肠道病毒71型3D蛋白研究进展

目的EV71感染可引起婴幼儿手足口病,甚至导致死亡。近年来由EV71引发的手足口病一直呈上升的流行趋势。目前中国对于手足口病的疫苗研究已进入临床试验阶段,但EV71引起的重症手足口病的发病机制仍不明确。3D蛋白主要负责病毒的复制过程,是抗病毒药物的靶点之一。本文就EV71的3D蛋白的结构功能及针对其作为靶点的抗病毒药物作一综述。     

大蒜液体外抑菌作用的实验研究

[目的]研究大蒜液的体外抑菌作用。[方法]采用抑菌环试验和营养肉汤稀释法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等11种致病菌进行抑菌试验，进行了最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）的实验研究。[结果]大蒜液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、腊样芽孢杆菌等11种菌株的抑菌环直径均大于7mm；对多种常见微生物均有较强的抑菌和杀菌作用。[结论]大蒜液在体外具有明显的抑菌作用。     

汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白基因表达载体的构建及表达

摘要：目的构建汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白G1、G2的真核表达载体并将其在Vero E6细胞中进行表达,观察细胞融合现象。方法采用PCR和基因克隆技术,将GM04 38株G1、G2基因分别克隆到表达载体pCAGGS／MCS,酶切和测序鉴定正确后,将表达载体pCAGGS-G1、pCAGGS-G2共转染Vero E6细胞,酸性MEM处理后观察细胞融合现象的产生,并以间接免疫荧光试验(IFA)观察糖蛋白的表达情况。结果显示在Vero E6细胞中成功表达出糖蛋白G1、G2,IFA显示荧光信号分布在细胞浆中。二者的共表达可产生良好的生物学活性,在偏酸性条件下引起Vero E6细胞发生融合,而转染pCAGGS-NP的细胞没有融合现象发生。共表达也未出现明显的促进效应。结论成功构建了糖蛋白G1、G2的表达载体，并在Vero E6细胞中呈有效表达,二者的共表达可在偏酸性条件下引起Vero E6细胞发生融合。     

影响CMV在2BS细胞上出现CPE条件的研究

对CMV_(AD)-169株在2BS细胞上的增殖条件进行了比较。结果表明,2BS细胞最佳生长条件是全Eagle培养液,37℃,pH为7.4～8.0,感染CMV最适时间是尚未长满单层,维持液小牛血清应占5%。未经冻融的大剂量病毒接种,出现细胞病变最快、早及广泛。     

二甲基甲酰胺对大鼠肝细胞钙稳态的影响

二甲基甲酰胺(DMF)是一种广泛使用的有机溶剂,文献表明它是一种亲肝性毒物,其毒作用机理尚未阐明。近来研究发现,细胞内钙稳态失调与其造成的细胞损伤密切相关,细胞内钙离子浓度升高是许多外源性化合物导致细胞死亡的最终途径。本文采用胶原酶灌流法分离制备大鼠肝细胞悬     

不同风疹病毒株结构多肽的SDS-PAGE

风疹病毒标准株GOS_(-10)、疫苗株RA27/3、济南地方株JR_(11)、JR_(23),经蔗糖密度梯度离心后,对其沉降特征、形态学及SDS-PAGE图谱进行了比较研究,结果各株的沉降特征、形态结构、多肽数目及分子量基本相同,分别为VP_1 33 000-34 000,VP_244 000-45 000,VP_3 63 000,VP_4 67 00D-68 000,VP_5 82 000-84 000,VP_6 92 000-94 000。     

重组抗原在HSV-Ⅰ感染ELISA检测中的应用

目的　用单纯疱疹病毒(HSV)重组蛋白作为包被抗原建立一种特异性和灵敏性较高的ELISA方法。方法　将重组糖蛋白D(gD)和HSV Ⅰ分别作为包被抗原,检测5 7份临床标本,同时用国产和德国试剂盒进行检测;将德国试剂盒作为金标准,另外三者检测结果在特异性、灵敏性和符合率等方面与其进行比较。结果　与德国试剂盒相比,在特异度、敏感度、符合率方面,重组抗原分别为5 7 1%、82 0 %、78 9%。病毒抗原分别为5 7 1%、78 0 %、75 4 % ;国产试剂盒分别为10 0 0 %、4 8 0 %、5 4 4 %。重组蛋白重复性实验结果经统计学处理差异无统计学意义(P >0 0 5 )。结论　用酵母菌表达的HSV Ⅰ重组gD蛋白作为包被抗原进行ELISA检测是一种敏感、特异的方法,具有较大的应用价值。     

汉坦病毒包膜糖蛋白G2的基因克隆与序列分析

目的 建立汉坦病毒(HV)包膜糖蛋白G2的克隆载体;进行系统发生树分析,研究G2基因的变异情况.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增山东省HV G2基因片段,克隆于PMD-18T载体,经氨卞西林筛选,酶切鉴定后,进行序列测定,应用DNASTAR软件将其与世界范围内的病毒株基因序列进行分析.结果 扩增得到山东省高密、淄川、莒南、荣成四地G2基因.序列同源性分析表明,四地G2基因都属于SEO型HV,与Z37株核苷酸同源性最高,与其他SEO型各株的同源性为82.3%～99.8%;绘出了G2基因及氨基酸的系统发生树.结论 成功地建立了山东省四地HV G2基因克隆载体;四地HV G2基因同源性高,为山东省SEO型HV的遗传与变异、分子流行病学研究,以及制备有效的亚单位疫苗提供了依据.     

副粘病毒表面糖蛋白的表达及其相互作用的研究

为研究多种副粘病毒融合蛋白（Ｆ）及其与血凝素－神经氨酸酶（ＨＮ）的相互作用关系,采用Ｔ７ＲＮＡ聚合酶表达系统,将质粒ＤＮＡ及载有各种Ｆ或ＨＮ基因的重组质粒ＤＮＡ于真核细胞内进行表达,然后常规检测表达产物的功能情况,结果显示,每种病毒Ｆ单独表达不足以引起细胞融合,只有与同源性ＨＮ共同表达时,才能引起细胞融合;与异源性ＨＮ共同表达时,则不能引起细胞融合。提示副粘病毒Ｆ的细胞融合作用需要ＨＮ的辅助,并具     

副黏病毒F蛋白融合活性位点中病毒特异性氨基酸基因突变分析

目的 了解副黏病毒融合蛋白(F)融合活性位点中的病毒特异性氨基酸在细胞融合中的作用.方法 以新城疫病毒(NDV)和人副流感病毒(hPIV)为例,在已确定的F蛋白融合活性位点中对病毒特异性氨基酸进行定点突变,然后将突变体F基因与同源或异源的血凝素.神经氨酸酶(HN)基因共转染BHK21细胞后,在真核细胞中表达.Giemsa染色和指示基因法检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测F蛋白的表达效率.结果 在NDV F的突变体中,N150D-L152D的融合功能达到野毒株的46.31%;而N257D-N258D-Q259E、G271D-N272D和Q279E-Q281E的融合活性却几乎消失,分别只有野毒株的1.25%、3.14%和2.23%;N296D-N297D的融合功能是野毒株的97.68%.在hPIV F的突变体中,D143A-E145A的融合功能达到野毒株的32.63%;E223Q-K224A几乎不能形成合胞体,其融合活性只有野毒株的1.91%;K263A-R265A、D268A-D270A和R475A-R476A的融合功能分别是野毒株的14.63%、19.52%和28.95%.FACS结果表明,NDV F的N257D-N258D-Q259E、G271D-N272D和Q279E-Q281E突变体及hPIVF的E223Q-K224A突变体F蛋白在细胞表面几乎没有表达;其余所有突变体F蛋白的表达效率与野毒株相比,基本不变.结论 对于NDV F来说,N257、N258、Q259、G271、N272、Q279、Q281对NDV F的特异性细胞融合功能起重要作用;N150和L152也起一定的作用,但是N296和N297却没有作用.对于hPIV F来说,E223和K224对hPIV F的特异性细胞融合功能起非常重要的作用;D143、E145、K263、R265、D268、D270、R475、R476的作用也很重要.