SD大鼠脂肪干细胞体外分离培养及造血因子表达情况的研究

目的建立一种体外分离和培养大鼠脂肪干细胞的方法,观察其增殖的规律,并探讨其造血因子的分泌情况。方法无菌技术下切取双侧腹股沟皮下脂肪垫,加入0.1%Ⅰ-型胶原酶消化获取细胞,接种入含10%胎牛血清的DMEM培养液,倒置显微镜下连续观察细胞形态变化,并用流式细胞学鉴定CD90、CD34、CD44、CD45、CDl06和CDllb的表达,ELISA法检测造血因子的表达,并作统计学分析。结果原代培养显示培养的脂肪干细胞24 h左右开始贴壁,8 d左右可达90%融合,基本上为梭形成纤维样细胞形态,从第3代开始细胞稳定增殖,15代以前具有活跃的增殖能力。流式细胞学鉴定显示CD44、CD90、CDl06为阳性表达,CD34、CD45、和CDllb为阴性表达,脂肪干细胞能持续的表达G-CSF、GM-CSF、M-CSF、SCF、IL-6,统计学分析提示各代细胞因子的分泌呈缓慢下降趋势。结论成功地建立了一种分离培养大鼠脂肪干细胞的方法,其生长稳定、增殖较快,可以作为组织工程的种子细胞,其稳定的表达多种造血因子,找到了一条促进造血干细胞增殖的新途径。     

MGMT基因重组腺病毒载体的构建

目的:构建表达人O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因重组腺病毒载体.方法:提取人肝组织总RNA,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆人肝细胞MGMT基因,将PCR产物连接入pBS-T原核载体,阳性重组子以双酶切及PCR鉴定.将目的基因MGMT片段亚克隆至腺病毒质粒pacAd5 CMVmcsIRES eGFP pA.构建重组腺病毒载体pacAd5 CMVmcs IRES eGFP pA-MGMT.结果:构建了人MGMT基因的重组腺病毒载体.结论:本研究成功构建了含MGMT基因的重组腺病毒载体,为进一步研究耐药基因MGMT在烷化剂治疗中对真核细胞的保护作用提供了有力的工具.     

成人急性髓细胞性白血病NPM1突变预后相关性及与FLT3、CEBPA基因突变的相互关系的研究

本研究旨在探讨成人急性髓系白血病(AML)患者npm1基因第12外显子突变与预后相关性及其与其他基因突变的相互关系。收集AML患者骨髓或外周血标本,按常规收集患者的病史、症状、体征、相关影象学检查、血常规检查、NAP、动脉血氧饱和度、骨髓常规形态+活检+染色体+荧光原位杂交(FISH)检测bcr-abl融合基因、血清EPO等,按WHO标准诊断分型。抽提DNA,采用等位基因特异性PCR结合测序检测npm1突变。结果表明,150名细胞遗传学正常的白血病患者中72例发生npm1杂合子基因突变(48%,72/150)。48%的患者存在npm1C基末端的移码突变。npm1突变的患者有特定的临床、表型和遗传特点。统计分析显示,npm1和flt3ITDs有重要的相互作用。npm1突变对诱导治疗有更好的反应,没有flt3ITD突变的患者总存活率提高。多变量分析显示,npm1突变和cebpa突变与总存活率(OS)呈正相关,flt3突变与OS呈负相关。结论:npm1突变在没有flt3基因突变时,在具有成人正常细胞遗传学的AML患者中是一个良好的独立预后因素。     

榄香烯对人实体瘤与非实体瘤作用的差异性研究

目的: 研究榄香烯对人实体瘤细胞7402、Hela与非实体瘤细胞K562、HL-60的作用差异性.方法: MTT比色法观察榄香烯对细胞生长抑制作用;荧光显微镜和透射电镜观察细胞结构的改变;DNA凝胶电泳和流式细胞术分析细胞凋亡、周期变化及Bcl-2蛋白表达情况.结果: 榄香烯能诱导7402,Hela和K562,HL-60细胞凋亡,同时都伴有Bcl-2蛋白表达下调.结论: 榄香烯对人实体瘤与非实体瘤有相同的体外抑瘤效应和作用机制.     

MGMT基因导入对真核细胞保护作用的实验研究

目的克隆六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）基因并构建表达载体，导入真核细胞表达，研究MGMT对真核细胞保护作用。方法利用RT—PCR克隆人肝细胞MGMT基因并重组构建真核表达载体。脂质体法导入K562细胞及人外周血单个核细胞（PBMNC），用实时定量PCR法检测目的基因的表达。MTT法检测转基因细胞对烷化剂耐药性的改变。结果成功克隆人MGMT基因，转染K562细胞和PBMNC后，转基因组MGMTmRNA表达水平分别是转染空载体组的13．4倍（P〈0．01）和4倍（P〈0．01）。Western blot结果显示MGMT蛋白表达在转基因组中明显高于转空载体组及对照组。耐药性实验结果显示目的基因导入后，K562稳定转染细胞和PBMNC瞬时转染细胞对烷化剂的半数抑制浓度分别提高到原来的7倍和2倍。结论MGMT基因导入可使真核细胞对烷化剂的耐药性得到不同程度的增强，从而对细胞起到保护作用。     

腺相关病毒载体及其在血液系统基因治疗中的应用及研究进展

腺相关病毒园其独特的生物学特性,在基因治疗的应用中日益受到关注,近年来其基础及应用研究均取得了较大进展.本文就腺相关病毒的生物学特性、重组腺相关病毒载体的构建及其在血液系统基因治疗中的研究作一综述.     

136例弥漫大B细胞淋巴瘤患者临床预后研究

目的 探讨影响弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者预后的危险因素,并着重分析外周血淋巴细胞计数/单核细胞计数(LMR)、LMR/乳酸脱氢酶(LDH)对DLBCL患者预后的参考价值。方法 回顾性分析2013年1月至2019年1月贵州医科大学附属医院收治的136例初诊DLBCL患者的临床资料,采用受试者工作特征曲线计算LMR、LMR/LDH最佳截断值,分析不同水平患者[高LMR组(>2.75,64例)、低LMR组(≤2.75,72例)、高LMR/LDH组(>1.12,78例)和低LMR/LDH组(≤1.12,58例)]临床特征的差异;单因素生存分析采用Kaplan-Meier法,多变量生存分析采用Cox回归法。结果 与高LMR、LMR/LDH组患者比较,低LMR、LMR/LDH组患者临床分期更晚,一般体能状态评分(ECOG评分)更高,淋巴结结外受累部位数更多,国际预后指数(IPI)评分更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。年龄、ECOG评分、瘤灶长径、淋巴结结外受累部位数、临床分期、IPI评分、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、β₂-微球蛋白(β<...     

TRAIL基因原核表达载体的构建、表达与抗体制备

目的:观察罗勒多糖对肿瘤细胞不同途径转移行为的影响,并从细胞间通讯功能的恢复以及体内NK细胞活性的变化两方面探讨其抗肿瘤转移的可能作用机制.方法:Metfigel穿膜法体外观察罗勒多糖对肿瘤细胞移动活性的影响;建立不同途径的肿瘤转移模型,体内观察罗勒多糖对肿瘤转移行为的影响.SLDT技术检测罗勒多糖对细胞通讯功能的影响;51Cr释放法检测罗勒多糖对NK细胞活性的影响.结果:罗勒多糖在体内外均具有显著的抗肿瘤转移作用;与对照组相比细胞间通讯功能有一定程度的恢复;NK细胞的活性明显提高.结论:罗勒多糖具有明显的抗肿瘤转移作用,可能是一种具有潜在开发价值的新的抗肿瘤转移药物,其抗肿瘤转移作用是通过多个药效靶点综合作用的结果.     

自体外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病临床应用研究

目的观察自体外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病的疗效、探讨移植相关并发症的预防及处理。方法回顾性分析了我院自2006年7月至2007年12月采用自体外周血造血干细胞移植(Auto-PBSCT)治疗21例恶性血液病患者的临床资料;其中,淋巴瘤15例,急性白血病3例,多发性骨髓瘤3例。结果全部病例均成功获得造血重建,中性粒细胞≥0.5×109/L平均时间为9.7(7~13)d,血小板≥20×109/L平均时间为10.9(6~23)d;无严重并发症发生,无移植相关死亡;所有患者都达到完全缓解(CR),中位随访时间9(1~16)月,1例淋巴瘤患者复发死亡,另1例急性白血病患者复发;其他19例患者仍处于CR状态。结论自体外周血干细胞移植是治疗恶性血液病的安全、有效的方法。     

亚砷酸联合维甲酸诱导治疗缓解成功急性早幼粒细胞白血病1例报告

近日,我们对1例初治急性早幼粒细胞白血病（APL）患者使用亚砷酸（化学名：三氧化二砷As2O3）和维甲酸（ATRA）诱导治疗获得形态学完全缓解（CR）,现报告如下。