生物素-亲和素系统控制细胞在表面的粘附力

粘附作用具有重要的生理学意义。细胞与表面的粘附是产生多种生物效应（包括生长、分化、迁移等）的基本要素。比如,细胞与表面粘附较强时,细胞通常生长;细胞与表面粘附减弱时,细胞发生分化;而细胞要进行分裂,首要的是先去粘附。粘附可以作为控制细胞行为的手段,这在生物工程方面有重要的应用前景。通过对人工血管的内外表面粘附性质的选择性的控制,可以防止由于血小板粘附造成的血栓,淋巴细胞粘附造成的免疫排斥,而增加宿主其它细胞的粘附,可促进人工血管的整合与重建。因此,研究细胞六局面的粘附作用,具有重要的意义。而其中…     

SARS冠状病毒结构蛋白在大肠杆菌中的表达

目的构建SARS冠状病毒主要结构蛋白原核表达载体,并探讨各结构蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达情况及其病毒致病机制。方法从SARS病人组织中抽提出RNA,经RT-PCR获得SARS冠状病毒刺突蛋白(S)、核衣壳蛋白(N)和膜蛋白(M)基因,将S基因的两个区段、N基因和M基因分别克隆至表达载体pET-32和pET-28上,转化大肠杆菌13121,利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE检测表达情况。结果成功构建了SARS冠状病毒重组蛋白的表达载体pET32-S1、pET32-S2、pET32-N、pET32-M、pET28-S1、pET28-S2和pET28-N;N蛋白表达量最高,S2蛋白表达量次之,S1蛋白和M蛋白表达不明显。结论SARS病毒的N蛋白较容易在原核细胞中表达,而S蛋白和M蛋白可能由于有较多的半胱氨酸或跨膜区而不易在体外表达。N蛋白和S蛋白均有较好的抗原性。前者更适用于SARS的早期诊断。     

HBV信号肽区热点变异真核表达载体的构建及在Cos7细胞中的表达

探索ＨＢＶ信号肽区热点变异对ＨＢｅＡｇ表达和基因组复制的影响。采用分子生物学方法 ,设计引入ＫｐｎⅠ和ＨｉｎⅢ酶切位点的引物扩增ＨＢＶ的前Ｃ/Ｃ片段 ( 1814 2 4 52 ) ,经ＫｐｎⅠ和ＨｉｎⅢ酶切后连于ＥＢＯ真核表达载体 ,利用定点突变技术对连接载体进行Ａ1896 Ａ1899点的定点诱变。将突变前后的质粒以脂质体介导法转染Ｃｏｓ 7细胞 ,检测突变前后ＨＢｅＡｇ表达的改变。经错配ＰＣＲ ＲＦＬＰ和测序分析 ,确定突变的克隆。突变前后的质粒转染Ｃｏｓ 7细胞经稳定表达 ,结果未突变的ＥＢ0 前Ｃ/Ｃ重组质粒ＨＢｅＡｇ表达为强阳性 …     

利用自组装单分子层（SAM）研究细胞和表面的相互作用

研究细胞和表面相互作用具有重要意义,利用长链的烷硫醇在金表面或烷基硅烷在羟基化表面形成的自组装单分子层及其微格式化的表面允许以分子水平研究并控制细胞和表面的相互作用,我们概述了自组装单分子层及其格式化表面研究细胞和表面相互作用的最新进展。     

结直肠癌合并肠梗阻56例诊治分析

目的：总结结直肠癌合并肠梗阻的诊断和治疗经验,探讨其漏诊原因及手术方法的选择。方法：回顾分析我院2001年2月-2007年5月56例梗阻性结直肠癌病人的临床特点及根据患者不同情况分别行一期手术和分期手术。结果．56例患者均经手术治疗,出现并发症4例,死亡1例,病死率为3．6％,其余均痊愈出院。结论：结直肠癌合并肠梗阻临床特点是：左侧结肠梗阻多见;晚期病例多见;老年患者多见。外科治疗的原则是解除梗阻,尽量切除肿瘤。应根据患者的具体情况选择合适的手术方式。     

乙型肝炎病毒核心启动子缺失变异对病毒抗原表达的影响

目的为研究乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子(CP)20/21bp部分缺失(nt1748/1747至nt1767)及同时存在的A1896点变异对病毒抗原表达的影响。方法利用前期构建的HBV全基因的重组载体转染HepG2细胞后,对病毒抗原进行ELISA检测及Western-blotting分析。结果变异株分泌到细胞外的HBsAg、HBeAg及细胞内的HBcAg表达量较野毒株均明显减少。结论HBVCP20/21bp部分缺失株及同时存在的A1896点变异株的病毒抗原表达较野毒株显著下降。     

K83A变异MxA蛋白抑制HBV复制体外研究

目的研究K83A变异MxA蛋白抑制HBV复制活性。方法将pcDNA3.1-MxA(wild-type)重组质粒(WT组)、pcDNA3.1-MxA-K83A重组质粒(K83A组)和pcDNA3.1空质粒(对照组)分别与pU19-1.24HBV重组质粒按2∶1比例瞬时共转染HepG2细胞,转染3d后western blot检测MxA蛋白表达,Abbott检测各组细胞上清HBsAg和HBeAg表达,定量PCR检测上清和细胞内HBV DNA水平,统计学分析结果。结果MxA、K83A组有较好的MxA蛋白表达;与对照组相比,K83A组和MxA组上清HBeAg分别下降73%和71%(P<0.05),上清HBV DNA水平分别下降2.22lg和2.11lg(P<0.01),细胞内HBV DNA水平下降1.89lg和1.78lg(P<0.01)。结论K83A变异不影响MxA蛋白抑制HBV复制活性。     

乙型肝炎病毒核心启动子部分缺失真核表达载体的构建及对病毒抗原表达的影响

乙型肝炎病毒核心启动子 (ＣＰ)部分缺失变异已证实在几种ＨＢＶ感染的临床现象中存在[1 3 ] 。我们在一组 14例血清抗 ＨＢｅ阳性的无症状携带者中 ,发现有 9例在ｎｔ174 8(或ｎｔ174 7)至ｎｔ176 7间 2 0 (或 2 1)个核苷酸的缺失 ,此 9例中有 5例合并有ｎｔ1896Ｇ→Ａ点变异[4] 。本研究在此基础上 ,拟构建这种ＣＰ 2 0 / 2 1ｂｐ缺失及合并存在Ａ1896点变异的ＨＢＶ全基因重组真核表达载体 ,并转染ＨｅｐＧ2细胞 ,以研究此类变异株对病毒抗原表达的影响。一、材料与方法1 材料 :ＥＢＯ ｐｐｌｐ质粒由美国Ｓｃｒｉｐｐｓ研究所Ｆｒａｎ…     

HBV核心启动子部分缺失重组质粒的构建

目的　构建乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核心启动子（ＣＰ）部分缺失的真核表达质粒。方法　利用线性化的、从ＣＰ上游顺 序开始且含完整转录单元的ＨＢＶ 基因克隆（Ｐ３．８Ｉ质粒）为工具,采用分子克隆、人工定点突变、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ,鉴定和测 序分析等技术构建目的载体。结果　成功构建了ＨＢＶ全基因ＣＰ ２０／２１个ｂｐ缺失（ｎｔ １７４８／１７４７－１７６７）和ＣＰ２０／２１个ｂｐ 缺失＋１８９６热点变异的重组真核质粒表达质粒,并经ＰＣＲ－ＲＦＬＰ序列分析证实。结论　此重组真核表达质粒构建可为 体外进一步研究上述变异的生物学意义奠定基础。