肿瘤转移抑制基因nm23-H1对不同宫颈癌细胞侵袭和增殖的作用

背景与目的：nm23-H1是一种多效性基因,其抑癌作用有一定的组织特异性。本研究目的在于探讨nm23-HI对不同宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用。方法：将真核表达载体pcDNA3．1-nm23-HI转染入宫颈癌细胞,Transwell小室法检测转染前后细胞侵袭性改变。M1Tr法绘制生长曲线,比较细胞增殖能力。流式细胞仪检测细胞周期改变。结果：与亲本细胞Caski、SiHa和空载体转染细胞Caski-3．1、SiHa-3．1相比．pcDNA3．1-nm23-H1转染细胞Caski—N和SiHa—N的侵袭力和增殖受到明显抑制（P〈0．05）,G2／M期和S期细胞比例降低（P〈0．05）,而G。／G．期细胞比例明显增加（P〈0．05）。nm23-H1对HeLa细胞增殖、侵袭及细胞周期均无明显影响（P〉0．05）。结论：nm23-H1对不同宫颈癌细胞的增殖和侵袭等细胞表型可产生细胞特异性的抑制作用。     

卵巢上皮性癌的淋巴管形成及其临床病理意义

淋巴管形成是近年肿瘤研究的热点,淋巴管形成与肿瘤的淋巴转移、扩散关系密切,是肿瘤患者预后差的重要标志,阻断淋巴管形成可以阻止癌细胞的淋巴转移[1-2].     

Livin shRNA表达载体的构建及其稳定转染宫颈癌siha细胞系的建立

目的 构建Livin shRNA真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的宫颈癌siha细胞系.方法 合成Livin基因干扰序列并定向插入到RNA干扰(RNAi)真核表达载体pGenesil-1质粒,通过测序进行鉴定.干扰质粒经脂质体Lipofectamine 2000介导转染siha细胞.经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.RT-PCR检测所筛选克隆Livin mRNA的转录水平.结果 测序证明Livin干扰序列及读码框完全止确,干扰质粒稳定转染的siha细胞在倒置荧光显微镜下呈明亮绿色荧光.RT-PCR结果显示Livin shRNA序列对Livin mRNA有较好的抑制效果.结论 成功构建了Livin shRNA真核表达载体,Livin shRNA质粒稳定转染的siha细胞系的建芷为进一步研究Livin在官颈癌细胞中的作用奠定了基础.     

早期宫颈癌和癌前病变中微血管密度和微淋巴管密度的相关性研究

目的 同时检测早期宫颈癌和癌前病变中的肿瘤微血管密度(MVD)和微淋巴管密度(LVD),分析它们之间的关系及其临床意义.方法 采用SP法利用抗人CD34和D2-40单克隆抗体分别检测102例宫颈组织中的MVD和LVD水平,并结合临床资料分析MVD和LVD与肿瘤的临床分期、淋巴结状态和肿瘤细胞分化程度之间的关系.结果 在早期宫颈癌和癌前病变中MVD与临床分期(P＜0.01)和患者盆腔淋巴结转移(P＜0.05)有显著相关性;LVD与临床分期(P＜0.01)、患者盆腔淋巴结转移(P＜0.01)和肿瘤细胞的分化程度(P＜0.01)有显著相关性.研究还发现早期宫颈病变组织中MVD和LVD的水平呈正相关(r=0.620,P＜0.01).结论 早期宫颈病变中MVD和LVD与宫颈病变的临床进展和转移密切相关,高MVD和LVD促进宫颈病变的发展和转移,并且早期宫颈癌的血管新生和淋巴管新生密切相关.     

人宫颈癌发生中p16INK4A表达缺陷与其外显子甲基化的关系

目的 研究抑癌基因p16INK4A在宫颈癌发生中的表达变化，分析这种差异表达与甲基化的关系。方法 逆转录聚合酶链技术（RT．P（1R）检测30例宫颈癌组织标本、48例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织（CIN Ⅰ12例、CINⅡ16例、CINⅢ20例）中p16INK4A基因的表达。Western Blot分析P16INK4A蛋白水平的表达。甲基化特异性的PCR技术（MSP）对p16INK4A DNA进行甲基化分析。以每例标本相应正常宫颈组织作为对照。结果 70％（21／30）宫颈癌组织中p16INK4A表达下降或缺失，与正常宫颈组织、CIN Ⅰ和CINⅡ中的p16INK4A表达相比，差异具有统计学意义（P〈0．05），与CIN Ⅲ相比差异无统计学意义（P〉0．05）。蛋白的表达检测也得到相似的结果。MsP检测发现宫颈癌组织中有9例p16INK4A外显子甲基化，甲基化率为30％，其中8例年龄小于40岁，提示甲基化易于出现在年轻患者。而CIN组织中仅CIN Ⅲ发现1例甲基化，说明甲基化随着宫颈病变的发展而增多。分析甲基化与p16INK4A表达的关系，发现42．86％（9／21）的宫颈癌组织中p16INK4A表达下降与甲基化有关，甲基化的宫颈癌组织中p16INK4A表达均下降。结论 p16INK4A作为一种抑癌基因，它的表达缺失或下降在宫颈癌的发生中起重要作用，外显子甲基化是导致其表达缺陷的部分原因。     

子宫浆膜下间皮囊肿误诊附件包块的临床分析

子宫浆膜下间皮囊肿在妇科肿瘤中发病率极低，文献报道不多。临床医生对之认识不足，且因其症状、体征及超声表现特征不明显，术前诊断比较困难。本院近10年来仅诊治2例子宫浆膜下间皮囊肿患者。术前均误诊为附件包块，现结合病例复习如下。     

卵巢癌组织中环氧合酶-2的表达研究

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）在卵巢癌组织中的表达及意义.方法应用原位杂交和RT-PCR技术检测正常卵巢和卵巢癌组织中COX-2 mRNA的表达情况.结果 38例卵巢癌组织,原位杂交检测COX-2 mRNA表达阳性23例,阳性表达率为61%;RT-PCR技术检测33例表达阳性,阳性表达率为87%;两种方法检测的20例正常卵巢组织COX-2 mRNA均呈阴性表达.结论 COX-2在卵巢癌组织高表达,并在其发生发展中起重要作用.     

凋亡抑制蛋白Livin shRNA真核表达载体的构建

目的设计构建Livin的shRNA真核表达载体，并转染宫颈癌HeLa细胞，进一步研究该表达载体对目的基因Livin的沉默效果，为宫颈癌基因治疗探索新方法。方法以Livin为靶基因，以Pgenesil-1质粒为载体，构建重组体，根据Livin基因cDNA序列，设计shRNA寡核苷酸序列，退火后克隆到空载体Pgenesil-1中，转化DH5α菌株，提取质粒，进行酶切鉴定和测序分析。将构建好的真核表达载体转染宫颈癌HeLa细胞。结果经酶切鉴定出的重组体测序结果与目的序列相同，重组载体构建成功，并被成功转入宫颈癌HeLa细胞，可见绿色荧光蛋白表达，48 h转染效率最高。结论利用RNA干扰技术可成功构建小干扰RNA重组体，为进一步研究宫颈癌基因治疗奠定基础。     

NS-398对宫颈癌细胞系的增殖抑制作用及对survivin基因表达的影响

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对宫颈癌HeLa,SiHa细胞系的增殖、凋亡作用及其对凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法:体外培养宫颈癌HeLa,SiHa细胞系,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析不同浓度的NS-398分别作用于HeLa,SiHa细胞系24h、48h后对细胞增殖的作用;流式细胞仪(FCM)检测对细胞凋亡的作用;RT-PCR分析对凋亡抑制基因survivin表达的影响。结果:MTT检测显示,NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞系增殖,并有浓度时间依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测提示,NS-398可诱导HeLa,SiHa细胞系凋亡,有浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR分析表明,NS-398可抑制HeLa,SiHa细胞系凋亡抑制基因survivinmRNA表达,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞增殖,诱导凋亡,其机制与抑制凋亡抑制基因survivin mRNA表达有关,为宫颈癌治疗提供了新的靶点和理论依据。