随机十肽库的构建及血管形成素结合肽的筛选

将合成的含有随机序列 (NNK) 1 0 的寡核苷酸片段 ,克隆入噬菌体呈现载体噬菌粒 p CANTAB5 E的 Sfi ,N ot 位点 ,即 cp 蛋白信号肽与成熟肽之间 ,电转化 E.coli TG1,构建了噬菌体表面呈现的十肽库 ,实际库容为 3.5 3× 10 7,插入率为 6 6 .7% .经辅助噬菌体 M13KO7超感染后 ,获得滴度为 4.8× 10 1 1 pfu/ m l的噬菌体上清 .经过两轮 panning筛选和富集 ,从构建的随机十肽库中筛选到 2 6个具有血管形成素结合活性的重组噬菌体克隆 ,对其中 12个阳性噬菌体克隆的短肽序列进行了分析 ,EL ISA检测结果显示 12个阳性噬菌体克隆都能够…     

含凝血酶切点的hTNFα-hPgnK5的原核表达及活性鉴定

[范彬,张英起,赵宁,颜真,药立波,苏成芝.细胞与分子免疫学杂志,2001;17(1)：29-31]]目的 在原核细胞中表达融合蛋白hTNFα-hPgnK5并鉴定其活性.方法 构建hTNFα-hPgnK5基因的表达载体,并在大肠杆菌DH5α中进行表达.以MTT法测定该融合蛋白体外抑制肿瘤细胞或血管内皮细胞增殖的活性.结果 成功地构建了hTNFα-hPgnK5表达载体并获得表达.免疫印迹分析表明,该融合蛋白具有hPgnK5的免疫活性.体外实验表明,该融合蛋白具有抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞增殖的活性.结论 hPgnK5蛋白可与hTNFα共同表达,表达产物可抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞增殖.     

人肿瘤坏死因子α单链抗体的原核表达和活性分析

目的　在大肠杆菌中表达抗人 TNF-α单链抗体 (Sc Fv) ,并分析它的结合活性和中和活性 .方法　在获得抗人 TNF-αE6 Sc Fv的基础上 ,用热诱导载体 p BV2 2 0在大肠杆菌中表达 E6 Sc Fv蛋白 .EL ISA测定抗体的结合活性 ,实时 BIA技术确定亲和常数 ,L 92 9细胞毒试验分析其中和活性 .结果　克隆了抗人 TNF-α E6 Sc Fv基因的热诱导载体 p BV2 2 0在大肠杆菌中 ,经42℃热诱导 ,得到了相对分子质量 (Mr)约为 2 70 0 0的重组蛋白质 ,表达量占菌体总蛋白的 18% .对在大肠杆菌中表达的E6 Sc Fv进行了复性和亲和层析纯化 ,并进一步证…     

用差示PCR法筛选类风湿性关节炎滑膜细胞中的高表达基因

目的 筛选类风湿性关节炎（RA）滑膜细胞中的高表达基因,以探讨RA滑膜细胞发生肿瘤样增殖和侵蚀软骨的分子机理。方法 以骨性关节炎（osteoarthritis,OA)滑膜细胞作对照,采用差示PCR（differentially display PCR)方法,克隆RA滑膜细胞中高表达的cDNAs片段,经反向点杂交排除假阳性克隆后,将阳性克隆进行基因序列分析,结果共回收76仆差异条带,得到42个有插段的克隆,经反向点杂交后得到22个阳性克隆,对其中19个克隆进行基因序列分析表明,最长片段为501bp长,最短片段为145bp长,大部分在300bp,有13个克隆为已知基因,其中包括组织蛋白酶,其它6个克隆为未知序列,这些未知序列中除一个序列外酶,其它6个克隆为未知序列,这些未知序列中除一个序列外都为基因的非编码区,结论 差示PCR方法在筛选差异表达基因方面存在着很大的局限性,组织蛋白酶B可能与RA滑膜细胞的软骨侵蚀性有关。     

外伤性截瘫患者的心理状况调查分析

外伤性截瘫是外伤性脊柱骨折后脊髓损伤的严重并发症。当脊柱受到外伤后 ,所引起的截瘫是突然发生的。很多人都会因不可接受的现实 ,而产生一些心理变化。为此 ,我们对 86例住院患者进行了症状自评量表的测定 ,以探讨截瘫患者的心理状况。1　资料与方法1.1　一般资料　本文的临床资料来自齐齐哈尔市第二人民医院 1992年 1月～ 1998年 1月的住院病例 86例。其中男性5 9例 ,女性 2 7例 ,年龄 16～ 5 1岁 ,2 1～ 37岁者占 48例。致伤原因 :高处坠落 46例 ,重物砸伤 19例 ,车祸所致外伤 2 1例。截瘫情况 :完全性瘫 5 4例 ,不完全性瘫 32例。对照…     

蠲痹汤加减治疗类风湿性关节炎43例临床观察

我院自1995年3月-1998年8月间,运用蠲痹汤加减治疗类风湿性关节炎43例,并同口服中药雷公藤片38例作对照观察,疗效较满意,现报道如下。     

早期声门癌显微手术治疗的临床观察

目的 提高早期声门癌患者术后生存质量,获得良好的发音效果。方法 在支撑喉镜、显微镜下对２２例早期声门癌（Ｔ１ａ１６例,原位癌６例）患者采用激光探刀切割,为了避免残留肿瘤,采用激光探头对创面及切缘汽化,并对术前、术后进行声学参数的客观分析及纤维喉镜检查,评估声带情况。结果 术后３年复发率为９．０％（２／２２）,３、４、５年生存率分别为１００％、９４．７％、９３．３％。患者术后比术前嗓音明显好转,但不     

蛔虫变应原致过敏性鼻炎豚鼠模型建立

为了建立蛔虫变应原致过敏性鼻炎的实验动物模型,将健康豚鼠３０只,随机分为致敏组（ｎ＝２０）和对照组（ｎ＝１０）。致敏组经腹腔、四肢皮下注射蛔虫变应原免疫４周后,鼻腔雾化吸入蛔虫变应原;对照组以生理盐水代替变应原。结果致敏组１８只出现鼻痒、喷嚏、流清涕等过敏性鼻炎的临床症状（评分〉５分）,鼻腔分泌物涂片见大量嗜酸性粒细胞,以及鼻粘膜水肿、粘膜嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润等组织学变化,而对照组无上述变化     

视觉电生理仪对眼外伤视觉功能测定的临床意义

近年来,眼外伤发病率有升高倾向,伴随的工伤鉴定也日渐增多。我们应用视觉电生理仪的闪光ERG,图形ERG和VEP对眼外伤患进行联合检测,客观地评估视网膜、视神经、黄斑区视网膜的功能,用以判断预后,诊断诈盲。     

老年人溃疡病穿孔外科治疗体会

目的 探讨老年人溃疡病穿孔的临床特点和外科治疗方法。方法 回顾性分析３６例老年人溃疡病穿孔的临床特点和外科治疗方法。结果 老年患得全身并存病多,重要在脏器功能及代偿功能随年龄增长而衰退。当发生溃疡病穿孔时,病情重而反应低下,临床症状并不典型,休克发生率高。结论 老年人溃疡病穿孔一经确诊,只要病情允许,应根据手术探查所见,采取不同的术式。