实时荧光定量PCR检测RAGE mRNA方法的建立及初步应用

目的 建立实时荧光定量PCR(RTFQ-PCR)检测人晚期糖基化终末产物受体(RAGE)mRNA的方法并研究其在食管癌组织中的表达.方法 根据Genebank提供的序列在RAGE基因外显子5和6之间设计引物,应用SYBR Green Ⅰ荧光染料,建立检测RAGE mRNA的RTFQ-PCR方法,并对其线性、特异性、灵敏度及重复性进行评价;根据标准曲线计算出食管癌及配对远端正常组织中RAGE mRNA含量,并以RAGE mRNA和18S rRNA含量的比值作为评价RAGE mRNA表达水平指标.结果 线性范围为5.0×103～5.0×109copies/ml,相关系数为-0.98,批内变异系数(CV)为0.63%～8.71%,批间CV为1.52%～12.38%.食管癌及配对远端正常组织RAGE mRNA与18S rRNA浓度的对数比值(-x±s)分别为0.638±0.068和0.334±0.329(P＜0.005),提示食管癌组织RAGE表达上调.结论 RTFQ-PCR检测RAGE mRNA的方法具有灵敏、特异、重复性好等优点,RAGE mRNA表达水平与食管癌存在一定相关性.     

凝血指标检测与急性冠状动脉综合征患者Gensini及GRACE评分的关系研究

目的探讨急性冠状动脉综合征（ACS）患者血浆凝血指标（D-二聚体（D-D）、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）及纤维蛋白原（FIB））含量变化及与Gensini和GRACE评分的关系。方法检测并比较55例ACS患者和34例健康对照者血浆D-D、PT、APTT及FIB含量。结果ACS组血浆凝血指标（D-D、PT、APTT及FIB）含量分别为0.16±0.19mg/L、11.9±1.91s、30.4±6.25s、2.41±0.96g/L,对照组含量分别为0.07±0.08mg/L、11.9±0.91s、27.5±3.36s、2.36±0.73g/L。D-D在ACS不稳定型心绞痛（UA）、非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）和ST段抬高型心肌梗死（STEMI）三个亚组中的含量分别为0.10±0.07、0.08±0.10、0.25±0.28mg/L;ROC曲线下面积D-D检测为0.64,Gensini评分检测为0.99,GRACE评分检测为1.00。D-D在GRACE评分低风险组、高风险组和极高风险组中的含量分别为0.13±0.18、0.18±0.25、0.18±0.14mg/L;D-D在Gensini评分中危组、高危组和极高危组中的含量分别为0.10±0.05、0.09±0.09、0.23±0.28mg/L,D-D含量与Gensini极高危组评分成正相关（r=0.911,P〈0.05）。结论ACS患者尤其STEMI患者四个凝血指标仅D-D显著升高;较Gensini和GRACE评分,D-D能粗略反映ACS患者冠状动脉严重程度,可指导临床治疗。     

不同人群载脂蛋白E基因频率分布特征

目的 :研究江苏地区汉族人群载脂蛋白E(ApoE)基因型及等位基因频率 ,并与国内外不同人群比较分布特征。方法 :聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (PCR -RFLP)方法检测 16 8例江苏地区无血缘关系汉族人群ApoE基因型。计算各基因型及等位基因频率。结果 :江苏地区汉族人群载脂蛋白E各基因型频率分别为 :ε2 / 2 =0 .6 0 % ;ε2 / 3 =11.90 % ;ε2 / 4 =1.2 0 % ;ε3 / 4 =10 .70 % ;ε3 / 3 =75 .0 0 % ;ε4 / 4 =0 .6 0 % ;各等位基因频率分别为 :ε2 =7.14% ;ε3 =86 .31% ;ε4 =6 .5 5 %。频率分布在不同年龄、性别无显著差异。与其他地区中国人群频率分布相似。中国人群ε3 等位基因频率明显高于欧美人群 ,而ε4等位基因频率明显低于欧美人群。结论 :江苏地区汉族人群载脂蛋白E等位基因频率分布与其他地区中国人群频率分布相似 ,但与欧美人群有显著差异。     

凋亡蛋白抑制因子livin基因siRNA表达载体的构建与转染

目的:构建3个针对凋亡蛋白抑制因子livin基因mRNA的小干扰RNA(siRNA)表达载体,然后转染HCT-8/V细胞。为研究livin基因沉默对HCT-8/V细胞耐长春新碱特性的影响奠定基础。方法:合成3对靶基因livin的siRNA寡核苷酸序列通过退火生成转录模板,与线性pGCsi-H1/Neo/GFP质粒连接,转化DH5α钙化菌抽提重组质粒,测序鉴定。用脂质体2000将重组质粒转染HCT-8/V细胞并用G418筛选。结果:转化大肠杆菌涂布平板长出阳性菌落,测序结果与所设计、合成的livin的siRNA转录模板序列一致;在荧光显微镜下观察到HCT-8/V细胞表达绿色荧光蛋白(GFP)证实重组质粒已转染入细胞并用G418剔除了未转染质粒的细胞。结论:成功构建livin基因的siRNA表达载体,转染并筛选出转染了livin siRNA表达载体的HCT-8/V细胞。     

基于VAP技术检测脂蛋白残粒和低密度脂蛋白颗粒浓度对颈动脉斑块的诊断价值

目的探讨外周血脂蛋白残粒(RLP)和低密度脂蛋白颗粒(LDL-P)浓度以及小而密LDL颗粒(sdLDL-P)诊断颈动脉斑块的价值。方法选择邢台市第三医院2020年1月到2021年6月行颈动脉斑块超声检查人群作为研究对象, 根据超声结果分为颈动脉斑块组(146例)和无颈动脉斑块组(对照组, 149例)。采用垂直密度梯度离心全自动血脂谱检测(VAP)技术分离相测定2组空腹血清RLP、LDL-P及sdLDL-P等血脂亚组分浓度, 采用均相法检测各组空腹甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等血脂指标, 分析2组检验指标变化以及各检验指标的颈动脉斑块诊断真阳性率、诊断真阴性率、诊断假阳性率和诊断假阴性率。采用受试者工作特征(ROC)曲线及其曲线下面积(AUC)评估各检验指标对颈动脉斑块的临床诊断价值。结果颈动脉斑块组RLP、LDL-P和sdLDL-P水平[分别为(1.07±0.36)mmol/L、(1 300±370)nmol/L、(435±139)nmol/L]均高于对照组[分别为(0.59±0.17)mmol/L、(781±215)nmol/L、(156±59)nmol/L;P...     

中国流行性出血热自然疫源地结构和传播机理研究——Ⅳ.不同来源毒株不同途径感染黑线姬鼠和褐家鼠实验研究

本实验为解决EHF病毒在中国EHF主要宿主动物种群中的传播途径问题,以及进一步研究阐明“鼠传人”的途径,在本室负压隔离器内进行了实验研究。实验结果表明,黑线姬鼠和褐家鼠,对不同来源毒株(从黑线姬鼠分离的遵义后坝株和自永春褐家鼠分离的R26株)、不同感染途径(气溶胶、口饲、滴鼻和划皮)都能发生感染,从试鼠特异性IgG抗体产生滴度看,气溶胶易感染黑线姬鼠和褐家鼠。结果还显示,黑线姬鼠和褐家鼠对从本种分离的毒株更敏感。从褐家鼠产生的EHF IgG抗体滴度看,一般均低于黑线姬鼠,是否与感染量多少有关,有待进一步研究。本实验进一步证明,黑线姬鼠毒株和褐家鼠毒株,可致两种试鼠相互感染。由此可见,姬鼠型疫区演变为混合型疫区是必然趋势。基于此点,控制疫区褐家鼠数量,不仅能防止疫区蔓延扩大,且可阻断黑线姬鼠病毒传播给褐家鼠。因此,具有重要的流行病学意义。     

尿核基质蛋白检测在膀胱癌诊断中的应用价值评定

目的:研究尿核基质蛋白(NMP22)在膀胱癌临床诊断和预后判定中的应用价值。方法:采用双单抗夹心酶联免疫法(ELISA)检测84例膀胱肿瘤怀疑患者和20例正常健康志愿者尿液中NMP22的含量,同时行尿脱落细胞学检测。结果: 84例中,病理检查证实膀胱肿瘤56例, 良性泌尿系疾病28例。膀胱癌患者尿中NMP22水平(53. 0×103U/L)明显高于良性泌尿系疾病(8. 8×103U/L)和正常人群(7. 7×103U/L), NMP22水平与膀胱癌浸润深度和分化程度呈正相关;以104U/L为阳性临界值,NMP22诊断膀胱肿瘤的敏感性要明显高于尿脱落细胞学检查。结论:NMP22是膀胱癌患者尿中的良好瘤标,与膀胱癌侵袭能力和恶性程度密切相关,可以作为膀胱癌诊断和预后评估的指标。     

老年人胆囊炎胆石症急性发作的治疗体会(附389例报告)

临床资料1　一般资料　本组病人为 1 988年 1月至2 0 0 3年 1 2月连续收治的老年人急性发作性胆囊炎胆石症经手术治疗患者 3 89例 ,男性 1 4 2例 ,女性 2 47例 ;男女之比为 1∶ 1 .74,年龄 60～ 93 (67.2± 5.93 )岁。其中胆石症 3 2 6例 ,胆囊结石合并胆源性胰腺炎 48例 ,胆结     

增殖诱导配体研究的结构、相关受体及功能

增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)为肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)的一名新成员,即TNFSF13,又名CD256、TALL-2、TRDL-1、UNQ383/PRO715,与BlyS(B-lymphocyte stimulator)即TALL-1具有较高的同源性,1998年首先由Hahne等[1]发现并成功克隆。近年来在配体受体的研究方面,APRIL/BlyS及其受体系统受到重视。研究表明APRIL在肿瘤的发生、发展及免疫调节方面发挥重要作用,但其具体作用机理、特点等还不甚明确,有待进一步研究。本文就APRIL的结构、相关受体及功能的最新研究进展作一综述。1结构及组织细胞…     

人体胰腺GGT单克隆抗体制备及检测方法研究

采用三步柱层法从人正常胰腺中提取的胰特异性γ－谷氨酰基移换酶（ＰＧＧＴ），并达电泳纯。将ＰＧＧＴ免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，经细胞融合成功地制备出抗ＰＧＧＴ单克隆抗体，并以此建立了人血清ＰＧＧＴ的ＥＬＩＳＡ检测法，其诊断胰头癌的敏感性和特异性分别为１００％和９９．６％，ＰＧＧＴ单克隆抗体检测了ＰＧＧＴ可能是特异性诊断胰头癌较为理想的免疫学方法。