三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用

目的观察三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用.方法建立缺氧/缺糖再给氧模型,模拟缺血再灌注损伤.流式细胞术检测凋亡细胞百分率,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出和一氧化氮(NO)的产生量.结果神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加LDH的漏出和NO的产生,并随再给氧时间的延长而增加.三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,减少LDH的漏出和NO的过量产生,三七总皂苷的作用随剂量增加而增加.结论三七总皂苷具有拮抗海马神经细胞凋亡的作用,这种作用可能与降低或抑制一氧化氮合酶(NOS)活性,减少NO的过量产生有关.     

脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注模型的建立及牛胆酸的保护作用

目的:建立脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注模型,并观察了牛胆酸对其影响。方法:体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,以氧糖剥夺(Krebs液)再复氧复糖模型模拟缺血再灌注损伤,并用牛胆酸进行了干预,用MTT比色法测定A值代表细胞生存活性。结果:氧糖剥夺4h再复氧复糖12h可造成培养大鼠脑微血管内皮细胞损伤,牛胆酸干预后A值明显高于模型组(P<0.01)。结论:牛胆酸可显著减轻脑微血管内皮细胞体外模拟缺血再灌注细胞损伤。     

常规制备家兔血清对人脐静脉内皮细胞-304的影响

目的 :探讨中药血清药理学研究中常规制备的正常家兔血清浓度变化对培养体系中细胞的影响。方法 :常规制备无污染、无溶血正常家兔血清 ,通过细胞形态学、台盼蓝染色活细胞计数、细胞毒四唑盐 (MTT)比色试验、乳酸脱氢酶 (LDH)及血管紧张素转换酶 (ACE)等指标 ,观察 5 %、10 %、2 0 %、4 0 %、60 %和 80 %家兔血清对人脐静脉内皮细胞 (VEC) 30 4的影响。结果 :5 %和 10 %两浓度组各指标均无变化 ,对VEC 30 4没有损伤作用。 4 0 %、60 %和 80 % 3个浓度组家兔血清浓度对细胞均有不同程度的损伤 ,而且随着浓度的增加 ,呈现出损伤加重的趋势 ,而 2 0 %的浓度从细胞形态、台盼蓝染色活细胞计数、MTT及ACE方面没有表现出明显的损伤作用 ,只有LDH含量差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 :常规制备的家兔血清在无污染和无溶血的情况下 ,其对细胞的作用浓度是有一定限制的 ,当达到 4 0 %或更高浓度时有较为明显的损伤。所以 ,在中药血清药理学研究中 ,应进行常规制备正常血清及含药血清的细胞毒实验 ,以尽量减少血清本身带给实验的影响     

中医通补法延缓衰老的实验研究

临床研究结果表明,通补方具有较好的延缓衰老之效。为进一步阐明其作用机制,亦为通补方应用于衰老及老年病的防治提供充分的科学依据,笔者开展了以下实验研究,现将结果报道如下。材料与方法1 动物与分组 ICR 品系小鼠,体重(20±2)g,雌雄各半,共40只,均由中国医学科学院动物繁殖中心提供。随机分为正常对照组、自然恢复组、通补Ⅰ号组、通补Ⅱ号组4组,每组10只。2 药物通补Ⅰ号由人参叶、肉苁蓉、枳实、酒制大黄等药组成,通补Ⅱ号为上方去枳实、酒制大黄。两药均由我院制剂室     

家兔动脉成形术后血管内膜增殖与普伐他汀联合阿司匹林的干预效应

目的:观察普伐他汀、阿司匹林联用对家兔颈动脉血管成形术后内膜增殖进展的影响及其作用机制。方法:实验于2002-03/12在北京中医药大学教育部中医内科学重点学科实验室完成。雄性日本大耳白兔30只,体质量1.8～2.0kg,动物适应性喂养1周后随机数字表法分为正常对照组(n=9)、假手术组(n=6)、模型组(n=9)、治疗组(n=6)。模型组和治疗组动物氯胺酮、速眠新混合肌注麻醉,沿气管正中切开皮肤,剥离颈总动脉,给予电刺激。术后第2天开始饲喂高脂饲料(胆固醇:0.7%,猪油:3%,普通饲料96.3%);正常对照组无任何干预措施;假手术组仅剥离颈总动脉,不做电刺激,喂高脂饲料;动物连续喂养8周后超声评价颈总动脉,根据B超选择颈总动脉有斑块或血流明显改变者作颈总动脉球囊扩张术。正常对照组、模型组、假手术组喂普通饲料,治疗组喂普伐他汀与阿司匹林含药饲料(普伐他汀5.046mg/kg,阿司匹林2.268g/kg),4周后测血脂和C-反应蛋白浓度、血清一氧化氮及转化生长因子β水平,观察颈动脉组织病理形态学改变,半定量分析增生内膜中胶原含量的变化,免疫组织化学方法分析增生内膜中巨噬细胞和平滑肌细胞阳性百分率。结果:纳入大耳白兔30只,正常对照组中途死亡1只,死因为牙齿畸型影响进食;模型组1只因电刺激8周时超声评价颈动脉未形成斑块及血流无明显改变而剔出实验,进入分析28只。与模型组比,普伐他汀与阿司匹林联用4周后,治疗组胆固醇及三酰甘油水平明显下降[(4.12±2.30),(0.74±0.17)mmol/L;(0.47±0.27),(0.39±0.14)mmol/L;P<0.05],血清C-反应蛋白水平和转化生长因子β水平均降低[(0.86±0.27),(0.57±0.30)mg/L;(3.45±0.77),(3.23±0.34)ng/L;P<0.05],一氧化氮水平升高[(41.79±35.78),(90.14±32.54)mmol/L;P<0.05],动脉内膜增殖程度明显减轻,管腔狭窄率降低,内中膜厚度及内中膜面积比降低[(71.91±14.90)%,(47.20±18.74)%;(0.41±0.17),(0.26±0.04)mm;1.66±0.63,0.78±0.34;P均<0.05],动脉内膜胶原含量减少(30.92±10.05,21.93±5.81,P<0.01),动脉内膜巨噬细胞阳性百分率降低[(13.94±4.91)%,(7.29±7.28)%,P<0.05],平滑肌细胞含量无明显差异(38.37±5.67,35.79±10.68,P>0.05)。结论:普伐他汀与阿司匹林联用具有抑制内膜增生和减少新生内膜胶原含量的作用,其机制与两药抑制炎症反应、保护内皮功能及抑制细胞外基质生成等有关。     

活血药对血管紧张素Ⅱ致心肌肥大细胞内钙浓度变化的影响

目的研究活血药丹参素和川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞内和心肌成纤维细胞内钙离子浓度的影响,探讨其抑制心肌肥大的作用机理。方法应用Fura-3荧光染料,用流式细胞仪检测乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞内钙离子浓度。结果AngⅡ可明显增加心肌细胞和心肌成纤维细胞内钙离子浓度,并随着时间的延长,于第5天其浓度达到高峰,然后下降,洛沙坦（Losartan）明显抑制其心肌和心肌成纤维内钙离子浓度的增加;研究显示丹参素和川芎嗪不仅明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞内钙离子浓度的升高,同时也明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞内钙离子浓度的升高。结论丹参素和川芎嗪不仅明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞内钙离子浓度的升高,同时也明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞内钙离子浓度的升高,表明丹参素和川芎嗪可能具有钙拮抗剂的作用,抑制血管紧张素Ⅱ所介导引起细胞内钙离子升高,从而抑制心肌细胞肥大和心肌成纤维细胞增殖。     

党参皂苷L1对抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用

目的:观察扶正固本、益气类中药党参皂苷L1对缺氧缺糖再给氧所致大鼠大脑星形胶质细胞损伤是否有保护作用。方法:实验于2004-08/2005-05在北京中医药大学东直门医院中医脑病研究室完成。①选用出生1d的Wistar大鼠40只,雌雄不拘。②分离大脑星形胶质细胞进行原代培养。加入含连二亚硫酸钠10mmol/L的无糖Earle液,置37℃体积分数0.05CO2孵箱中孵育90min进行缺氧缺糖处理。然后吸弃Earle液,加入不含连二亚硫酸钠的无血清DMEM培养液,继续置37℃体积分数0.05CO2孵箱中孵育90min进行再给氧处理。③将在相同或不同细胞培养板中的不同培养孔中细胞按随机抽签法分为6组(每10孔或8孔细胞为1组):正常对照组(正常细胞培养),模型组(进行缺氧缺糖再给氧处理),尼莫地平组[在无糖Earle液和无血清DMEM培养液加入终浓度0.5mg/L尼莫地平[购自山东新华制药股份有限公司,生产批号:0211048,10mL(2mg)/支],其余处理同模型组],缺氧缺糖再给氧 党参皂苷L1高、中、低浓度组[在无糖Earle液和无血清DMEM培养液分别加入质量浓度1.3,0.13和0.013mg/L党参皂苷L1(由北京中医药大学中医内科学教育部重点实验室采用高效液相色谱法制备法分离得到,含量为96.2%),其余处理同模型组]。测定乳酸脱氢酶漏出率时缺氧缺糖处理后直接测定,而不做再给氧处理。④四唑盐比色法测定细胞存活率,Hoechst33342和碘化丙啶原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和细胞坏死率、细胞凋亡率,比色法测定乳酸脱氢酶漏出率。结果:①荧光显微镜观察细胞形态:尼莫地平组和党参皂苷L1各浓度组与模型组比较均可见红染的坏死细胞数量明显减少,尼莫地平、党参皂苷L1各浓度组与模型组比较凋亡细胞数量无明显变化。②星形胶质细胞存活率:模型组明显低于正常组、尼莫地平组和党参皂甙L1中、低浓度组(F=42.464,P<0.01)。③细胞坏死率和乳酸脱氢酶漏出率:模型组明显高于其他5组(F=69.344,24.994,P<0.01)。④细胞凋亡率:模型组明显高于正常组(F=3.311,P<0.05),与尼莫地平组和党参皂苷L1各浓度组比较,差异不明显(P>0.05)。结论:中药党参皂苷L1对缺糖缺氧再给氧造成的星形胶质细胞损伤具有保护作用,可抑制细胞坏死,但对凋亡过程无保护作用。     

党参皂苷L1对抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用

目的：观察扶正固本、益气类中药党参皂苷L1对缺氧缺糖再给氧所致大鼠大脑星形胶质细胞损伤是否有保护作用。 方法：实验于2004-08／2005-05在北京中医药大学东直门医院中医脑病研究室完成。①选用出生1d的Wistar大鼠40只，雌雄不拘。②分离大脑星形胶质细胞进行原代培养。加入含连二亚硫酸钠10mmol／L的无糖Earle液，置37℃体积分数0．05CO2孵箱中孵育90min进行缺氧缺糖处理。然后吸弃Earle液，加入不含连二亚硫酸钠的无血清DMEM培养液，继续置37℃体积分数0．05CO2孵箱中孵育90min进行再给氧处理。③将在相同或不同细胞培养板中的不同培养孔中细胞按随机抽签法分为6组（每10孔或8孔细胞为1组）;正常对照组（正常细胞培养），模型组（进行缺氧缺糖再给氧处理），尼莫地平组[在无糖Earle液和无血清DMEM培养液加入终浓度0．5mg／L尼莫地平[购自山东新华制药股份有限公司，生产批号：0211048，10mL（2mg）／支1，其余处理同模型组]，缺氧缺糖再给氧＋党参皂苷L1高、中、低浓度组[在无糖Earle液和无血清DMEM培养液分别加入质量浓度1．3，0．13和0.013mg／L党参皂苷L1（由北京中医药大学中医内科学教育部重点实验室采用高效液相色谱法制备法分离得到，含量为96．2％），其余处理同模型组]。测定乳酸脱氢酶漏出率时缺氧缺糖处理后直接测定，而不做再给氧处理。④四唑盐比色法测定细胞存活率，Hoechst33342和碘化丙啶原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和细胞坏死率、细胞凋亡率，比色法测定乳酸脱氢酶漏出率。 结果：①荧光显微镜观察细胞形态：尼莫地平组和党参皂苷L1各浓度组与模型组比较均可见红染的坏死细胞数量明显减少，尼莫地平、党参皂苷L1各浓度组与模型组比较凋亡细胞数量无明显变化。②星形胶质细胞存活率：模型组明显低于正常组、尼莫地平组和党参皂甙L1中、低浓度组（F=42．464，P〈0．01）。③细胞坏死率和乳酸脱氢酶漏出率：模型组明显高于其他5组（F=69．344，24．994，P〈0．01）。④细胞凋亡率：模型组明显高于正常组（F=3．311，P〈0．05），与尼莫地平组和党参皂苷L1各浓度组比较，差异不明显（P〉0．05）。 结论：中药党参皂苷L1对缺糖缺氧再给氧造成的星形胶质细胞损伤具有保护作用，可抑制细胞坏死，但对凋亡过程无保护作用。     

党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠皮质神经细胞凋亡的作用

目的：以原代培养的胚胎大鼠大脑皮质神经细胞进行缺氧缺糖再给氧处理，观察党参总皂苷对神经细胞凋亡的抑制作用。方法：胚胎大鼠大脑皮质神经细胞原代培养，含连二亚硫酸钠的无糖Earle’s液进行缺氧缺糖处理造模，MTT法测定细胞存活率，Hoechst 33342和PI原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死、凋亡细胞百分率，APO-BRDU法流式细胞术检测凋亡细胞百分率，Fluo-3法流式细胞术检测细胞内Ca^2+浓度，评价药效。结果：细胞存活率：与模型组[(19．69&;#177;5．80)％]比较党参总皂苷0．52mg／L组[(39．21&;#177;12．21)％]，0．052mg／L组[(37．9l&;#177;4．67)％]能显著提高细胞存活率(P&;lt;0．001)；细胞坏死率：与模型组[(44．99&;#177;12．81)％]比较党参总皂苷0．52mg/L组[(15．66&;#177;4．67)％]，0.052mg／L组[(23、98&;#177;4.04)％]和0．0052mg／L组[(20．50&;#177;5．19)％]能显著降低细胞坏死率(P&;lt;0．001)；原位双染法细胞凋亡率：与模型组[(17．44&;#177;4．82)％]比较党参总皂苷0．52mg／L组[(10．58&;#177;2．04)％]，0．052mg／L组[(11．61&;#177;2．35)％]能显著降低细胞凋亡率(P&;lt;0．05)；流式细胞术检测细胞凋亡率：与模型组[(8．55&;#177;3．84)％]比较党参总皂苷0．52mg／L组[(3．85&;#177;1．92)％]，0．0052mg／L组[(3．45&;#177;2．22)％]能显著降低细胞凋亡率(P&;lt;0．05)；细胞内Ca^2+平均荧光值，与模型组(47．37&;#177;9．68)比较党参总皂苷0．52mg／L组(23．56&;#177;13．19)能显著降低细胞内Ca^2+平均荧光值(P&;lt;0．05)，表明党参总皂苷能明显降低细胞内Ca^2+浓度。结论：党参总皂苷对缺血再灌注损伤后神经细胞的坏死和凋亡过程均具有抑制作用，这种作用可能与其能降低细胞内Ca^2+浓度有关，提示党参总皂苷是党参治疗脑卒中急性期的主要效应成分。     

比较猪去氧胆酸与牛磺熊去氧胆抗神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的作用

目的:研究猪、熊胆粉的主要成分猪去氧胆酸及牛磺熊去氧胆对神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用。方法:实验于2000-07/2002-08在北京中医药大学中医内科学教育部重点实验室完成。培养人神经母细胞瘤细胞,以含连二亚硫酸钠的无糖Earle液模拟造成缺氧缺糖再给氧损伤,随机分为正常培养对照组,缺氧缺糖再给氧组,猪去氧胆酸3.125,1.563,0.781μmol/L浓度组,牛磺熊去氧胆3.125,1.563,0.781μmol/L浓度组。应用锥虫蓝染色测定细胞死亡率,应用比色法测定乳酸脱氢酶漏出率,四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞存活率,应用以Hoechst33342和碘化丙啶原位双染法荧光显微镜检测细胞坏死率和凋亡率。结果:①细胞死亡率:猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3.125,1.563,0.781μmol/L浓度组细胞死亡率均明显低于缺氧缺糖再给氧组犤(34.1±7.1)%,(32.8±8.2)%,(29.4±9.8)%,(27.7±6.9)%,(26.8±9.4)%,(26.2±11.1)%,(71.2±9.2)%,P<0.001犦。②乳酸脱氢酶漏出率:猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3.125,1.563,0.781μmol/L浓度组乳酸脱氢酶漏出率均明显低于缺氧缺糖再给氧组犤(46.6±5.6)%,(49.8±5.3)%,(47.0±4.0)%,(48.5±2.7)%,(44.1±4.3)%,(40.2±7.5)%,(66.4±7.6)%,P<0.001犦。③细胞存活率:猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3.125,1.563,0.78