间充质干细胞介导"酶-前药基因"CYP1A2靶向抗肿瘤效应研究

目的 将人细胞色素P450 1A2(CYP1A2)基因转染骨髓间充质干细胞(BMSC),检测转基因BMSC协同化疗前药达卡巴嗪(DTIC)对人恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞的靶向促凋亡作用,为以间充质干细胞为载体的"基因介导的酶-前药双靶向抗肿瘤策略"提供体外实验依据.方法 从人肝细胞中克隆CYP1A2基因,构建真核表达载体,分离、鉴定并培养BMSC,脂质体法将CYP1A2基因导入BMSC和Raji细胞中,RT-PCR和Westem blot法检测CYP1A2基因的表达,Transwell法检测BMSC的肿瘤靶向性,MTT法检测转基因Raji细胞对DTIC敏感性的改变,Annexin V/PI染色标记法检测转基因BMSC联合DTIC诱导Raji细胞凋亡的作用.结果 成功克隆CYP1A2基因并将构建的真核表达载体转染BMSC和Raji细胞,流式细胞术检测体外诱导分化结果符合BMSC特性,RT-PCR和Westernblot检测到转基因细胞中CYP1A2表达,Transwell迁移实验证实BMSC有肿瘤趋向性,MTT法检测显示DTIC呈剂量依赖性抑制转CYP1A2基因的Raji细胞生长,而转CYP1A2基因的BMSC细胞对DTIC相对耐受(IC50值分别为1.67 mmol/L和7.53 mmol/L,P＜0.01).Armexin V/PI染色法显示CYP1A2能够使细胞在体外代谢DTIC,产生细胞毒效应使肿瘤细胞凋亡,而且具有旁观者效应.结论 CYP1A2可使细胞在体外代谢DTIC产生细胞毒效应.以BMSC为载体的CYP1A2-DTIC酶-前药系统可发挥双靶向抗肿瘤作用,在体外诱导人恶性淋巴瘤细胞凋亡.     

造血干/祖细胞遗传学修饰对4-氢过氧化环磷酰胺、长春新碱和柔红霉素的联合抗性(英文)

目的:探讨经醛脱氢酶基因(ALDH-3)和多药耐药基因(MDR1)遗传学修饰的人外周血造血干/祖细胞能否同时增强活性环磷酰胺(4-HC)和MDR1基因靶药的抗性。方法:构建同时含ALDH-3和MDR1双耐药基因的逆转录病毒表达质粒G1Na-ALDH3-IRES-MDR1,经电穿孔导入PA317包装细胞,将免疫磁珠分离系统(MACS)分离纯化后的人外周血CD34~ 细胞用含有ALDH-3和MDR1双耐药基因重组病毒的上清感染,用PCR、RT-PCR、Southern blot、Nor-thern blot、ACS和MTT等方法检测外源ALDH-3与MDR1基因在CD34~ 细胞中的转移和表达。结果:用PCR与酶切分析法鉴定了双顺反子逆转录病毒载体构建的正确性,双耐药基因已整合入转染靶细胞中基因组,并获得有效表达,应用集落计数测定基因转导效率为18％。巢式PCR及补救分析均未检测到辅助病毒存在。经双耐药基因修饰的CD34~ 造血干/祖细胞对4-HC的IC_(50)较对照组提高4.5倍,对多药耐药基因靶药(长春新碱和柔红霉素)的IC_(50)较未转染细胞分别高6.6和7.8倍。结论:逆转录病毒载体介导双耐药基因转导外周血造血干/祖细胞高效共表达可降低联合化疗骨髓毒性。     

造血干／祖细胞遗传学修饰对4—氢过氧化环磷酰胺、长春新碱和柔红霉素的联合抗体

目的：探讨经醛脱氢酶基因（ALDH－3）和多药耐药基因（MDR1）遗传学修饰的人外周血造血干／祖细胞能否同时增强活性环磷酰胺（4－HC）和MDR1基因靶药的抗性。方法：构建同时含ALDH－3和MDR1双耐药基因的逆转录病毒表达质粒G1Na-ALDH3-IRES-MDR1,经电穿孔导入PA317包装细胞,将免疫磁珠分离系统（MACS）分离纯化后的人外周血CD34^ 细胞用含有ALDH－3和MDR1双耐药基因重组病毒的上清感染,用PCR、RT－PCR、Southern blot、Northern blot、ACS和MTT等方法检测外源ALDH－3与MDR1基因在CD34^ 细胞中的转移和表达。结果：用PCR与酶切分析法鉴定了双顺反子逆转录病毒载体构建的正确性,双耐药基因已整合入转染靶细胞中基因组,并获得有效表达,应用集落计数测定基因转导效率为18％。巢式PCR及补救分析均未检测到辅助病毒存在。经双耐药基因修饰的CD34^ 造血干／祖细胞对4－HC的IC50较对照组提高4．5倍,对多药耐药基因靶药（长春新碱和柔红霉素）的IC50较未转染细胞分别高6．6和7．8倍。结论：逆转录病毒载体介导双耐药基因转导外周血造血干／祖细胞高效共表达可降低联合化疗骨髓毒性。     

急性髓系白血病FLT3与NPM1基因突变的研究

FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复(ITD)是近年在急性髓系白血病(AML)患者中发现的常见突变类型,在AML中的发生率为15%～35%,大量研究显示,FLT3突变与外周血高白细胞、骨髓高白血病细胞比例有关,是AML的重要预后影响因素[1-2],核仁磷酸蛋白(NPM1)基因突变也是AML患者最常见的一种基因突变,突变率为25%～35%,在正常核型AML患者中突变率更高,研究显示单独NPM1突变往往预后较好,但当合并FLT3-ITD突变时预后较差[3-6].我们观察了FLT3和NPM1突变在100例AML患者中的发生情况,分析其临床特征、疗效及预后的关系.     

以截瘫为表现的慢性粒细胞白血病髓外急变1例并文献复习

患者,女,40岁,7年前因乏力、脾大、白细胞增高行骨髓涂片及染色体等相关检查诊断为慢性粒细胞白血病（慢粒）慢性期,长期口服羟基脲治疗（据血常规调整药物剂量）,间断使用小剂量阿糖胞苷及α下扰素冶疗,一直处于缓解期,5个月前出现腹痛．腹胀．再次入院,发现脾肿大平脐,骨髓涂片及活检示慢粒慢性期并骨髓纤维化。改用伊马替尼400mg每天口服1次,症状逐渐缓解,脾缩小至肋下未触及,血常规恢复正常出院。半月前渐感四肢麻木,以双下肢为甚,逐渐四肢不能活动,二便失禁,以“截瘫原因待查”收入神经科。     

Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病发生Ph染色体阴性急性淋巴细胞白血病变一例

1病历摘要 患者男,65岁。2000年4月因乏力、皮下淤斑就诊。体格检查：脾重度肿大。血常规检查：血小板122g／L,白细胞306×10^9／L,中性中幼粒0．79,血红蛋白330×10^9／L。骨髓检查：慢性粒细胞白血病（CML）慢性期。染色体核型分析：46,XY,t（9;22）（q34;q11）[6]／46,XY[4]。羟基脲诱导缓解后予以重组干扰素α-1b（赛诺金,300万u皮下注射,每日或隔日一次）,治疗6年,间断使用小剂量阿糖胞苷和羟基脲,其间多次复查B型超声示脾轻度肿大,     

MGMT与肿瘤的治疗

O^6甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O^6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT）基因定位于10q26,整个基因长度为170kb,其cDNA中的第4外显子中的半胱氨酸残基为烷基受体,是蛋白酶的活性部位。     

急性髓系白血病细胞遗传学特征及不同剂量柔红霉素DA方案化疗效果分析

目的 分析急性髓系白血病(AML)(非M3型)染色体及相关融合基因的遗传学特征,评估其采用不同剂量柔红霉素及标准剂量阿糖胞苷组成的DA方案化疗的预后.方法 收集2013年1月至2015年1月确诊的56例初治AML(非M3型)患者,采用短期培养法处理骨髓样本,用R显带核型分析进行细胞遗传学检测,并应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和10%聚丙烯酰胺凝胶电泳对标本进行31种融合基因分型检测.接受DA方案诱导治疗时按照不同柔红霉素剂量将患者分为3组(减低剂量组、标准剂量组、大剂量组),观察3组患者治疗后完全缓解(CR)率及生存期,并采用χ2检验分析细胞遗传学和分子生物学异常对3组患者化疗效果及总生存(OS)率的影响.结果 56例患者中染色体核型异常18例(32.1%),其中染色体数目异常6例(10.7%),结构异常16例(28.6%),同时有数目和结构异常4例(7.1%).最常见的结构异常为t(8;21),数目异常为+8、-Y.融合基因检出率为48.2%(27/56),其中AML1-ETO 13例,CBFβ-MYH114例,AML1-MDS13例.融合基因和染色体核型分析使AML患者的遗传学异常检出率提升至62.0%.采用DA方案诱导化疗的总CR率为73.2%,2年OS率为42.9%.标准剂量组中中危患者的化疗缓解率低于低危患者(χ2=8.976,P=0.002);低危患者中减低剂量组与标准剂量组的化疗缓解率差异无统计学意义(P>0.05),但标准剂量组2年OS率有优势(χ2=8.045,P=0.005).结论 成年人AML具有独特的细胞遗传学特征,可辅助指导临床诊断、分型及预后判断.中危患者的预后差于低危患者,低危患者采取减低剂量DA方案也可获得较好的化疗缓解率,但标准剂量DA方案在长期生存方面优势显著.     

老年急性白血病41例临床分析

目的探讨老年急性白血病的临床特点。方法分析41例老年急性白血病患者的临床资料，包括临床特征、骨髓象，基础疾病及化疗的疗效。结果老年急性白血病治疗效果欠佳，完全缓解率低。结论老年急性白血病治疗比较困难，应选择个体化方案。