芪丹通脉片对大鼠缺血/再灌注损伤心肌细胞GLUT4的影响

目的探讨中药复方芪丹通脉片对大鼠缺血/再灌注损伤（RMMI）心肌细胞葡萄糖转运蛋白（GLUT4）的影响。方法选用雄性SD大鼠36只,随机分为6组（n=6）,即正常组、假手术组、单纯模型组、芪丹通脉片高剂量组和低剂量组、恬尔心组,各组均用生理盐水配制成等体积药液灌胃7d,每日1次,采用冠脉结扎的方法建立大鼠心肌缺血/再灌注模型,将大鼠冠状动脉左前降支完全闭塞40min,再灌注4h后,速取再灌注区心肌组织,用免疫荧光、Western blot方法检测心肌细胞GLUT4的表达。结果单纯模型组心肌细胞膜GLUT4蛋白明显表达,细胞中总的GLUT4含量较正常组增加;芪丹通脉片高剂量组和恬尔心组心肌细胞膜GLUT4蛋白表达明显增强,细胞中总的GLUT4含量较单纯模型组增加。结论芪丹通脉片能明显增强RMMI大鼠心肌细胞总GLUT4的表达,并促进其向细胞膜转位,从而起到保护RMMI心肌的作用。     

芪丹通脉片对心肌梗死后大鼠心肌纤维化重构的影响

目的:观察益气活血复方芪丹通脉片（qidan tongmai tablet,QDTMT）对大鼠心肌梗死(MI)后心功能及左心室非梗死区心肌纤维化的影响。方法: 以结扎SD大鼠左冠脉前降支法建立MI模型,随机分为假手术(Sham)组、MI组、MI+QDTMT小剂量(MI-QDTMTL)组和MI+QDTMT大剂量(MI-QDTMTH)组。术后24 h各组均用生理盐水配制成等体积药液灌胃4周,4周后以多普勒超声评价心脏功能;测定心室的质量/体质量(HW/BW);以MASSON染色检测非梗死区胶原的含量;用RT-PCR法检测非梗死区转化生长因子-β1（TGF-β1）、Ⅰ型胶原蛋白（Collagen type 1,Col1）及Ⅲ型胶原蛋白（Collagen type 3,Col3）mRNA的表达水平。采用大鼠羟脯氨酸（HYP）的ELASA试剂盒检测非梗死区中HYP的含量。结果: ①术后4周心功能:与MI组比较,MI-QDTMTL组和MI-QDTMTH组左室舒张末期内径(LVEDD)和HW/BW均降低,而射血分数(EF)升高（P<0.01或P<0.05）;②非梗死区心肌胶原蛋白的含量: MI-QDTMTL组胶原和MI-QDTMTH组胶原含量均低于MI组（P<0.01）;MI-QDTMTH组胶原的含量明显低于MI-QDTMTL组(P<0.01);③非梗死区TGF-β1、Col1、Col3mRNA的表达:与MI组比较,MI-QDTMTL组、MI-QDTMTH组的TGF-β1 Col1、Col3 mRNA均显著降低(P<0.01或P<0.05);MI-QDTMTH组TGF-β1、Col1、Col3 mRNA的表达显著低于MI-QDTMTL组(P<0.05);④非梗死区HYP的含量: MI-QDTMTL组与MI-QDTMTH组HYP的含量低于MI组(P<0.05,P<0.01); MI-QDTMTH组HYP的含量低于MI-QDTMTL组(P<0.05)。结论: QDTMT通过下调MI交界区TGF-β1、Col1、Col3 mRNA的表达及HYP产生,进而抑制MI后非梗死区反应性胶原的过度沉积,且高剂量组比低剂量组的疗效更好,为防治MI后非梗死区心肌纤维化重构,改善心脏功能提供了新的治疗思路。     

水蛭素基因毕赤酵母表达载体的构建及高拷贝稳定整合菌株的筛选

目的:构建水蛭素变异体HV1毕赤酵母分泌型表达载体,获得高拷贝稳定整合菌株,为大量获得重组水蛭素蛋白,进行功能研究及其临床应用奠定基础. 方法:根据水蛭素HV1的氨基酸序列及毕赤酵母偏爱的密码子,设计HV1编码基因,分为8条寡核苷酸片段进行DNA合成,经磷酸化、退火、连接和PCR扩增得到优化的HV1全长基因,测序结果正确的基因序列插入酵母表达载体pPIC9α分泌信号下游,再亚克隆入高拷贝载体pPIC9K,得到pPIC9K-HV1,SalI线性化后转化毕赤酵母GSM1168,G418梯度筛选转化菌,PCR鉴定目的基因的整合. 结果:获得了水蛭素毕赤酵母表达载体pPIC9K-HV1,G418抗性筛选得到高拷贝菌株,PCR证实目的基因已整合到毕赤酵母染色体中. 结论:成功构建了水蛭素HV1毕赤酵母表达载体,获得了高拷贝稳定整合菌株,为大规模表达纯化HV1蛋白及其临床应用奠定了基础.     

芪丹通脉片对大鼠脑缺血再灌注损伤乳酸脱氢酶及氧自由基的影响

目的:观察芪丹通脉片(QDTMT)对大鼠脑缺血再灌注损伤的防护作用并探讨其机制. 方法:选用SD大鼠70只,随机分为7组(n=10),即假手术组、模型组、芪丹通脉片低剂量组、中剂量组和高剂量组、华佗再造丸组及尼莫地平组,各组均用生理盐水配制等体积药液灌胃7 d,每日1次. 造成大鼠脑缺血再灌注模型,观察各组大鼠乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的变化. 结果:与假手术组比较,模型组大鼠LDH活性、MDA含量显著升高,SOD活性显著下降,有显著性差异(P<0.01). 与模型组比较芪丹通脉片各剂量组、华佗再造丸组及尼莫地平组LDH活性、MDA含量明显下降,SOD活力明显上升均有显著性差异(P<0.01). 结论:芪丹通脉片对大鼠脑缺血再灌注损伤有显著的防护作用其机制可能与抗自由基损伤有关.     

芪丹通脉片对心肌缺血／再灌注大鼠白细胞介素-10的影响

目的 观察益气活血复方芪丹通脉片对心肌缺血/再灌注大鼠血清白细胞介素-10(IL-10)含量的影响,探讨其心肌保护机制.方法 采用结扎左冠状动脉前降支方法制备大鼠心肌缺血/再灌注模型.36只健康雄性SD大鼠.随机分为假手术组、模型组,恬尔心组及芪丹通脉片高、中、低剂量组.缺血30 min,再灌注2 h,采全血,用ELISA法检测血清IL-10含量,用HE染色观察心肌病理形态学变化,并用透射电镜观察心肌组织超微结构变化.结果 芪丹通脉片高、中、低剂量组均可增加血清IL-10含量,减少炎性细胞浸润,减轻心肌超微结构损伤,其中高剂量组明显优于低剂量组,且与恬尔心组无显著差异.结论 益气活血复方芪丹通脉片可促进内源性IL-10大量释放,减少炎症反应,改善受损的心肌超微结构,发挥心肌保护作用.     

芪丹通脉片含药血清促血管生成的实验研究

目的:探讨芪丹通脉片含药血清对体内外血管生成的促进作用。方法:采用鸡胚绒毛尿囊膜模型(CAM),观测芪丹通脉片含药血清对CAM新生的促进作用;采用流式细胞术检测芪丹通脉片含药血清对内皮细胞周期的影响;采用免疫组织化学染色法检测内皮细胞VEGF的表达。结果:芪丹通脉片能够明显促进CAM血管新生,但弱于bFGF组;芪丹通脉片促进内皮细胞生长,增加细胞周期中S期细胞的数。芪丹通脉片能够上调VEGF的表达。结论:芪丹通脉片具有促进血管生成作用,其机制与促血管内皮细胞增殖以及上调VEGF的表达有关。