RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测microRNA

目的:用改进的RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测组织中的microRNAs(miRNAs),并评价其敏感性和特异性.方法:提取组织中的小于200 bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3'末端加尾,再用5'带40 nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录,得到约80 nt的cDNA,然后用特异引物进行SYBR Green实时定量PCR扩增.结果:该法线性范围宽,可检测低丰度的miRNAs,能特异区分3'末端碱基不同的亚型,但对序列中间个别碱基不同的亚型不能鉴别.对15种miRNA在大鼠心、肝和大脑皮层的相对表达的检测验证了该法的可靠性.另外,海马组织中的miRNAs表达与大脑皮层组织有一定差异.熔解曲线的单一峰型和电泳检测到的单一条带都证明了扩增的特异性.结论:该法可快速、敏感地检测不同组织中大多数miRNAs的表达差异,可用于寻找组织特异及疾病相关的miRNAs.     

表达红色荧光蛋白的小鼠淋巴瘤EL4细胞株的建立及鉴定

本研究通过慢病毒载体将红色荧光蛋白(DsRed)导入小鼠淋巴瘤EL4细胞,建立稳定高表达DsRed的EL4/DsRed细胞株,为建立携带红色荧光标记的小鼠肿瘤模型奠定基础。构建含新霉素耐药基因(neo)、内部核糖体进入位点序列(IRES)及DsRed的双顺反子自身失活型慢病毒载体。采用脂质体转染法将慢病毒三质粒包装系统共转染人胚肾细胞系293FT包装细胞,收集病毒上清,感染EL4细胞;利用G418的药物选择特性筛选感染细胞获得稳定表达DsRed的EL4细胞株,并扩大培养。结果表明:成功构建慢病毒表达质粒pXZ208-neo-IRES-DsRed,包装的重组慢病毒滴度可达106U/ml。病毒感染EL4细胞,经终浓度为600μg/ml的G418成功筛选出稳定携带DsRed的EL4/DsRed细胞株;荧光显微镜观察及流式细胞仪检测证实该细胞株长期稳定高表达DsRed。结论:通过表达DsRed的慢病毒载体感染EL4细胞,获得了稳定高表达DsRed的EL4/DsRed细胞株。     

血液病患者血清铜蓝蛋白测定

用火箭电泳法对18例正常人及45例三种不同类型的血液病患者的血清铜蓝蛋白含量进行了测定。结果:28例再障,其中治疗无效组17例,CP含量为41.22±4.6mg/dl;缓解及明显进步组11例,CP含量为36.29±6.02mg/dl。13例急白CP含量为56.09±12.59mg/dl;4例 M DS CP含量为57.42±21.04mg/dl。     

急性脑卒中患者血糖水平对预后的影响

脑卒中后血糖水平的变化与预后有明显的关系，这已引起神经科临床工作者的重视。本文总结66例脑卒中患者的血糖水平变化，其中出血性ZI例，梗塞性45例。我们发现出血性卒中出血量越大，血糖升高越显著，预后越差。梗塞性卒中血糖轻度升高与病情和预后无明显关系。1一般资料出血     

人血液酪氨酸蛋白激酶的研究——(Ⅰ)人血清酪氨酸蛋白激酶的测定

本文报道了人血清酪氨酸蛋白激酶微量快速测定方法,并对该酶的性质进行了初步研究。发现Mn~(2+)刺激活性高于Mg~(2+),并且Mn~(2+)的最大激活浓度为5mmol/L左右。我们利用这一方法,测定了白血病患者及正常人的血清酪氨酸蛋白激酶活性,发现患者血清中该酶活性约是正常血清中的2.3倍。     

再生障碍性贫血血小板功能及血小板相关抗体联合检测

再生障碍性贫血血小板功能及血小板相关抗体联合检测徐州医学院附属医院（２２１００２）鹿群先潘秀英万美荣河南省永城县医院（４７６６００）刘翠英鹿照荣我们对１０２例再障患者进行血小板功能及血小板相关抗体（Ｉｇ）（ＰＡＩｇＧ、ＰＡＩｇＭ、ＰＡＩｇＡ、ＰＡＣ３...     

再生障碍性贫血患者α_2-巨球蛋白测定分析

血小板减少是再生障碍性贫血(再障)出血的主要原因,近年来报道再障患者血液抗凝和纤溶系统有异常[1～3]。α2-巨球蛋白(α2-Ｍ)为血清中的一种高分子糖蛋白,是主要的蛋白水解酶抑制剂,具有广谱抗蛋白酶作用,本文通过测定36例再障血清α2-Ｍ的变化,初步探讨α2-Ｍ在再障出血机理中的作用。现报告如下。材料与方法检测对象　正常献血员39名,男24名、女15名,年龄14～58岁,平均26.5岁。36例再障均系初诊和住院复治病例,男22例、女14例,年龄12～68岁,平均24.5岁。诊断符合1987年宝鸡再障会议修订的标准,均为慢性再障,其中转化为阵发性睡眠性血红…     

流行性出血热严重输液反应诱发DIC6例报告

流行性出血热(简称出血热)病程中,由于输液反应而加重病情甚至造成死亡并不少见。本文报告6例出血热患者因严重输液反应诱发DlC而造成死亡5例,现分析如下。 临床资料 一、一般资料:本组6例均为临床确诊的出血热患者。其中男性2例,女性4例。年龄除1例51岁外,余5例均在25～40岁之间。6例均发生于发热期,其中4例与低血压期重迭。反应最早发生在第2病     

输血后HLA及血小板相关抗体的检测及其意义

应用标准的微量淋巴细胞毒试验,对反复输血的患者进行了血清中 HLA 抗体筛选及特异性鉴定。同时检测了血小板相关抗体。结果 HLA 抗体的检出率为39.14%(119/304例),其中24.37%(29/119例)的抗体具有特异性,血小板相关抗体阳性率为39.83%(47/118例)。HLA 抗体的阳性频率随输血次数及供血者人数的增加而增高,差异显著。非溶血性输血反应与 HLA 抗体相关。输注浓缩粒细胞后 HLA 抗体的阳性频率最高。本文提出了一些预防及减少输血反应的措施。     

褐家鼠传播的流行性出血热393例临床分析

流行性出血热(以下简称出血热)自1982年底开始在我县暴发流行,经流行病学调查及血清学检查证实主要是由褐家鼠传播的出血热。现将我院自1982年11月～1983年4月底,收治的393例出血热作分析讨论。 临床资料 (一)一般情况:393例中,男性264例,女性129例,男:女为2.04∶1。年龄为2～78岁,其中以20—50岁发病最多,共287例,占73％。发病季节从11月份开始散发直至次年4月底仍为流行高峰。职业:农民281人占71.5％;机关干部、教