肿瘤坏死因子-α对脂肪细胞脂联素和炎症因子mRNA表达的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子吨(TNF-α)在肥胖-炎症-胰岛素抵抗(IR)-2型糖尿病(T2DM)的病生理过程中的作用.方法:(1)培养前脂肪细胞3T3-L1细胞,并观察其诱导分化成熟过程中过氧化物酶体增殖活化受体-γ(PPAR-γ)mRNA、脂联素(ADPN)mRNA的表达情况.(2)以高浓度(20 μg几/L的TNF-α处理分化成熟的脂肪细胞0.5、4、8、24h,提取总RNA,采用实时定量逆转录聚合酶链反应检测ADPN mRNA、PPAR- γ mRNA、TNF-α mRNA、白细胞介素(IL)-6 mRNA、IL-1β mRNA的表达情况.结果:(1)3T3-L1细胞诱导分化过程中ADPN mRNA的表达呈逐渐上升趋势,诱导后PPAR-γ mRNA增加.(2)分化成熟的脂肪细胞中ADPN mRNA表达水平在TNF-α处理0.5、4、8 h后随着时间延长逐渐下降,8 h时降至最低(P<0.01). 0.5 h后PPAR-γ/mRNA表达水平并未出现明显下降,4、8、24 h时均低于对照组(P<0.01),4 h时降至最低.TNF-α处理0.5 h后TNF-α mRNA表达水平明显上升,并于4 h时达峰值,各处理组均高于对照组(P<0.01);0.5 h后IL-6mRNA表达水平明显升高,各处理组均高于对照组(P<0.01).空白组、对照组和各TNF-α处理组IL-1β mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:本实验从分子生物学水平证实了TNF-α参与肥胖-炎症-IR-T2DM的过程.     

糖尿病足感染的病原菌特征及耐药性分析

目的:探讨糖尿病足感染（DFI）患者不同感染级别的病原菌特征及耐药特点。方法:选取2020年5月—2021年2月天津医科大学朱宪彝纪念医院糖尿病足科住院的212例DFI患者,对感染的病原菌类型及耐药特点进行回顾性分析,并依据DFI严重程度的分级标准将患者分为中度DFI组和重度DFI组,比较两组间病原菌特征及耐药情况。结果:212例患者足分泌物标本中共分离出287株病原菌,前3位为鲍曼不动杆菌（11.50%）、肺炎克雷伯菌（11.15%）、金黄色葡萄球菌（10.80%）。革兰阳性菌以金黄色葡萄球菌为主,对万古霉素、利奈唑胺、奎奴普丁/达福普汀敏感率均为100%。革兰阴性菌中,中度DFI以鲍曼不动杆菌为主,且多为碳青霉烯类耐药菌株（CR-AB）,仅对替加环素敏感;重度DFI以肺炎克雷伯菌为主,对阿米卡星、碳青霉烯类、哌拉西林/他唑巴坦均100%敏感。与中度DFI患者比较,重度DFI患者中混合感染的比例升高（44.68% vs.29.09%,P<0.05）。检出的多重耐药菌中革兰阴性菌总体耐药率（19.46%）高于革兰阳性菌总体耐药率（11.96%）,以CR-AB和产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌为主。结论:DFI患者感染的病原菌以革兰阴性菌为主,但中、重度感染菌群分布不同。随着感染程度分级的加重糖尿病足混合感染的比例升高。检出的多重耐药菌以CR-AB和产ESBLs大肠埃希菌为主。     

胰高血糖素样肽-1对大鼠骨骼肌细胞糖原合成的影响及其机制

目的 研究胰高血糖素样肽-1对大鼠骨骼肌细胞的影响及其机制.方法 体外培养大鼠骨骼肌细胞,采用检测细胞存活和生长的方法（MTT法）检测胰高血糖素样肽-1、胰岛素对骨骼肌细胞存活数量的影响,应用免疫组织化学法测定糖原合成酶和磷酸化糖原合成酶激酶-3α/β表达水平,Western blotting验证胰高血糖素样肽-1对磷脂酰肌醇-3-激酶通路的影响.将骨骼肌细胞分为对照组、胰高血糖素样肽-1组、LY294002组、胰高血糖素样肽-1＋LY294002组,于48和72 h分别测定糖原合成酶和磷酸化糖原合成酶激酶-3α/β的表达水平.采用单因素方差分析进行多组间均数比较.结果 Western blotting检测结果显示,胰高血糖素样肽-1刺激后15、30 min、1、2、8h,大鼠骨骼肌细胞出现明显的阳性颗粒表达.与胰高血糖素样肽-1组相比,对照组、LY294002组、胰高血糖素样肽-1＋ LY294002组磷酸化糖原合成酶激酶-3α/β表达水平明显降低（分别为0.93±0.11、0.52±0.05、0.65±0.07、0.54±0.21,t值分别为5.751、3.651、2.811,均P＜0.05）,糖原合成酶明显降低（分别为0.84±0.14、0.28±0.05、0.34±0.22、0.57±0.08,t值分别为6.390、3.260、2.801,均P＜0.05）.结论 本研究证实胰高血糖素样肽-1可通过激活大鼠骨骼肌细胞磷脂酰肌醇-3-激酶通路增加糖原合成酶活性,促进糖原合成.     

单链构象多态性技术在胰岛素受体基因突变检测中的应用

建立聚合酶链反应－单链象多态性和银染性筛查胰岛素受体基因突变方法。选择８９例非胰岛素依赖性糖尿病患者，扩增胰岛受体基因的外显子１７－２１，ＳＳＣＰ电泳，银染色后，对突变样品进行序分析。     

C2C12-GLUT4HA骨骼肌细胞株的筛选

【摘要】目的 筛选过表达带有HA表位的葡萄糖转运子4（GLUT4HA）且具有收缩能力的C2C12骨骼肌细胞株。方法 建立稳定过表达GLUT4HA的C2C12骨骼肌细胞株,从中挑选出23个克隆。用光镜观察各个克隆分化为多核肌管的能力和响应电脉冲刺激（EPS）的收缩能力,并用免疫印迹法检测各克隆中GLUT4HA蛋白的表达水平,筛选出分化良好、响应EPS收缩且高表达GLUT4HA的细胞株。将各细胞株进一步分为胰岛素组及其对照组、EPS组及其对照组,用酶联免疫吸附（ELISA）法测定各组细胞膜上GLUT4HA的含量（转位）。结果 在选出的23个克隆中,克隆17的GLUT4HA表达量较高,分化和收缩能力良好,且在胰岛素和EPS后GLUT4转位显著升高。结论 本研究建立了过表达GLUT4HA的具有收缩能力的C2C12-GLUT4HA骨骼肌细胞株,可用于研究胰岛素调节GLUT4转位和收缩调节GLUT4转位的机制。     

不同时间持续缺氧对3 T3-L1脂肪细胞炎症因子mRNA的影响

目的探讨不同时间持续缺氧孵育后脂肪细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达的变化。明确肥胖缺氧状态下是否存在炎症因子表达增加导致胰岛素抵抗(IR)。方法将3T3-L1脂肪细胞随机分为4组,即常氧和缺氧4 h、12 h、24 h组,实时定量PCR(q RT-PCR)法测定各时间点脂肪细胞缺氧诱导因子1-α(HIF-1α),葡萄糖转运子-1(GLUT-1),TNF-α,IL-6,IL-1β的mRNA。结果与常氧组相比,缺氧12 h、24 h组HIF-1α,GLUT-1 mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论缺氧使脂肪细胞HIF-1α,GLUT-1升高,确认脂肪细胞缺氧状态形成,在缺氧状态下炎症因子TNF-α,IL-6,IL-1β mRNA水平升高,缺氧处理24 h变化最为明显。     

利拉鲁肽对小鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运子4转位的作用

目的 探讨胰高血糖素样肽1 （GLP-1）类似物利拉鲁肽对小鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运子4（GLUT4）转位的作用及可能机制.方法 在过表达带有HA表位GLUT4的小鼠骨骼肌细胞株C2C12（C2C12-GLUT4H）,分为正常对照组、胰岛素组（100 nmol/L）、利拉鲁肽1组（100 nmol/L）、利拉鲁肽2组（1 000 nmol/L）、5-氨基咪唑-4-甲酰1-β-D呋喃糖苷（AICAR）（腺苷酸活化蛋白激酶激动剂）组（2 mmol/L）.通过ELISA法测定细胞膜上C2C12-GLUT4HA,检测各组对C2C12-GLUT4HA细胞GLUT4转位的作用.应用Western blotting检测介导GLUT4转位的信号分子蛋白激酶B（AKT）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）磷酸化水平以及GLUT4蛋白表达水平.采用Student＇s t检验或单因素方差分析进行统计分析.结果 利拉鲁肽组的GLUT4转位较对照组相比明显上升[分别是对照组的（1.53±0.28）倍、（1.41±0.41）倍,F=13.4798,P＜0.05];利拉鲁肽刺激组与对照组相比能够使pAMPK水平升高[分别是对照组的（1.79±0.31）倍、（1.54±0.18）倍,F=20.0999,P＜0.05],而对pAKT无明显影响（P＞0.05）.结论 利拉鲁肽可通过激活AMPK从而促进小鼠骨骼肌细胞GLUT4转位的增加.     

血中鸢尾素水平与肥胖和2型糖尿病的关系

目的 ：探讨血中鸢尾素水平与肥胖和2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）相关指标的关系。方法 ：选取79例T2DM患者和非糖尿病对照80例,根据体质指数（body mass index,BMI）进一步分为正常组、肥胖组、T2DM组、T2DM肥胖组。应用全自动生化分析仪、全自动血糖检测仪、全自动糖化血红蛋白检测仪检测各组肥胖和T2DM相关指标,用酶联免疫吸附法检测血中鸢尾素、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平。采用方差分析和线性回归分析的方法分析数据。结果：T2DM肥胖组鸢尾素水平明显高于正常组,肥胖组和T2DM肥胖组鸢尾素水平明显高于T2DM组,糖尿病组IL-1β水平明显高于正常组,T2DM肥胖组IL-1β水平明显高于肥胖组。鸢尾素与体质量、BMI呈正相关。受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线结果显示鸢尾素在非糖尿病组、糖尿病组中的曲线下面积分别是0.653、0.854。结论：鸢尾素水平可能与肥胖存在一定的相关性,与T2DM不相关。鸢尾素在非糖尿病人群和糖尿病人群...     

短链脂肪酸对肝细胞糖脂代谢调节的作用机制研究

目的:探究肠道菌群代谢产物短链脂肪酸对小鼠肝细胞AML12糖脂代谢的影响。方法:将AML12小鼠肝细胞分别在1、2、4、8和16mmol/L浓度的乙酸钠、丙酸钠和丁酸钠中孵育24h,Western印迹检测糖脂代谢信号通路中关键蛋白蛋白激酶B（Akt）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的磷酸化水平以及AMPK总蛋白的表达量。结果:16mmol/L丙酸钠显著升高Akt磷酸化水平,为对照组的（1.56±0.09）倍（F=3.251,P<0.05）,丁酸钠在8mmol/L时即可显著增加Akt的磷酸化,为对照组的（1.66±0.18）倍（F=8.249,P<0.05）,而乙酸钠不影响Akt的磷酸化。8mmol/L丁酸钠即可显著上调GSK-3β的磷酸化水平,为对照组的（1.61±0.14）倍（F=4.690,P<0.05）,而乙酸钠和丙酸钠不影响GSK-3β的磷酸化。乙酸钠、丙酸钠和丁酸钠在不影响AMPK总蛋白表达的情况下,分别在2、1、2mmol/L时即可显著升高AMPK磷酸化水平,分别为对照组的（1.40±0.13）倍（F=4.720,P<0.05）、（1.66±0.18）倍（F=16.54,P<0.05）和（1.70±0.13）倍（F=23.50,P<0.05）。乙酸钠、丙酸钠和丁酸钠分别在16、4、1mmol/L即可显著升高ACC磷酸化水平,分别为对照组的（2.01±0.30）倍（F=4.807,P<0.01）、（1.66±0.18）倍（F=7.507,P<0.05）和（1.79±0.06）倍（F=7.028,P<0.01）。结论:短链脂肪酸可能通过调节肝细胞Akt/GSK-3β和AMPK/ACC通路减少肝脏脂质积聚并降低血糖。