腺病毒介导的白介素-24转移对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡和周期调节蛋白p21、p27及CyclinE的影响

目的 探讨腺病毒介导的IL-24转移对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）和细胞周期调节蛋白p21、p27及CyclinE的影响。方法 采用10%FBS/DMEM培养293细胞,扩增腺病毒载体, GMCs培养4~6代细胞后用于分析。①观察IL-24对LPS诱导的GMCs凋亡影响：分为对照组、Ad.IL-24组、LPS组和LPS+ Ad.IL-24组,其中对照组和LPS组GMCs不转染携带IL-24腺病毒（Ad.IL-24）,Ad.IL-24组和LPS+Ad.IL-24组以Ad.IL-24转染GMCs,LPS组和LPS+Ad.IL-24组加LPS培养,以流式细胞术检测培养后24和48 h的GMCs凋亡率;②考察IL-24对GMCs周期蛋白影响：对照组为5%FBS/DMEM培养GMCs,Ad-GFP组采用携带绿色荧光蛋白的对照载体（Ad.GFP）转染GMCs,Ad.IL-24+LPS组以Ad.IL-24转染GMCs,采用Western-blot检测p21、p27及CyclinE表达。结果 ①GMCs在培养后24和48 h细胞凋亡率：对照组分别为(0.86±0.15)%和(0.98±0.4)%;IL-24组分别为(1.02±0.22)%和(1.43±0.31)%;LPS组分别为(2.19±0.81)%和(2.49±0.12)%,LPS+Ad.IL-24组分别为(18.01±1.17)%、(26.82±5.01)%;2个观察时间点细胞凋亡率对照组与IL-24组差异无统计学意义, LPS组显著高于对照组（P＜0.05）,LPS+ Ad.IL-24组细胞凋亡率最高（P＜0.05）。②Ad-GFP组p21、p27表达显著低于对照组（P<0.05）,CyclinE表达显著高于对照组（P<0.05）;Ad.IL-24+LPS组p21、p27表达较Ad-GFP组显著上调（P<0.05）,CyclinE表达较Ad-GFP组下调。结论 IL-24腺病毒载体对正常GMCs无影响,但可使LPS诱导增生的GMCs凋亡增加,其可能机制是上调关键细胞周期负调控蛋白p21、p27及下调CyclinE。     

围手术期同种异体输血对外科手术的影响

输血是一种医疗行为,是临床常用的治疗措施,也是外科手术保障的重要手段之一,但它在治疗的同时,也会对受血者的免疫功能产生影响。Opelz等在1973年对肾移植者的一项回顾性分析发现,肾移植患者在移植前多次接受输血,可以提高移植肾的存活率。这一现象使人们开始关注输血所诱发的免疫调节作用,并在相关领域积累了大量的临床资料。     

151例复发性甲状腺癌的临床分析

目的　了解影响甲状腺癌复发的因素。方法　对 15 1例复发性甲状腺癌的临床资料进行回顾分析 ,观察可能影响复发的因素。结果　性别、年龄对甲状腺癌的复发无明显的影响 (P>0 .0 5 )。而肿瘤大小 ,病理分型 ,淋巴转移 ,手术方式及术后服药对复发均有影响 (P <0 .0 5 )。是否行颈部淋巴结清扫对复发无影响。结论　对于可能复发的甲状腺癌 ,应采取相应措施尽量减少复发 ,同时也不应盲目扩大手术范围。     

Replication-incompetent Adenovirus Vector-mediated MDA-7/IL-24 Selectively Induces Growth Suppression and Apoptosis of Hepatoma Cell Line SMMC-7721

In order to investigate the effect of replication-incompetent adenovirus vector expressing MDA-7/IL-24 on tumor growth and apoptosis of human hepatocellular carcinoma （HCC） cell line SMMC-7721 and normal liver cell line L02, the recombinant replication-incompetent Ad.mda-7 virus vector was constructed and infected into the HCC cell line SMMC-7721 and normal liver cell line L02. RT-PCR was performed to examine the expression of MDA-7 mRNA. The concentrations of MDA-7/IL-4 in culture superuatants were determined by using ELISA. MTT and Hoechst staining assay were applied to observe the inhibitory and killing effects of MDA-7 on the HCC cells. By using flow cytometry, the apoptosis, cell cycle and proliferation of SMMC-7721 and L02 cells were measured. The results showed recombinant replication-incompetent virus expressing MDA-7/IL-24 was constructed successfully, and RT-PCR revealed that it could mediate the high expression of the exogenous gene MDA-7/IL-24 in SMMC-7721 and L02 cells. The expression of MDA-7/IL-24 proteins in the culture superuatant was detectable by ELISA. Ad.mda-7 infection induced apoptosis and growth suppression in SMMC-7721 cells and an increased percentage of HCC cells in the GyM phase of the cell cycle, but not in L02 cells. It was concluded that mda-7/IL-24 gene, mediated with replication-incompetent adenovirus vector, could selectively induce growth suppression and apoptosis in HCC cell line SMMC-7721 but without any toxic side-effect on normal liver line L02.     

结缔组织生长因子在血吸虫病肝纤维化肝窦毛细血管化形成中的作用

目的通过动态观察结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在血吸虫病性肝纤维化鼠肝窦内皮细胞表达水平的时相变化,探讨CTGF、肝窦内皮细胞与肝窦内皮下基底膜形成的关系。方法采用腹部敷贴法感染血吸虫尾蚴建立血吸虫病性肝纤维化模型,模型组和正常对照组均为40只。于45、60、90、120 d取肝组织标本,苏木素-伊红(HE)、Masson染色和透射电镜观察模型病理变化;免疫组织化学技术检测CTGF、ColⅣ和LN在小鼠肝脏组织中的定位、发布,并应用彩色图像分析仪进行半定量分析;Western blot检测CTGF蛋白;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CTGF mRNA的表达。结果血吸虫病肝纤维化鼠肝窦内皮细胞表达CTGF蛋白阳性或强阳性,肝窦壁LN、ColⅣ表达水平增高,且随着肝纤维化的发展,CTGF和LN、ColⅣ表达逐渐增强,同步可见肝窦内皮下基底膜逐渐增厚;正常对照组呈阴性或低水平表达。图像定量分析两组平均吸光度值、平均灰度值和阳性面积比具有统计学意义(P<0.05)。相关分析CTGF蛋白与LN、ColⅣ水平呈正相关(r=0.7512、0.6417,P<0.01)。结论血吸虫病肝纤维化时小鼠肝窦内皮细胞调控细胞外基质产生,通过CTGF蛋白表达上调,导致ColⅣ、LN分泌增加,参与肝窦内皮下基底膜形成,从而引起肝内微循环障碍。     

肝内胆管癌围手术期外周血NLR和PLR对患者预后的预测价值

目的:探讨肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICCA)围手术期外周血中性粒细胞与淋巴细胞比率(neutrophil-to-lymphocyte ratio,NLR)和血小板与淋巴细胞比率(platelet-to-lymphocyte ratio,PLR)对患者预后的预测价值.方...     

腺病毒介导MDA-7联合多柔比星对裸鼠移植肝癌作用机制的探讨

目的:将重组腺病毒介导的MDA-7(melanoma differentiation-associ8ated gene-7)与多柔比星联合治疗裸鼠肝癌,探讨基因治疗和化疗相结合治疗肿瘤的新方法。方法:构建携带人MDA-7的重组腺病毒载体(Ad.MDA-7),单独使用该载体或多柔比星以及两者联合使用对实验性肝癌裸鼠进行治疗,观察抗肿瘤效果。用免疫组化方法检测各组肿瘤组织中VEGF与E钙粘素(E-cadherin)的表达情况。结果:成功构建重组腺病毒并实现体内表达,Ad.MDA-7 多柔比星联合治疗组裸鼠平均生存时间为(83.8±4.82)d,与其他3组相比生存期明显延长,P=0.000 1;Ad.MDA-7 多柔比星组裸鼠肝癌平均大小与单独使用多柔比星或Ad.MDA-7相比明显缩小,P=0.003 1。E-cadherin的表达表明,MDA-7的作用弱于多柔比星;VEGF的表达则显示,MDA-7作用明显优于多柔比星,P=0.016 5。结论:重组腺病毒介导MDA-7联合多柔比星对裸鼠人肝癌转移模型有明显的抗肿瘤作用及协同效应,其机制可能与抗肿瘤侵袭转移有关。     

多柔比星联合羟基喜树碱杀伤肝癌细胞HepG2机制研究

目的 探讨羟基喜树碱（HCPT）联合多柔比星抑制肝细胞癌转移机制. 方法 以人肝癌细胞系HepG2及正常肝细胞LO2为实验对象, 使用噻唑蓝（MTT）法比较多柔比星处理组、HCPT组及多柔比星联合HCPT组对肝癌细胞HepG2和正常肝细胞LO2的作用差异.荧光定量PCR检测E-selectin、VEGF、MMP-9、Bcl-2及Bax mRNA的变化.Westernblot检测E-selectin和MMP-9蛋白表达的变化. 结果 MTT实验表明作用48 h后, 1.5 mg&#8226;L-1多柔比星对肝癌细胞HepG2的细胞抑制率为16.58%, 2 mg&#8226;L-1HCPT为39.92%, 而HCPT（2 mg&#8226;L-1）联合多柔比星（1, 1.5 mg&#8226;L-1）组分别为66.61%和74.47%.Real-time PCR检测表明E-selectin mRNA相对表达量多柔比星组为（52.13±0.58）, 联合组为（93.41±8.43）、MMP-9 mRNA相对表达量多柔比星组为（26.49±0.11）, 联合组为（6.48±0.05）.联合组Bcl-2及Bax表达与其他实验组比较均差异有显著性（P< 0.05）. 结论 HCPT杀伤肝癌细胞HepG2的作用优于多柔比星, HCPT联合多柔比星抑制肝癌细胞生长的效应更加明显.HCPT联合多柔比星可以明显降低HCPT及多柔比星的药物浓度, 减少这些药物对肝脏的细胞毒作用.     

HIF-1仪和HIF-2α在肝癌细胞中的时相差异表达

背景与目的：缺氧诱导因子2cL（hypoxia inducible factor-2 alpha，HIF-2旺）与缺氧诱导因子1仪结构功能相似却不可相互替代；两者在缺氧过程中的表达不一致本研究旨在检测缺氧状态下肝癌细胞中HIF-2a和HIF-1α的时相表达差异并探讨其可能的调节机制和意义方法：以1％低氧培养箱模拟细胞低氧环境，检测人肝癌SMMC-7721细胞中HIF-1α和HIF-2α mRNA量和蛋白量，以及反义HIF-1α（natural antisense hypoxia inducible factor-1α，aHIF）的mRNA量。同时应用氯化钻（CoCl2）和转录抑制剂5，6-二氯苯并咪唑1-beta-D-呋喃核糖苷（5，6-dichlorobenzimida-zole-1-beta-d-ribofuranoside，DRB）榆测HIF-1α和HIF-2α mRNA的半衰期，评价HIF-1α和HIF-2α mRNA的稳定性。结果：急性缺氧迅速诱导HIF-1α和HIF-2α蛋白在细胞内堆积。随着缺氧时间延长HIF-1α mRNA的稳定性下降，其蛋白表达降低，而HIF-2α和aHIF蛋白表达持续增高。结论：HIF-2d可能在肿瘤的放疗和化疗抗性以及与肿瘤侵袭和转移方面起着重要作用，αHIF参与了HIF-1α mRNA的调节。     

腺病毒介导MDA-7/IL-24选择性促进肝癌细胞的凋亡和增殖阻滞

目的 观察MDA-7／IL-24基因对不同p53状态人肝癌细胞HepG2、MHCC97L以及Hep3B和正常的肝细胞L02的选择性杀伤作用，为肝癌的基因治疗提供理论基础。方法 将携带人MDA-7／IL-24基因的腺病毒Ad．mda-7感染人正常肝细胞L02和不同p53状态的肝癌细胞HepG2，MHCC97L、Hep3B。通过逆转录聚合酶链反应方法观察MDA7／IL24基因的表达，酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中MDA-7／IL-24蛋白的浓度，通过四甲基偶氮唑盐染色法及Hoechst染色观察MDA-7／IL-24对肝癌细胞的生长抑制和杀伤作用，Annexin-V和碘化丙啶双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡，应用流式细胞仪检测细胞周期。结果 复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7／IL-24在肝癌细胞株HepG2，MHCC97L和Hep3B以及正常细胞L02中高效表达。细胞培养上清液中有MDA-7／IL-24蛋白表达。MDA-7／IL-24能明显抑制各种肝癌细胞的生长，Hoechst染色提示MDA-7／IL-24促进肝癌细胞的凋亡，流式细胞仪提示MDA-7能选择性杀伤肝癌细胞而对正常的肝细胞无影响，细胞周期分析提示MDA-7／IL-24阻滞肝癌细胞在G2／M期，同时对正常的肝细胞没有促凋亡作用和增殖阻滞作用。结论 复制缺陷型重组腺病毒载体Ad．mda-7能介导MDA-7／IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达，选择性地杀伤肝癌细胞HepG2、MHCC97L和Hep3B，促进细胞增殖阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡而与肿瘤细胞的P53基因的状态无关，同时对正常的肝细胞L02无任何毒性作用。