法按每2μg表达质粒PSVCEP BDNF-CAT由20μl Lipofect AMINE包裹后转染至细胞浓度为2×108个/L的3.5 cm培养皿培养的肌母细胞中,连续观察细胞形态,48 h后用免疫细胞化学和免疫电镜的方法来检测其表达情况.结果培养肌母细胞在转染6 h吞噬脂质体最显著,转染48 h后,40%的肌母细胞胞质内有BDNF基因表达,免疫电镜结果证实表达在细胞质近胞膜处.结论含BDNF微基因的表达质粒PSVCEP BDNF-CAT可以在培养肌母细胞中表达,脂质体转染的方法简便、有效.