基因变异研究技术及其在乙型肝炎病毒研究中的应用

基因变异研究技术及其在乙型肝炎病毒研究中的应用５１０５１５第一军医大学南方医院候金林，王战会，杨洁关键词基因，病毒；乙型肝炎；肝炎病毒中国图书资料分类号Ｒ５１２．６２乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异是当前国内外临床和流行病学工作者广泛关注的问题，与之有关的...     

人类感染的SARS病毒来源于果子狸的分子病毒学依据

严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome，SARS)于2003年2月初暴发于中国广东地区。随后迅速流行至32个国家和地区，感染人数超过8400，死亡人数超过790，至今仍没有特效的治疗药物和防治疫苗。SARS的病原体己被确认为严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)，其全序列测定也己完成。同时，SARS-CoV已被证实存在于广东居民食用的野生动物果子狸体内。     

咽拭子和痰标本中SARS冠状病毒核酸检测

目的 建立SARS冠状病毒的RT—PCR核酸检测方法。方法 合成针对SARS冠状病毒特异性引物，从SARS病人及疑似病人标本中提取RNA，经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析，并将序列与SARS冠状病毒和其它已知冠状病毒进行同源性分析。结果 从SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到多例RT—PCR阳性片段，其中8个片段经克隆和DNA序列分析证实为SARS冠状病毒序列(同源性100％)，而所有参照标本RT—PCR均为阴性。结论 该方法可用于SARS冠状病毒的RT—PCR核酸检测。     

慢性乙型肝炎病毒感染者HBsAg和抗-HBs共存的不同血清学模式及其意义分析

目的探讨慢性HBV感染者HBsAg和抗-HBs共存的不同血清学模式及其意义。方法在3042例慢性HBV感染者中筛选出HBsAg和抗-HBs共存患者93例,分析其临床特征、HBsAg和抗-HBs相对滴度模式、HBeAg状态和HBV DNA水平。结果根据HBsAg和抗-HBs水平的高（H）或低（L）,将HBsAg＋/抗-HBs＋血清学模式分为H/L、H/H、L/L和L/H四型,分别占43.0%、14.0%、35.5%和7.5%;其HBeAg＋比例依次为H/L（55.0%）〉H/H（38.5%）〉L/L（18.2%）〉L/H（14.3%）;H/L与L/L型患者HBV DNA水平之间差别显著（P=0.016）,而在H/L与H/H（P=0.569）以及H/H与L/L之间（P=0.095）均无显著性差别。结论在HBsAg和抗-HBs共存患者,HBsAg水平越低和抗-HBs水平越高,则HBeAg阳性率和HBV DNA水平越低。     

RT-PCR法检测肾癌组织中MN/CAIX基因表达

目的评价RT-PCR法检测MN/CAⅨ基因在肾癌组织表达的可靠性.方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序.结果经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN/CAⅨ条带,而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN/CAⅨ条带.结论RT-PCR法检测MN/CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的.     

光学蛋白质芯片检测乳腺癌胸苷磷酸化酶的初步研究

目的应用我国自行研制的无标记光学蛋白质芯片检测乳腺癌组织中的胸苷磷酸化酶(Thymidine phosphorylase,TP),为建立一种快速、简便的临床检测方法进行初步探索。方法将 TP 的多克隆抗体固定于已经过表面改性的固相光学抛光硅片表面上制备无标记光学蛋白质芯片,通过椭偏光学显微成像技术检测20例经病理证实的乳腺浸润性导管癌组织标本和正常组织标本中 TP 水平,以芯片灰度值表示组织中 TP 浓度高低。同时应用 ELISA 方法测定,并比较两种方法检测结果的一致性。结果 20例癌组织的灰度值35.40±11.55,20例正常组织的灰度值为26.80±8.78,两组间差异具显著性意义(P<0.05)。以44.36(正常组织平均值 2倍标准差)为阈值,乳腺癌检测的灵敏度为20.00%,特异度为100.00%。同 ELISA 检测结果相比,在20例乳腺癌组织标本检测中,两种方法的一致性具极显著意义(P<0.01)。结论我国首创的椭偏光学显微成像技术简单、直观,结合光学蛋白质芯片可用于胸苷磷酸化酶的临床检测。     

乙型肝炎病毒C/D重组体毒株的三种鉴定方法

目的针对HBV C/D重组体在我国西部地区尤其是藏族人群中广泛流行,基因分型时易被错分为D基因型等问题,建立相对准确的鉴定C/D重组体的方法。方法以来自西部地区的25例HBV感染者为例,分别通过PCR片段长度法、S和前C/C基因序列进化树分析法、全基因序列精细分析法对C/D重组体进行鉴定比较。结果 D基因型存在33 bp缺失,在S基因区酶切或测序的基础上,通过跨缺失区段的PCR产物长度可区分D与C/D重组体,该法简单易操作,适于大样本初筛;S和前C/C基因序列进化树分析法可明确鉴定C/D重组体,准确度高;全基因序列精细分析法可对重组类型和重组位点进行精确分析,结果最为可靠。结论根据研究目的不同,应综合考虑运用几种C/D重组体鉴定方法,提高研究的效率和结果的可靠性。     

结直肠癌合并肠梗阻56例诊治分析

目的:总结结直肠癌合并肠梗阻的诊断和治疗经验,探讨其漏诊原因及手术方法的选择.方法:回顾分析我院2001年2月-2007年5月56例梗阻性结直肠癌病人的临床特点及根据患者不同情况分别行一期手术和分期手术.结果:56例患者均经手术治疗,出现并发症4例,死亡1例,病死率为3.6%,其余均痊愈出院.结论:结直肠癌合并肠梗阻临床特点是:左侧结肠梗阻多见;晚期病例多见;老年患者多见.外科治疗的原则是解除梗阻,尽量切除肿瘤.应根据患者的具体情况选择合适的手术方式.     

错配PCR-RFLP检测乙型肝炎病毒X基因/C基因启动子变异

设计错配PCR-限制性片段长度多态性分析（PCR－RFLP）检测中国HBV每株C基因启动子（BCP）区第2个AT丰富区的一对点突变；核苷酸（nt）1762的碱基由A→T和1764的碱基由G→A变异。结果发现在32例慢性HBV感染者中BCP变异者有10例，总检出率为31．2％．提示在我国HBV毒株BCP区这一联合点突变较常见．PCR－RFLP技术与序列分析结合，对于研究这一新发现的热点变异与临床的关系具有重要的实用价值．     

乙型肝炎病毒外膜基因插入变异株及野株的全序列测定和系统树分析

用核酸序列分析技术，测定１例乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性中国人感染的乙型肝炎病毒ＨＢＶ／ａｄｗ亚型全基因组序列。该变异株全序列为３２２４个碱基，与从同一地区２例ＨＢｓＡｇ阳性携带者得到的ａｄｗ和ａｄｒ全序列的同源性分别为９８．０％和９２．５％，与已出版的Ａ—Ｅ基因组比较，进行了病毒的系统树分析。该变异毒株除在外膜基因Ａ决定簇前有９个碱基插入外，在多种调控元件，包括启动子ＳＰＩ、ＳＰＩＩ、ＣＰ、ＸＰ、增强子ＥＮＩ和ＥＮＩＩ，均无独特的变异点。