干扰素抗体对干扰素α-1b疗效影响的动态研究

采用酶联免疫法检测了１４８例接受干扰素（ＩＦＮ）治疗慢性乙肝患者血清中的干扰素体（抗－ＩＦＮ），结合ＨＢＶ ＤＮＡ荧光定量检测动态分析抗－ＩＦＮ产生对ＩＦＮ疗效的影响。结果显示：在抗体阳性者中，抗－ＩＦＮ的产生能够逆转ＨＢＶ ＤＮＡ水平的下降趋势，应答率和持续应答率均明显低于抗体阴性者（Ｐ〈０．０１）。提示抗－ＩＦＮ可能是影响ＩＦＮ近、远期疗效的重要因素。     

同一试剂在三种荧光定量PCR检测仪的应用效果及评价

目的:比较三种荧光定量PCR检测仪的偏倚。方法:采用实时荧光定量PCR,随机选择我院门诊和住院病人标本42例,用同一种试剂抽提DNA摸板后,分别在PE7000、伯乐及罗氏定量PCR扩增仪平行测定。结果42份样品在三种PCR检测仪上所测定HBVDNA拷贝/ml对数均值分别为5.625±1.449、5.420±1.960、5.803±1.536,三组之间比较无差异(P>0.1)。以测定拷贝数值≤或≥5.0×105/ml将其分为二组,在标本HBVDNA含量≤5.0×105拷贝/ml,伯乐测定值偏低,与罗氏比较差异有显著性意义((P<0.05))。结论伯乐仪器对HBVDNA低拷贝含量标本检测值偏低,PE7000型仪器有操作简单、耗材低廉、检测数据稳定及价格适中等优点,更适合于临床。     

一种新型冠状病毒基因的克隆和序列分析与传染性非典型肺炎病原学的调查

目的 探讨冠状病毒感染与传染性非典型肺炎发病的关系，分析冠状病毒基因序列变异的临床意义，建立诊断冠状病毒变异株感染的分子生物学方法。方法 收集非典型肺炎(SARS)患者的不同临床标本，采用PCR技术分别进行衣原体、甲肺炎病毒以及冠状病毒等的基因检测。以冠状病毒相对保守的依赖RNA的RNA多聚酶基因为靶基因，采用Nested RT—PCR技术从非典型肺炎患者的鼻咽吸取物标本和濑喉液标本中扩增出冠状病毒基因，将PCR产物直接克隆到T载体，进行序列测定，进一步比较不同分离株间的核苷酸和氨基酸序列同源性。结果 在27例非典型肺炎患者中检出冠状病毒基因阳性6例，阳性率为22．2％。而在15例健康对照中，全部阴性。采用BLAST软件将所获得的冠状病毒的基因序列与基因库(GenBank)登记的序列比较，结果显示本次分离克隆的冠状病毒基因与既往报道的所有冠状病毒在核苷酸水平没有相关性，核苷酸同源性最高不超过40％。但在氨基酸水平的同源性为80％左右(70％-82％)。从不同患者中分离的冠状病毒基因之间在核苷酸水平的同源性在98％以上。与刚刚公布的加拿大、中国香港、英国等SARS冠状病毒的核苷酸序列同源性在99％以上。结论 相当部分非典型肺炎患者存在冠状病毒的感染，提示本次的非典型肺炎发病与感染冠状病毒有关。序列分析结果表明从本次非典型肺炎患者中分离的冠状病毒为一种新的冠状病毒，并与世界其他地区分离的SARS冠状病毒同源性达99％以上。以RNA多聚酶为靶基因Nested RT—PCR技术可以用于诊断这一新种冠状病毒感染。     

应用MALDI-TOF-MS技术高通量检测乙肝病毒耐药基因变异

目的 建立基于MALDI-TOF-MS技术的高通量检测乙型肝炎病毒耐药基因变异的临床检测方法 .方法 应用MassARRAY Assay Design软件设计iPLEX引物,按iPLEX反应的操作说明进行PCR扩增、SAP反应、引物延伸、脱盐、点样,MALDI-TOF-MS采集、分析iPLEX反应物的数据,判读基因变异位点.批量检测、分析138例HBV耐药包括拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦单药耐药及多重耐药的慢性乙型肝炎患者血清标本.并对MALDI-TOF-MS所检测的HBV基因变异位点所在区域进行DNA测序,与MALDI-TOF-MS检测结果 对比、分析.结果 建立了基于MALDI-TOF-MS技术的HBV基因突变检测平台,实现了临床血清标本的高通量检测.能一次获得138份标本的HBV基因突变临床检测结果 .MALDI-TOF-MS技术和DNA测序同时检测的33份标本中,有10份检测结果 不一致,其中有2份MALDI-TOF-MS技术未检测到,有1例出现2个检测位点不一致.结论 MALDI-TOF-MS技术灵敏度高、准确度高,可高通量、快速检测HBV基因变异,适用于HBV临床诊治及监测.     

HBcAg与前S1抗原部分基因的融合表达及其抗原性分析

我国是慢性乙型肝炎 (ＣＨＢ)高发区 ,虽然目前有多种抗ＨＢＶ药物用于ＣＨＢ的临床治疗 ,但疗效不尽人意 ,且价格昂贵。寻找治疗ＣＨＢ和慢性乙型肝炎病毒携带者的有效方法仍是当前急需解决的问题。研究表明 ,ＨＢＶ核心抗原和前Ｓ1抗原在ＨＢＶ感染清除方面具有重要的作用[1 4 ] 。本实验将ＨＢＶ核心抗原与前Ｓ1抗原部分基因融合表达 ,并对其抗原性进行分析。材料和方法一、表达载体和菌株表达载体 ｐＥＴ 11ｄ和工程菌ＢＬ2 1为Ｎｏｖａｇｅｎ公司产品。二、试剂Ｋｌｅｎｏｗ酶、Ｔ4ＤＮＡ连接酶为Ｐｒｏｍｅｇａ公司产品 ,内切酶Ｂａｍ…     

不明病因感染性疾病DNA病毒性病原检测方法的建立

目的建立不明病因感染性疾病DNA病毒性病原的检测方法。方法应用DNaseI-非序列依赖的单引物扩增技术,将患者血清过滤后,经DNase I处理去除血清中内源DNA。Csp6.I酶切病原DNA,加接头分子,并以接头分子为引物非特异扩增病原DNA,测序并进行序列分析。结果DNaseI处理血清中内源DNA不会降解病毒DNA;非序列依赖的单引物扩增血清中外源DNA得到多个DNA片段;将所有PCR产物测序,序列与已知病原DNA序列完全一致。结论应用DNaseI处理及非序列依赖的单引物扩增方法可以检测DNA病毒性病原。     

ELISA法检测不同e系统感染模式组中HBeAg S/CO值与HBVDNA定量结果的分析

采用 EL ISA法测定了 HBe Ag S/ CO值的大小并与 HBVDNA含量进行了比较。结果显示 ,在 HBe Ag、HBVDNA都为阳性时 ,HBe Ag S/ CO值与 HBVDNA含量成正相关 ;在 HBe Ag、HBe Ab同时为阳性时 ,HBe Ag S/ CO值及 HBVDNA含量均明显降低     

乙肝病毒外膜大蛋白检测在诊断乙型病毒性肝炎中的临床意义

目的通过检测乙肝患者血清中乙肝病毒外膜大蛋白(HBV-LP)、HBV、DNA、以及乙肝两对半(HBVM),探讨HBV-LP与HBVDNA浓度的相关性.方法共检测354例乙肝患者血清标本,HBV-LP、乙肝前S1蛋白(Pre-SlAg)以及乙肝两对半采用酶联免疫方法进行检测,采用实时荧光定量PCR方法检测HBV DNA.结果(1)在290份HBV DNA阳性标本中HBV-LP的阳性率(88.62%)明显高于乙肝病毒前S1的阳性率(48.97%),两者之间差异有显著性(P＜0.05);(2)HBV-LP吸光度值与HBV DNA拷贝数呈正相关性,相关系数r=0.939;(3)在HBeAg阳性和阴性标本中,Pre-SlAg的检出率则明显低于HBV-LP和HBV DNA.结论本研究结果显示HBV-LP与HBV DNA有良好的正相关性,HBV-LP检出与HBV DNA的符合率高于Pre-SlAg,HBV-LP检测可以用于反映乙肝患者病毒复制的血清免疫学指标.     

HBV拉米夫定耐药株多聚酶基因变异的研究

我们采用PCR-RFLP(限制性片段长度多态性分析)检测HBV多聚酶基因YMDD变异,并将其与核苷酸序列测定结果进行比较,现报道如下。     

TTV酶联免疫方法的建立及其初步应用

目的 建立检测TTV的酶免疫技术,了解不同型肝炎患者血清中抗－TTV抗体的分布情况,并结合TTV DNA的检测分析两者的关系。方法 以原核表达的TTV ORF1蛋白为抗原建立检测抗－TTV的酶联免疫吸附试验（ELISA）方法,采用该方法检测不同肝炎患者中抗－TTV抗体;在套式聚合酶链反应（PCR）方法检测血清标本中TTV DNA。结果 所建立的检测TTV的ELISA方法具有较好的特异性,不同别肝炎患者中抗－TTV抗体阳性率分别为：甲型肝炎患者10.5%（4／38）,乙型肝炎患者12.5%（16／128）,丙型肝炎患者8.3%(7/84),丁型肝炎患者7.7%(30/93),健康人群1.3%(1/78)。统计学分析表明,非甲－庚型肝炎患者抗－TTV阳性率显著高于其他型肝炎患者（P＜0.01）,而正常人群则显著低于肝炎患者（P＜0.05）。抗－TTV阳性率与TTV DNA阳性率存在相关性（P＜0.05）。结论 在不同型肝炎患者中均可检出抗-TTV抗体,但以非甲－庚型肝炎患者阳性率高;TTV抗体可与基因同时存在于患者血清中,抗－TTV抗体可能类似抗－HCV, 是一传染性标志。