中国乙型肝炎病毒毒株X基因／C基因启动子发现热点变异

目的：HBV／X基因存在调控HBV复制的调节序列．X基因变异将影响这些调节序刊功能，研究中国HBV毒株X基因／C基因启动子(BCP)区变异情况。方法：通过对25例中国HBV毒株BCP区测序．推测中国HBV毒株BCP区第2个AT丰富区的一对点突变，核苷酸(nt)1762碱基由A→T和1764碱基由G→A变异可能为热点变异。在此基础上．进一步设计BCP下游反义链错配引物，将点突变附近的一个碱基(nt1767)由A→T，则正好可在BCP变异株中引进一个BclⅠ(T↑GATCA)酶切位点，结合限制性片段长度多态性分析(RFLP)筛检143例中国人感杂的HBV毒株BCP区变异．并与前C区变异比较。结果：114倒血清HBVDNA阳性慢性HBV感染者．BCP区和(或)前C变异者49倒(43％)．BCP变异者37例(32％)。BCP变异无论在HBeAg阳性或阴性慢性肝炎病例的发生率均显著高于HBV无症状感染者。BCP可与前C终码变异共存或单独出现。结论：在中国HBV毒株BCP区存在热点变异。HBV毒株BCP变异可能影响HBV前C基因组mRNA转录，是HBV感染持续和肝病变进展的原因之一。     

HBeAg阳性和阴性慢性乙型肝炎患者YMDD的变异

目的研究YMDD变异在HBeAg阳性和HBeAg阴性乙型肝炎病毒（HBV）感染者中发生的情况.方法对我科接受拉米夫定治疗的247例慢性乙型肝炎患者进行定期随访,检测肝功能和HBV病毒学指标,利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测YMDD变异,利用实时定量PCR检测HBV DNA定量以及利用Abbott试剂检测HBV标志物,对比分析HBeAg阳性和HBeAg阴性患者中YMDD变异的发生情况.结果247例患者中共有42例出现YMDD变异,YMDD变异的累积发生率随着时间的延长逐年增加.与治疗前HBeAg阴性患者相比,治疗前HBeAg阳性患者YMDD变异的发生率明显高于治疗前HBeAg阴性患者.结论HBeAg阳性患者YMDD变异年累积发生率高于HBeAg阴性患者.     

拉米夫定长期维持应答患者血清乙型肝炎表面抗原水平的变化特点

目的 了解拉米夫定长期治疗下血清HBsAg的动态变化特点.方法 研究对象为HBeAg阳性、拉米夫定为初始抗病毒治疗且取得快速和持久(从治疗24周至观察期末HBV DNA持续检测不到)病毒学应答的慢性乙型肝炎患者.血清HBsAg定量检测采用雅培Architect方法,HBV基因型用直接测序法确定.结果 3年观察期间有26例(57.8%)患者发生HBeAg转阴(其中1例HBsAg转阴).治疗12周时血清HBsAg水平中位数降至基线的39.5%(P<0.01),但之后下降不明显.血清HBsAg的变化特征在HBcAg转阴或持续阳性的患者间相似.基因B型患者在治疗头12周血清HBsAg水平下降幅度较基因C型更大(75.5%比26.0%,P<0.05).在个体患者中,血清HBsAg的动态变化类型主要有双相型(治疗12和24周HBsAg低于基线的60%)和稳定型(治疗12和24周HBsAg高于基线的80%).基线血清HBsAg水平低(比数比值为0.020,95%可信区间为0.002~0.743,P<0.05)和基因C型感染(比数比值为8.206,95%可信区间为1.070~62.948,P<0.05)是血清HBsAg在拉米夫定长期治疗下下降不明显的主要因素.结论 血清HBsAg在拉米夫定快速和持久抑制HBV复制时主要表现为两种变化类型,并和HBV基因型关系密切.     

回族乙型肝炎病毒基因型分布及其临床意义

乙型肝炎病毒（HBV）分为8种不同的基因型。其型别与患者的病情严重程度及预后等有密切关系，其分布也存在一定的区域及民族差异。为进一步明确回族人群HBV基因型分布情况及其临床意义，进行了此项研究。     

肾癌肿瘤相关抗原G250/MN/CAⅨ基因的克隆、表达及鉴定

目的报道G250/MN/CAⅨ基因的克隆,蛋白表达及鉴定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RTPCR法扩增G250/MN/CAⅨ全长cDNA,将获得的cDNA片段插入pET22b(+)表达载体,转化BL21大肠杆菌中,以IPTG诱导进行蛋白表达,SDSPAGE凝胶电泳观察结果,实验验证。结果克隆的G250/MN/CAⅨ基因经测序证实序列正确,构建重组质粒pET22b(+)/G250并在原核系统中表达G250/MN/CAⅨ重组蛋白,该蛋白具有较好的抗原性和特异性。结论成功完成G250基因克隆,为在G250蛋白纯化基础上进行抗体制备和G250功能研究提供了实验依据。     

检测HBV DNA基因型的方法学探讨

迄今发表的ＨＢＶＤＮＡ全序列已有６１株，根据其核苷酸序列的差异分为Ａ～Ｆ６个基因型。我们利用ＰＣＲ和限制性片段长度多态性分析技术，由慢性无症状ＨＢＶ携带者血清扩增病毒Ｓ基因区，建立了新的分型方法；用此方法对广州地区６１名慢性无症状携带者的ＨＢＶＤＮＡ进行分型，发现主要为Ｂ、Ｃ两种基因型。     

一例慢性乙型肝炎病人YMDD突变及阿德福韦耐药突变的动态变化

患者男，32岁，HBsAg阳性4年余。应用拉米夫定100mg／d治疗近3年时出现YMDD突变；直接转换到阿德福韦10mg／d治疗，之后ALT、HBVDNA水平逐渐下降，但在阿德福韦治疗80周后出现病毒突破。不定期随访病人，采集的血清分别是拉米夫定转换为阿德福韦治疗的前2周，后12、24、60、80和84周。HBVDNA定量检测仪器为Roche公司Lightcycler；采用Qiagen公司的全血抽提核酸试剂盒抽提HBVDNA。第一轮PCR扩增引物为BSl和POL2；利用引物SS2和POL2进行第二轮扩增，产物用来直接测序或克隆。     

乙肝病毒表面抗原'a'决定簇变异对其抗原性的影响

目的探讨乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阴性HBV感染的发生与HBsAg‘a’决定簇区变异的关系。方法对7例HBsAg阴性HBV感染者的HBVS基因区序列进行分析,并与GenBank/EMBL/DDBJ数据库中的不同基因型参考序列进行比较,分析‘a’决定簇区氨基酸的变化情况。结果7例感染者中5例为adr/C型,2例为adw/B型,未发现其它亚型及基因型的存在。3例感染者的毒株在主要亲水区(MHR)内未发现氨基酸变异,另外4例感染者的毒株均存在不同程度的氨基酸替代,包括单点和联合突变,变异位点包括Q101K、T116I、K122N、T126N、Q129R/N、T131A、C138Y、N146S、C147F。结论HBsAg‘a’决定簇区变异不是形成HBsAg阴性HBV感染的唯一原因,但确是形成HBsAg阴性感染的一个重要因素。     

慢性乙肝患者外周血HBcAg18-27V/I变异体特异性淋巴细胞分析

目的 分析不同HBcAg18-27V/I变异体特异性淋巴细胞的频数在慢性乙肝患者外周血中的差异.方法 收集44例ALTo≥2×ULN的慢性乙肝患者外周血淋巴细胞,通过PCR方法分析感染者病毒学背景(HBV基因型、HBcAg18-27V/I、HLA-A2基因型),应用流式细胞仪分别检测HBcAg18-27V-Tetramer( )CD8( )和HBcAg18-271-Tetramer( )CD8( )的淋巴细胞频数.结果 华南地区慢性乙肝患者主要为HLA-A2基因型(22/44);感染的HBV主要为B基因型(35/44).其中HBcAg18-27为I变异体的占优势(43/44),在A2阳性组中,HBcAg18-27I-Tetramer( )CD8( )的淋巴细胞频数与HBcAg18-27V.Tetramer( )CD8( )的淋巴细胞频数(0.41±0.52 vs 0.28±0.43)比较差异有统计学意义(P＜0.001).结论 在HBV基因型B/C为主的地区,应用HBcAg18-27V表位进行细胞免疫学研究而不考虑HBV病毒学背景的结果可能导致一定的偏差.