HIV感染者/AIDS患者外周血T细胞抗原受体γδT细胞的检测及其临床意义

目的　探讨外周血T细胞抗原受体 (TCR)γδT细胞在艾滋病病毒 (HIV)感染者 /艾滋病 (AIDS)患者疾病进程中的作用。方法　应用流式细胞仪采用三色荧光抗体染色技术分别检测 18例HIV感染者、2 9例AIDS患者、2 5例伴有机会性感染的AIDS患者、2 0例高效抗逆转录病毒联合疗法 (HAART)治疗后的AIDS患者及 2 0例正常对照者外周血的TCRγδT细胞与TCRαβT细胞。 结果　HIV感染者组和AIDS患者组的外周血TCRγδT细胞的百分率比正常对照组明显地增高 (P <0 0 1) ,而TCRαβT细胞的百分率明显地低于正常对照组 (P <0 0 1) ,AIDS患者组的CD+ 3 细胞的百分率明显地低于HIV感染者组和正常对照组 (P <0 0 1)。AIDS患者伴机会性感染组的外周血TCRγδT细胞的百分率明显地高于HAART治疗后的AIDS患者组 (P <0 0 1) ,该组的TCRαβT细胞的百分率及CD+ 3 T细胞的百分率则明显地低于经HAART治疗后的AIDS患者组 (P <0 0 1)。结论　TCRγδT细胞数量增多是机体受到病毒感染时的一种早期非特异性免疫反应 ,在AIDS的疾病进程中及机会性感染时起一定的免疫防御作用。     

严重急性呼吸综合征患者不同临床标本中冠状病毒基因结果分析

为了解严重急性呼吸综合征 (SARS)患者不同标本中SARS冠状病毒RNA的阳性检出率 ,对我院收治的 2 7例SARS患者的咽拭、漱喉液、血清 (浆 )、外周血单核细胞(PBMC)及粪标本SARS冠状病毒进行检测 ,现将结果报告如下。材料和方法一、样本来源2 7例SARS患者不同标本 ,采自本院 2 0 0 3年 2～ 4月住院患者 ,男 14例 ,女 13例 ,年龄最大 6 9岁 ,最小 6岁 ,平均年龄 (31.4± 10 .2 )岁。所有病例均符合广东省传染性非典型肺炎防治方案的诊断标准。 30例咽拭子对照为远离市区的植物园园工 ;粪及血清 (浆 )对照为 2 0 0 2年 6月本院职工体…     

一步法ELISA在HIV初筛中的应用探讨

目的探讨一步法ELISA试剂在HIV抗体初筛实验中是否存在高剂量钩状效应，及其影响程度和对策。方法分别采用一步法和二步法HIV抗体ELISA检测试剂盒对10例确诊抗体阳性样本进行检测以及样本梯度稀释后再复检。结果10例确诊样本二步法结果均阳性，一步法仅7例阳性；假阴性样本经10—1和10—2稀释后，再用一步法检测时结果均为阳性。结论ELISA一步法试剂的检测范围不可忽视。一步法双抗原夹心ELISA检测HIV抗体时的明显前带现象是潜在的漏检导致因素，应用于HIV初筛效果不如二步法。     

老年急性甲肝及甲、乙型肝炎合并、重叠感染临床配对分析

本文对老年急性甲肝及甲、乙型肝炎合并、重叠感染的临床特点、实验室指标变化规律、近期转归及夹杂症等,与成年人进行临床配对分析。结果显示;老年组瘀胆现象比成年组高.血清胆红质消退时间延长,血清白蛋白降低较明显,且夹杂症多。     

慢性乙型肝炎患者YMDD变异合并前C/C区启动子变异的临床研究

目的 探讨慢性乙型肝炎患者中拉米夫定诱导的YMDD变异和前C区1896位核苷酸以及C区启动子1762和1764位核苷酸变异的检出率及其临床意义。方法 采用基因芯片技术检测拉米夫定治疗6个月以上的122例慢性乙型肝炎患者血清中前C区1896位以及C区启动子1762和1764位核苷酸变异发生率。结果 122例慢性乙型肝炎患者中检出40例YMDD变异阳性患者，检出率为32.8％。发生YMDD变异后，HBVDNA反跳，ALT和AST增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。YMDD变异阳性患者前C区1896位和C区启动子1762和1764位核苷酸变异检出率显著高于无YMDD变异的慢性乙型肝炎患者，差异有统计学意义（P〈0．01）。YMDD变异阳性伴前C区1896位以及C区启动子1762和1764位核苷酸变异患者与无前C区1896位以及C区启动子1762和1764位核苷酸变异的YMDD变异阳性患者比较．病情容易加重、易发展为重型肝炎或肝硬化，但差异无统计学意义（P〉O．05）。结论 拉米夫定诱导的YMDD变异患者容易发生前C区1896位／C区启动子1762和1764位核苷酸变异，但与病情加重和预后无相关性。     

Ⅰ型人类免疫缺陷病毒的核酸异质性及准种特点的研究

目的研究Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)膜蛋白基因(env)的准种与变异特点.方法采用巢式PCR方法对5例艾滋病患者血浆HIV-1env基因C2～V3区进行PCR扩增,产物经纯化后克隆至pMD-18T载体中,每例患者分别挑取5～8个克隆,共34株,完成阳性克隆的鉴定、抽提纯化和测序,将获得的DNA序列及氨基酸序列进行分析,并计算其氨基酸同源替换率(ds)与非同源替换率(dn)的比值.结果同一患者体内HIV准种株平均为83.5%,各克隆株之间的核苷酸同源性在88%～99%之间;不同患者之间的核苷酸同源性在75%～91%;34株序列的V3区平均变异频率明显高于C2～C3区(P＜O.05);而V3区和C2～C3区的ds/dn比值均＞1.结论艾滋病患者体内有大量HIV准种存在,基因的变异在V3区发生较频繁,免疫选择压力在该区变异中不起主要作用.     

乙肝病毒DNA和前S1抗原及其标记物三者相关性分析

目的探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1)与乙肝病毒DNA(HBV DNA)、乙肝病毒标志物(HBVM)之间的相关性,为拉米夫定(Lamivudine)治疗提供新的监测指标。方法收集慢性乙型病毒性肝炎患者500例,其中HBV DNA阳性400例(拷贝数>500/ml),按HBV-DNA含量由低到高分8组;其余为HBVDNA阴性对照100例。同步以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测PreS1;以电化学免疫发光法检测乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒表面抗原(HBsAg);以荧光定量PCR法检测HBV DNA(以HBV DNA拷贝数>500/ml为阳性)。结果(1)在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,PreS1的阳性率比HBeAg高(P<0.05);在HBV DNA拷贝数1×106/ml以上,二者阳性率无显著性差异(P>0.05);(2)PreS1的灵敏度为90%(360/400),高于HBeAg的68.5%(274/400)(P<0.05);PreS1的阴性预示值为55.6%(50/90),高于HBeAg的43.2%(96/222)(P<0.05);PreS1的检测有效率为82.0%(410/500),高于HBeAg的64.8%(324/500)(P<0.05)。(3)在HBVDNA拷贝数500~1×104/ml之间,HBsAg的阳性率比PreS1高(P<0.05),在HBVDNA拷贝数1×104/ml以上,HBsAg的阳性率与PreS1的阳性率无显著性差异(P>0.05)。在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,HBeAb有较高的阳性率。结论PreS1与HBVDNA具有较好的相关性,其检测灵敏度和阴性预示值、检测有效率都优于HBeAg检测。PreS1可作为拉米夫定等抗病毒药物疗效观察指标之一。HBeAg阴性、HBeAb阳性不是传染性消失的可靠指标。     

肠道病毒71型手足口病ELISA诊断试剂盒研制与临床应用

目的 研制早期快速检测抗肠道病毒71型(EV71)抗体的ELISA血清学诊断性试剂盒,评价其临床应用价值.方法 将表达纯化的EV71重组蛋白VP1作为包被抗原,建立EV71型手足口病间接ELISA的血清学检测方法 .通过与逆转录(RT)PCR方法 、EV71病毒分离试验和微量血清中和试验比较,评价抗.EV71 IgM和抗-EV71 IgG血清学诊断方法 在EV71型手足口病的诊断价值.结果 与RT-PCR比较,抗-EV71 IgM敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为83%、85%、81%和87%;抗.EV71 IgG敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为72%、74%、68%和77%.与EV71病毒分离方法 比较,抗-EV71 IgM敏感度、特异度分别为85%和97%;抗-EV71 IgG敏感度、特异度分别为75%和77%.通过直线相关分析发现,抗-EV71 IgG抗体滴度和中和抗体滴度呈显著正相关(r=0.72,P＜0.05).EV71型手足口病患儿恢复期血清抗IgG滴度较急性期升高(P＜0.01),但抗IgM滴度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 利用VP1重组蛋白作为包被抗原,成功开发ELISA检测人血清抗-EV71 IgM和抗-EV71 IgG抗体的诊断试剂盒.     

TLMV5＇非编码区基因的克隆与序列分析

目的　调查TTV阴性的非甲～庚型肝炎患者中TTV～like mini virus(TLMV)感染情况,对TLMV5＇非编码区(5＇NCR)部分基因进行分子克隆与序列分析。方法　采用巢式PCR技术检测53例T T V阴性的非甲～庚肝炎患者血清TLMV DNA,对PCR产物进行克隆、测序和分析。结果　53例病例中TLMV DNA阳性37例(69.8％),对其中8株TLMV基因克隆测序,并与Takahashi报道的TLMV序列(GenBank Accession No ab 026930、ab026931)比较,其核苷酸序列同源性在64％～83％之间。结论　在T TV阴性的非甲～庚肝炎患者中存在TLMV感染。TLMV5＇NCR基因变异性较大。TLMV的致病性及其与非甲～庚肝炎的关系尚有待进一步研究。     

乙型肝炎病毒多聚酶基因YMDD变异与临床治疗反应

目的：了解深圳地区慢性乙型肝炎患者在长期拉米夫定治疗中HBV多聚酶基因YMDD变异的情况及其对治疗反应的影响。方法：对100例拉米夫定治疗中28例出现血清病毒核酸（HBV DNA）阳性的患者,采用限制性片段长度多态性分析法（PCR－RFLP）检测YMDD变异,并观察其血清HBV DNA及丙氨酸转氨酶（ALT）水平。结果：100例中有17例YMDD变异阳性，其中以YVDD（M550V）变异为主,占64．7％（11／17），YIDD（M550I）变异为35．3％（6／17）。发生YMDD变异的患者均伴有HBV DNA及ALT水平反跳，1例住院患者停用拉米夫定后出现病情加重。结论：深圳地区慢性乙型肝炎患者在长期拉米夫定治疗中（疗程1年，100md/d）HBV多聚酶基因YMDD变异率为17．0％（17／100）。发生变异者较无变异者疗效降低，检测YMDD变异有助于监测疗效。