接受拉米夫定治疗的慢性乙肝患者HBV反转录酶区新变异rtM204Q的表型特点分析

目的分析乙肝病毒(HBV)反转录酶(RT)区YMDD功能域新变异rtM204Q的表型特点。方法从1例接受拉米夫定(LAM)治疗的慢性乙肝患者血清中提取HBV DNA,扩增HBV全长RT区基因,PCR产物直接克隆到pGEM-Teasy载体中,随机挑选40个克隆进行DNA序列测定并分析耐药相关变异。将Xho I/Sph I双酶切后的RT片段与载体连接成含HBV 1.1倍基因组长度的重组载体。采用FuGENE HD试剂盒,将构建的含野生株和变异株的重组载体转染至人肝癌细胞系HepG2细胞。转染4h后加入不同浓度的核苷(酸)类药物[LAM终浓度为0、0.01、0.1、1、10、100μmol/L;阿德福韦酯(ADV)终浓度为0、0.033、0.1、0.33、1、3.3μmol/L;恩替卡韦(ETV)终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L;替诺福韦酯(TDF)终浓度为0、0.01、0.1、1、10、100μmol/L],隔天换药,连续作用4d后收集细胞上清,采用实时荧光定量PCR技术检测不同药物浓度下HBV DNA的复制水平,以分析变异株的表型特点。结果对从患者血清获得的37个克隆进行测序分析,结果显示13个(35.1%)为野生型,11个(29.7%)为rtM204Q突变型,2个(5.4%)为rtM204I突变型,10个(27.0%)为rtA181T突变型,1个(2.7%)为rtA181T+rtM204Q突变型。后4种变异株的复制力分别是野生株复制力的89.95%、46.28%、55.77%和34.44%(P<0.05)。前2种变异形式的表型耐药分析结果显示,rtM204Q对LAM的敏感性为野生株的1/75.68,而rtM204I对LAM的敏感性不及野生株的1/1000。rtM204Q和rtM204I株对ADV、ETV和TDF均敏感。结论 HBV RT区新的YQDD基序变异在一定程度上抑制病毒复制力,对LAM的敏感性降低,提示这可能是一个新的LAM耐药相关变异。     

不同声强低强度脉冲超声对SD大鼠骨髓间充质干细胞迁移的影响

目的探讨不同声强低强度脉冲超声(LIPUS)辐照对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外迁移的影响。方法将BMSCs分为空白对照组、30mW/cm~2组、60mW/cm~2组及90mW/cm~2组,对空白对照组仅行LIPUS假辐照操作,而对其余3组以相应声强进行辐照。以细胞划痕实验分析LIPUS对划痕愈合的促进作用,并通过MTT活性检测排除细胞增殖能力的干扰。采用transwell迁移实验评价各组BMSCs的迁移能力。通过FITC-鬼笔环肽染色检测F-肌动蛋白(Factin)表达结果 LIPUS辐照(空白对照组假辐照)后24h及48h,30mW/cm~2组、60mW/cm~2组、90mW/cm~2组及空白对照组间划痕面积差异均有统计学意义(F=26.559、106.110,P均0.001),且空白对照组划痕面积[辐照后24h:(0.93±0.26)mm~2,辐照后48h:(0.70±0.11)mm~2]最大,30mW/cm~2组[辐照后24h:(0.47±0.21)mm~2,辐照后48h:(0.19±0.10)mm~2]最小;而辐照后即刻各组间划痕面积差异无统计学意义(F=2.921,P=0.063)。LIPUS辐照(空白对照组假辐照)后即刻、24h及48h各组间吸光度差异均无统计学意义(F=1.616、0.720、1.408,P=0.196、0.544、0.378)。各组间穿过transwell小室上室的BMSCs细胞计数差异有统计学意义(F=43.145,P0.001),且30 mW/cm~2组细胞计数[(212.53±35.32)个]最大,空白对照组[(89.53±19.27)个]最小。F-actin染色显示,LIPUS辐照后BMSCs微丝增粗变长,数量增多。各组间相对荧光强度差异有统计学意义(F=64.350,P0.001),且30 mW/cm~2组相对荧光强度(125.43±17.43)最大,空白对照组(51.94±12.76)最小。结论 LIPUS可促进BMSCs体外迁移,声强为30mW/cm~2时促进效应最明显。     

多种教学方法在生理学教学中的整合应用

生理学是重要的医学基础必修课程,其理论性强、内容抽象,学生往往难以理解和掌握。主流的LBL、PBL、TBL、CBL、RBL、ReBL等教学法各有利弊,单一的教学方法已无法满足现代医学教育的需求。因此,将多种教学方法有机结合在一起,以提高教学质量,培养学生综合能力,是未来教学模式的发展趋势。本文就常用几种教学方法的特点展开讨论,并简要介绍在生理学教学中整合应用多种教学模式的实践体会,为深化教学改革、提高教学质量提供参考。     

低强度聚焦超声促进SD大鼠慢性骨骼肌损伤修复

目的：探讨低强度聚焦超声（low intensity focused ultrasound,LIFU）对大鼠慢性骨骼肌损伤的修复作用。方法：用重力打击器构建大鼠慢性骨骼肌损伤模型,构建成功后模型分为超声组和对照组,超声组采用LIFU每天1次,连续辐照患处14 d,对照组假治疗。2组分别于治疗第3、10、21天取损伤区域组织,采用苏木精-伊红（hematoxylin and eosin,HE）染色法观察组织变化,免疫组化定量生肌决定因子（Myf-5）和辅肌动蛋白（α-actinin）表达强度并使用图像分析软件进行平均光密度（average opti－cal density,AOD）分析,实时荧光定量多聚酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR）分析肌分化因子（MyoD）mRNA表达水平,对组织修复情况进行评价。结果：HE染色图片提示超声组坏死肌纤维逐渐被新生排列整齐肌纤维取代;对照组纤维组织形成,炎症细胞浸润,肌纤维萎缩明显。治疗开始的第3、10、21天,超声组α-actinin（3 d=0.270±0.026,t=2.963,P=0.018;10 d=0.244±0.011,t=2.865,P=0.027;21 d=0.222±0.031,t=1.073,P=0.317）、Myf-5（3 d=0.291±0.050,t=2.691,P=0.027;10 d=0.246±0.015,t=2.726,P=0.032;21 d=0.166±0.021,t=0.369,P=0.722）、MyoD mRNA（3 d=5.613±0.379,t=4.679,P=0.002;10 d=3.276±0.261,t=2.377,P=0.048;21 d=1.810±0.200,t=0.634,P=0.546）的表达均高于对照组α-actinin（3 d=0.234±0.008;10 d=0.214±0.020;21 d=0.203±0.023）、Myf-5（3 d=0.225±0.023;10 d=0.211±0.025;21 d=0.161±0.016）、MyoD mRNA（3 d=4.465±0.397;10 d=2.807±0.356;21 d=1.712±0.280）,且在第3、10天差异有统计学意义（P<0.05）。结论：LIFU能促进大鼠慢性骨骼肌损伤再生修复,改善组织结构。     

高强度聚焦超声对溶菌酶结构的影响

目的：探讨高强度聚焦超声（high intensity focused ultrasound,HIFU）对一种蛋白质—溶菌酶结构的影响。方法：使用频率0.94 MHz、声强3.25×104 W/cm2、脉冲重复频率4 Hz、占空比10%的脉冲高强度聚焦超声辐照溶菌酶溶液10 s。利用圆二色光谱（CD光谱）、荧光光谱、核磁共振氢谱（1H nuclear magnetic resonance,1H-NMR）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel,SDS-PAGE）方法,分别研究高强度聚焦超声对溶菌酶二级、三级和四级结构的影响。结果：高强度聚焦超声处理后,CD光谱无明显变化,表明高强度聚焦超声对溶菌酶二级结构影响不大;而荧光强度减弱,说明溶菌酶色氨酸周围的疏水结构发生了变化;SDS-PAGE结果显示,经高强度聚焦超声辐照后溶菌酶出现支链降解;分析 1H-NMR发现,辐照后溶菌酶色氨酸发生了化学位移。结论：高强度聚焦超声可以改变溶菌酶的高级结构。     

早发冠心病危险因素的研究

对４３４例冠心病患者以规范的流行病学调查方法对常见危险因素进行了调查和测量,分成中青年组、老年前期组和老年组三个年龄层比较早发和晚发冠心病的危险因素的异同。单因素分析显示：早发冠心病的主要危险因素是男性、吸烟史、冠心病、高血压和脑卒中家族史,其优势比（ＯＲ）分别为３．４５、２．５８、２．１４、２．０７和２．０８,早发冠心病组每日吸烟量显著高于其他两组（Ｐ＜０．０５）。多因素分析结果显示：被筛选进入Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归方程的变量是高血压病史、高血压和冠心病家族史、每日吸烟量、血清总胆固醇和高密度脂蛋白水平。