乙肝病毒表面抗原'a'决定簇变异对其抗原性的影响

目的探讨乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阴性HBV感染的发生与HBsAg‘a’决定簇区变异的关系。方法对7例HBsAg阴性HBV感染者的HBVS基因区序列进行分析,并与GenBank/EMBL/DDBJ数据库中的不同基因型参考序列进行比较,分析‘a’决定簇区氨基酸的变化情况。结果7例感染者中5例为adr/C型,2例为adw/B型,未发现其它亚型及基因型的存在。3例感染者的毒株在主要亲水区(MHR)内未发现氨基酸变异,另外4例感染者的毒株均存在不同程度的氨基酸替代,包括单点和联合突变,变异位点包括Q101K、T116I、K122N、T126N、Q129R/N、T131A、C138Y、N146S、C147F。结论HBsAg‘a’决定簇区变异不是形成HBsAg阴性HBV感染的唯一原因,但确是形成HBsAg阴性感染的一个重要因素。     

光学蛋白质芯片检测乳腺癌组织中胸苷磷酸化酶的临床初探

目的应用我国自行研制的光学蛋白质芯片检测乳腺癌组织中的胸苷磷酸化酶(Thyrmidine phosphorylase,TP),为建立一种快速、简便的临床检测方法进行初步探索.方法应用TP的多克隆抗体制备光学蛋白质芯片,通过椭偏光学显微成像技术检测20例经病理证实的乳腺浸润性导管癌组织标本和正常组织标本中的TP水平,以灰度值表示组织中TP浓度高低.同时应用ELISA方法测定,并比较两种方法检测结果的一致性.结果30例癌组织的灰度值35.40±11.55,20例正常组织的灰度值为26.80±8.78,两组间差异具显著性意义(P＜0.05).以44.36(正常组织平均值 2倍标准差)为阈值,乳腺癌检测的灵敏度为20.00%,特异度为100.00%.同ELISA检测结果相比,在20例乳腺癌组织标本检测中,两种方法的一致性具极显著意义(P＜0.01).结论我国首创的椭偏光学显微成像技术简单、直观,结合光学蛋白质芯片可用于胸苷磷酸化酶的临床检测.     

三种乙型肝炎病毒拉米夫定耐药突变的酶切分析方法及其应用

目的：建立三种乙型肝炎（乙肝）病毒拉米夫定耐药突变的酶切分析方法，了解这三种耐药突变在拉米夫定治疗患者中的发生情况。方法：设计3对HBV P基因引物进行聚合酶链反应（PCR）扩增，应用Nde I和Nla Ⅲ两种限制性内切酶对PCR产物进行酶切，酶切产物用电泳加以分析。应用此方法检测70例拉米夫定治疗的慢性乙肝患者中3种拉米夫定耐药突变的发生情况。结果：Nde I和NlaⅢ两种限制性内切酶对PCR产物进行酶切可有效区分HBV野株和YMDD（酪氨酸－蛋氨酸－天冬氨酸－天冬氨酸）变异株，并确定是YI（异亮氨酸）DD或YV（缬氨酸）DD变异。用Nla Ⅲ内切酶对PCR扩增产物酶切可有效区分HBV野株和L526M（第526位氨基酸由亮氨酸变为蛋氨酸）变异株。利用此方法发现11例患者在服用拉米夫定过程中出现耐药突变，其中YIDD变异6种，YVDD变异5例，后者有1例伴有L526M点突变。结论：本方法只需应用常规PCR和酶切技术，既可有效筛检出YMDD变异株标本，还可以确定属于YIDD还是YVDD变异，或是否伴有L526M点突变等，均可作为临床监测拉米夫定耐药性的参考。     

肿瘤转移抑制基因KISS-1的研究进展

肿瘤转移是恶性肿瘤的基本生物学特征,对肿瘤转移抑制基因的研究已成为肿瘤转移机制研究的热点。KISS-1是Lee等于1996年在黑色素瘤细胞株发现的一个新的肿瘤转移抑制基因。KISS-1近年来受到人们的广泛关注。现将KISS-1的结构、功能及与肿瘤转移关系的研究进展作一综述。     

RT-PCR法检测肾癌组织中MN／CAⅨ基因表达

目的评价RT-PCR法检测MN／CAⅨ基因在肾癌组织表达的可靠性。方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象，提取总RNA，两步法进行RT-PCR反应，用MN／CAⅨ的特异性引物扩增，2％琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN／CAⅨ条带．而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN／CAⅨ条带。结论RT-PCR法检测MN／CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。     

C-12多种肿瘤标志物蛋白芯片对食管癌转移及预后的研究

肿瘤标志物（Tumor marker,TM）是指在恶性肿瘤的发生和增殖过程中,由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的或是由机体对肿瘤反应而异常产生或升高的,反映肿瘤存在和生长的一类物质。多种TM蛋白芯片（C-12系统）技术是基于双抗体夹心法的化学发光检验技术,对TM进行定量检测。食管癌患者病情变化及预后的评估目前尚缺乏明确的指标。我们对113例食管癌患者进行了检测,并对其预后进行了随访,现将其报道如下.     

慢性乙型肝炎患者HBV基因型及其临床意义

目的 了解广东地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型特点及其临床意义。方法 用特异性引物扩增乙型肝炎病毒S基因区,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因分型方法,对该地区55例慢性活动性乙型肝炎(CAH)患者感染的HBV进行基因分型,并与其临床生化结果、病毒定量和肝组织病理进行相关性分析。结果 B基因型28例(51.0%),C基因型18例(32.7%),D基因型4例(7.3%),B+C型4例(7.3%),未分型1例(1.8%)。其中年龄大于30岁的26例患者B和C基因型的丙氨酸转氨酶水平分别为(190.9±270.3)IU和(141.0±83.0)IU(t=0.532,P>0.05),肝脏病理炎症分级的平均秩次为10.4和11.8(Z=0.561,P>0.05),肝脏病理纤维化分期的平均秩次为10.5和11.7(Z=0.483,P>0.05),HBVDNA含量分别为106.8±1.4和108.5±1.1(t=2.989,P<0.05),HBeAg阳性数分别为2/12和8/9(Fisher’s精确概率P=0.002)。结论 广东地区HBV基因型主要为B型和C型;两种基因型感染者丙氨酸转氨酶水平、病毒复制水平、HBeAg表达水平以及肝脏病理炎症和纤维化程度无显著性差异;然而在年龄大于30岁的CAH患者中,感染C基因型的HBV病毒复制水平和HBeAg表达水平比感染B基因型者显著增高。     

拉米夫定耐药毒株的P基因序列特点

目的探讨拉米夫定耐药毒株P基因序列特点。方法分析247例慢性乙型肝炎患者血清标本,利用PCR-RFLP筛检YMDD变异株,对YMDD变异阳性的部分患者标本进行P基因测序。结果应用PCR-RFLP筛检发现了42例感染YMDD变异株的患者,对其中的19例患者进行测序分析有10例除发生YMDD变异外还有P基因A-E区其他部位氨基酸的突变,有4种点突变同时在2个以上的患者中发生,包括rtL80I,rtG172E,rtG174C和rtG172E/rtG174C联合突变。结论拉米夫定耐药毒株除了常见的C区YMDD变异和B区rtL180M变异之外,还可以发生其他位点的突变,但这些位点的突变是否与拉米夫定耐药有直接关系还有待进一步证实。     

拉米夫定治疗中国乙型肝炎患者中发现YMDD耐药变异株

为了监测拉米夫定临床治疗过程中耐药性的产生,更好地指导临床用药。采用ＰＣＲ产物克隆后测序的方法,对２０例服用拉米夫定病人进行随访观察,检测其体内乙型肝炎病毒聚合酶基因酷氨酸－蛋氨酸－天门冬氨酸－天门冬氨酸区域变异情况,同时观察其ＨＢＶＤＮＡ定量和肝功能指标变化。     

RT-PCR法检测肾癌组织中MN/CAⅨ基因表达

目的 评价RT-PCR法检测MN/CAⅨ基因在肾癌组织表达的可靠性。方法 以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果 经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN/CAⅨ条带,而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN/CAⅨ条带。结论 RT-PCR法检测MN/CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。