常规制备家兔血清对人脐静脉内皮细胞-304的影响

目的：探讨中药血清药理学研究中常规制备的正常家兔血清浓度变化对培养体系中细胞的影响。方法：常规制备无污染、无溶血正常家兔血清，通过细胞形态学、台盼蓝染色活细胞计数、细胞毒四唑盐（MTT）比色试验、乳酸脱氢酶（LDH）及血管紧张素转换酶（ACE）等指标，观察5％、10％、20％、40％、60％和80％家兔血清对人脐静脉内皮细胞（VEC）－304的影响。结果：5％和10％两浓度组各指标均无变化，对VEC－304没有损伤作用。40％、60％和80％3个浓度组家兔血清浓度对细胞均有不同程度的损伤，而且随着浓度的增加，呈现出损伤加重的趋势，而20％的浓度从细胞形态、台盼蓝染色活细胞计数、MTT及ACE方面没有表现出明显的损伤作用，只有LDH含量差异有显著性（P＜0．01）。结论：常规制备的家兔血清在无污染和无溶血的情况下，其对细胞的作用浓度是有一定限制的，当达到40％或更高浓度时有较为明显的损伤。所以，在中药血清药理学研究中，应进行常规制备正常血清及含药血清的细胞毒实验，以尽量减少血清本身带给实验的影响。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ致心肌肥大的影响

利用体外细胞培养技术 ,观察了川芎嗪对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )致心肌肥大的影响。结果表明 :川芎嗪抑制AngⅡ引起的培养心肌细胞总蛋白含量及直径的增加 ,对AngⅡ引起的心脏成纤维细胞的增殖也有抑制作用 ,其效果与AngⅡ受体 1阻滞剂Losartan相似 ,说明川芎嗪具有抑制心肌肥厚的作用。     

比较猪去氧胆酸与牛磺熊去氧胆抗神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的作用

目的：研究猪、熊胆粉的主要成分猪去氧胆酸及牛磺熊去氧胆对神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用。方法：实验于2000-07／2002-08在北京中医药大学中医内科学教育部重点实验室完成。培养人神经母细胞瘤细胞，以含连二亚硫酸钠的无糖Earle液模拟造成缺氧缺糖再给氧损伤，随机分为正常培养对照组，缺氧缺糖再给氧组，猪去氧胆酸3.125，1．563，0.781μmol／L浓度组，牛磺熊去氧胆3.125，1.563，0.781μmol／L浓度组。应用锥虫蓝染色测定细胞死亡率，应用比色法测定乳酸脱氢酶漏出率，四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞存活率，应用以Hoechst33342和碘化丙啶原位双染法荧光显微镜检测细胞坏死率和凋亡率。结果：①细胞死亡率：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3．125，1563．0．781μmol／L浓度组细胞死亡率均明显低于缺氧缺糖再给氧组[(34．1&;#177;7.1)％，(32.8&;#177;8．2)％，(29.4&;#177;9．8)％，(27.7&;#177;6.9)％，(26.8&;#177;9．4)％，(26.2&;#177;11.1)％，(71.2&;#177;9.2)％，P&;lt;0.001]。②乳酸脱氢酶漏出率：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3.125，1.563，0.781μmol／L浓度组乳酸脱氢酶漏出率均明显低于缺氧缺糖再给氧组[(46．6&;#177;5.6)％，(49.8&;#177;5.3)％，(47．0&;#177;4.0)％，(48.5&;#177;2.7)％，(44.1&;#177;4.3)％，(40．2&;#177;7.5)％，(66.4&;#177;7．6)％，P&;lt;0.001)。③细胞存活率：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3．125，1．563，0.781μmol／L浓度组细胞存活率均明显高于缺氧缺糖再给氧组[(44.5&;#177;3.2)％，(45.3&;#177;2．0)％，(41.5&;#177;1．6)％，(41．6&;#177;2.4)％，(37.6&;#177;2．8)％，(40．1&;#177;18)％，(25.6&;#177;3．7)％，P(0.01～0.051。④细胞坏死率：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3．125，1．563，0．781μmol／L浓度组细胞坏死率均明显低于缺氧缺糖再给氧组[(19.7&;#177;6.2)％，(23.9&;#177;7.0)％，(26.0&;#177;6.9)％，(21.8&;#177;5．6)％，(18.7&;#177;6.1)％，(25.4&;#177;5．8)％，(46.8&;#177;10.4)％，P&;lt;0.01]。⑤细胞凋亡率：猪去氧胆酸3．125，1．563μmol／L浓度组和牛磺熊去氧胆3．125，1.563，0.781μmol／L浓度组明显低于缺氧缺糖再给氧组[(7.4&;#177;2.7)％，(8.3&;#177;4.0)％，(6.9&;#177;3.8)％，(9.2&;#177;4.5)％，(8．7&;#177;3.6)％,(16．0&;#177;4.8)％，P&;lt;0．05]。结论：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸均可明显地降低神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤时的细胞坏死率、凋亡率，显著提高细胞存活率，显著减少乳酸脱氢酶的漏出，表明猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸均具有显著的抗神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的作用，并且猪去氧胆酸与牛磺熊去氧胆酸之间没有显著差异。     

通脉宁胶囊对LPC诱导的血管平滑肌细胞增殖及钙超载的影响

通脉宁胶囊是陈淑长教授多年来应用于临床治疗周围血管疾病血瘀证的有效方药,具有益气活血、通络止痛的作用.由黄芪、党参、丹参、当归、赤芍等组成.本实验室前期采用兔颈动脉球囊损伤模型研究通脉宁胶囊对PTA术后RS的预防作用,结果显示通脉宁可明显降低内膜及中膜厚度,减少管壁胶原,使管壁血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达下降,提示抑制VSMC的bFGF及ⅥEGF表达可能是通脉宁胶囊减轻PTA后RS程度的作用机制之一[1],从而为通脉宁胶囊治疗气虚血瘀所致的PTA术后RS提供了一定的理论依据.本实验应用细胞培养技术观察通脉宁胶囊全方及拆方药物血清对LPC诱导VSMC增殖及钙超载的影响.     

解毒活血益气方药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖及脂质过氧化的影响

目的：研究解毒活血益气方药物血清对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)增殖、脂质过氧化的影响。方法：首先建立颈动脉粥样硬化狭窄模型，运用球囊原位扩张和喂饲高脂饲料致经皮动脉腔内成形术(percutaneous trailsluminal angioplasty，PTA)后再狭窄模型，造模成功后给予含解毒活血益气组方和阳性对照药(普伐他汀、巴米尔)的饲料进行治疗4周，获取模型动物和给药动物血清；采用MTT法、黄嘌呤氧化酶法和MDA测试盒观察药物血清作用12、24h时，对VSMC增殖、总SOD活力和MDA含量的影响。结果：解毒活血益气方在不同时相均能显著抑制VSMC的增殖；解毒活血益气方显著降低MDA的含量和增加总SOD活力，并呈现出良好的时效性。结论：解毒活血益气方可能通过抑制VSMC增殖，对抗脂质过氧化损伤等机制，干预PTCA术后再狭窄。     

心梗后心力衰竭大鼠心脏基因表达谱及益气活方对其血流动力学影响的研究

目的　观察益气活血方对心梗后心力衰竭模型大鼠心脏血流动力学的影响。方法　以大鼠左冠状动脉结扎术造成心梗后心衰模型。对心衰形成 (术后 10d)、稳定 (8周 )二期的大鼠左心室梗塞区、非梗塞区和同期假手术组左心室分别取材并提取总RNA ,以 6张大鼠 4 0S基因芯片 (4 0 96个基因 张芯片 )对其进行检测 ;术后 4周以益气活血方对模型大鼠治疗至 8周 ,以卡托普利作为阳性对照药 ;经阻抗法观察给药前后大鼠心脏功能的变化。结果　①检测基因表达谱芯片 ,发现心衰模型大鼠心肌有参与能量代谢、心肌细胞骨架及纤维等 13类共千余条表达上调和下调的基因 ,在梗塞区差异表达基因形成期最多 (10 86条 )、稳定期次之 (72 4条 ) ;而非梗塞区为形成期最多 (196条 ) ,稳定期较少 (97条 )。②心梗后心衰大鼠经治疗后心功能明显改善 ,卡托普利组SV(mL 次 )由0 0 96± 0 0 2 6改善为 0 319± 0 0 82 (P <0 0 1) ,CO(mL min)由 4 2 80± 11 0 2变为 136 90± 35 12 (P<0 0 1) ,CI[mL (min·kg) ]由 10 2 34± 31 0 0改善为 2 84 0 9± 6 5 74 (P <0 0 1) ;益气活血组SV由0 0 99± 0 0 30改善为 0 340± 0 0 70 (P <0 0 1)、CO由 4 4 14± 11 90变为 14 1 4 9± 19 36 (P <0 0 1) ,CI由 10 8 2 4± 3     

通脉宁胶囊对LPC诱导血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察通脉宁胶囊不同剂量药物血清对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导的血管平滑肌细胞增殖活性及细胞周期的影响.方法组织贴块法进行血管平滑肌细胞(VSMC)培养,应用血清药理学的方法,LPC10-8 mol/L作为刺激因子,将通脉宁胶囊分为大、中、小3个剂量组.MTT法测定细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期.结果通脉宁大、中、小剂量组可明显降低细胞的OD值呈剂量依赖性地抑制LPC诱导的VSMC增殖. 明显降低细胞的S期数目百分比,增加G0/G1期数目百分比,使VSMC阻滞在G0/G1期,抑制细胞进入S期.结论从细胞分子水平说明通脉宁胶囊主要是通过影响细胞内DNA合成,减少有丝分裂,增加G0/G1期数目百分比,减少S期数目百分比而发挥抑制VSMC增殖作用.     

复春片的药理学研究

<正> 复春片是以补肾壮阳药淫羊霍、蜈蚣等为主体的复方制剂,具有温肾壮阳、益气和中、通经强筋、养胃安神的作用,主要用于治疗阳萎早泻症。中医理论认为阳萎和肾阳不足、命门火衰有关;现代医学研究认为肾阳与垂体-肾上腺轴密切相关。据此,我们观察了复春片对肾上腺组织、睾丸组织及其它方面的影响,现将观察结果报告如下。     

益气活血药对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞能量与脂质过氧化反应变化的影响

目的观察心肌细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用后反映能量的酶与脂质过氧化反应的变化及不同类中药对其的影响.方法用AngⅡ作用于培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞,观察作用24、48、72、96 h细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化及益气、活血、益气活血中药的作用.结果在AngⅡ作用48 h后,细胞上清液中LDH、SDH明显增加(P＜0.01),MDA含量明显升高,SOD活性明显降低(P＜0.01),各中药组LDH、SDH明显降低,且可明显减少MDA含量、升高SOD活性(P＜0.05或P＜0.01).结论AngⅡ作用一定时间后,伴随着能量的变化和引发的脂质过氧化反应,使心肌细胞的功能受到影响,益气、活血、益气活血中药均有保护作用,尤以益气活血药作用明显.     

4味中药对体外培养成骨样细胞增殖的影响——对通补强骨方中主要组成药物的研究

应用UMR 10 6成骨细胞株 ,观察通补强骨方中的四味主要药物 淫羊藿、女贞子、黄芪、大黄对成骨细胞株增殖情况的影响。结果发现 :四种药物在适当浓度均能促进成骨细胞增殖。其中黄芪在低浓度 (5mg L)即显示促增殖作用 ,其作用强度与剂量无明显联系 ;淫羊藿、女贞子高浓度组 (5 0 0mg L)较低浓度组 (5mg L)促增殖作用有上升趋势 ;大黄中浓度 (10 0mg L)有促增殖作用 ,高浓度 (10 0 0mg L)有抑制成骨细胞增殖作用