再生障碍性贫血出血机制临床探讨

目的　探讨血管因素、血小板及抗凝机制在再生障碍性贫血 (再障 )出血中的作用。方法　采用ELISA法、火箭电泳法测定 4 5例再障出血患者血浆中血栓调节蛋白 (TM)、P -选择素、抗凝血酶Ⅲ (AT -Ⅲ )、血小板相关抗体 (PAIgG)、D -二聚体等 ,与正常对照比较 ;对部分患者进行DIC相关指标测定 ;并对PAIgG与输血次数、血小板计数分别进行相关分析。结果　 9例急性再障患者血浆TM含量显著高于对照组 ,有 8例伴发DIC及继发性纤溶亢进 ;4 5例再障 (36例慢性再障和 9例急性再障 )血浆P -选择素增高同时伴有PAIgG增高 ;PAIgG增高与输血次数呈正相关 (r=0 .72 1,P <0 .0 1) ,与血小板数量呈负相关 (r=- 0 .6 95 ,P <0 .0 1)。再障时AT -Ⅲ活性高于正常对照组。结论　再障患者血小板减少除因骨髓增生减少外 ,可能还有免疫机制参与。此外 ,再障患者AT-Ⅲ增高及血浆TM含量增高所致抗凝活性增强、凝血机制活性减弱及DIC等因素均可能参与再障的出血过程。     

磷脂酰肌醇聚糖A类基因逆转录病毒载体的构建及表达

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种获得性良性克隆性造血干细胞疾病,研究发现PNH患者体内存在磷脂酰肌醇聚糖A类(PIG-A)基因异常,导致患者血细胞表面糖基磷脂酰肌醇锚蛋白(GPI-AP)缺乏,临床上出现血管内溶血等一系列表现。恢复PNH表型细胞的PIG-A基因的表达有可能逆转其GPI-AP的表达,为PNH的治疗提供新途径。我们构建了含PIG-A基因的逆转录病毒载体,体外转染PNH表型细胞,为PNH基因治疗提供实验依据。     

小干扰RNA：抗病毒、抗肿瘤的新途径

小干扰RNA是一种依赖Dicer酶的长度为2l～23nt的双链RNA。它具有很强的基因关闭功能．能够介导RNA干扰作用。降解特定的靶mRNA．在基因功能分析领域发挥了重要的作用。近年在抗病毒、抗肿瘤方面又成为国内、外研究的一大热点，为临床病毒感染和肿瘤疾病的防治提供了新途径。     

粒细胞集落刺激因子动员的小鼠异基因骨髓移植的实验研究

大量的实验室和临床证据表明 ,供体来源的免疫活性细胞介导的移植物抗白血病 (GVL)效应是骨髓移植 (BMT)治疗白血病疗效卓著的决定因素 ,而急性移植物抗宿主病(aGVHD)仍然是移植相关死亡的主要原因。采用同基因骨髓移植物中混合一定量的异基因成分骨髓细胞进行混合骨髓移植 (MBMT) ,可降低GVHD的发生并增强GVL效应[1 ,2 ] 。采用G CSF动员的异基因外周血干细胞移植 (allo PBSCT)时 ,重度aGVHD发生率降低 ,其原因之一是动员剂G CSF改变了T淋巴细胞功能[3] 。我们探讨了G CSF动员供髓鼠进行MBMT ,以增强GVL效应而不增加G…     

B区缺失的人凝血因子Ⅷ基因在293T细胞表达

本研究目的是构建含有人凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因的慢病毒载体,观察其在293T细胞中的表达情况。用限制性内切酶法获得B区缺失的人凝血因子Ⅷ基因(BDDhFⅧcDNA)片段,将其克隆至慢病毒载体pXZ208,构建了慢病毒表达载体pXZ208-BDDhFⅧ;用限制性内切酶法鉴定载体的连接方向,用磷酸钙共沉淀法将重组质粒pXZ208-BDDhFⅧ分别与包装质粒ΔNRF、包膜蛋白质粒VSV-G共转染293T包装细胞,包装后感染293T细胞,并以pXZ171作为对照。在感染后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测BDDhFⅧ基因的转录,一期法检测细胞培养上清FⅧ的活性,流式细胞仪(FCM)检测载体的感染效率,PCR检测BDDhFⅧ基因的整合。结果表明:成功构建了慢病毒表达载体pXZ208-BDDhFⅧ,其基因转导染效率达到了59.57%。RT-PCR法能够检测到BDDhFⅧ转录的mRNA。感染后24、48、72小时检测到细胞上清中FⅧ活性(FⅧ∶C)分别为12%、43%、87%。PCR法扩增出了534bp的特异性片段。结论:成功构建的慢病毒表达载体pXZ208-BDDhFⅧ,在体外可以有效感染293T细胞并表达有活性的FⅧ,提示基因治疗可应用于血友病A。     

抗原冲击致敏的树突状细胞介导的特异性体外抗慢性粒细胞白血病细胞作用

为研究慢性粒细胞白血病 (CML)细胞冻融抗原 (CLA)致敏的树突状细胞 (DC)对特异性抗白血病的作用 ,将CML患者外周血单个核细胞来源的DC在体外用CLA致敏 ,再与CML患者的经细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共同培养。应用乳酸脱氢酶释放法观察其对自身CML细胞 ,K5 6 2细胞和Raji细胞的杀伤活性 (CIK +CLA DC组 ) ,与未致敏的DC +CIK(CIK +DC组 ) ,CIK组及CIK +CLA组进行比较。结果表明 ,效靶比为 2 5∶1时细胞杀伤活性最强 ,在该效靶比下 ,4组细胞对自身CML细胞的杀伤活性分别为 (6 8 8± 14 2 ) % ,(5 2 5± 9 4 ) % ,(2 0 7± 7 5 ) %和 (2 4 2± 8 7) %。CIK +CLA DC组杀伤活性最强 ,与其余 3组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ;CIK +DC组比CIK组杀伤活性强 (P <0 0 1) ;CIK组与CIK +CLA组比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。CIK +CLA DC组在效靶比为 2 5∶1时对自身CML细胞 ,K5 6 2细胞和Raji细胞的杀伤活性分别为 (6 8 8± 14 2 ) % ,(14 6± 6 2 ) %和 (12 7± 10 2 ) % ,与K5 6 2细胞和Raji细胞比较 ,具有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :CIK对CML患者自身细胞具有一定的杀伤活性 ;CIK与CML DC共培养组对自身CML细胞杀伤活性比CIK组强 ;CIK与CLA抗原致敏CML DC共培养组具有最强的杀伤活性。CLA抗原     

股骨干骨折64例并发症的护理

目的分析股骨干骨折并发症的护理措施。方法对64例股骨干骨折患者采取相应的护理措施,并观察治疗与护理的效果。结果治愈61例,治愈率95.3%。其中手术40例,非手术24例,患者经牵引石膏夹板固定治疗。效果良好,均无畸形愈合创伤性关节炎、压疮、下肢深静脉血栓等并发症。死亡3例,死亡原因2例为重度失血性休克合并腹腔内脏破裂出血,1例为重度颅脑损伤。结论股骨干骨折患者多伤情较重,应详细了解病史,认真全面进行检查,掌握患者全身情况,制定正确的护理计划,采取有效的护理措施,预防和减少并发症的发生。     

再生障碍性贫血外周血出现有核红细胞的临床意义探讨

观察３９６例再生障碍性贫血（ＡＡ），２８例外周血出现有核红细胞（Ｅｂｌ），重型再障（ＳＡＡ）１１例，慢性再障（ＣＡＡ）１７例。作者将Ｅｂｌ（＋）ＡＡ与Ｅｂｌ（－）ＡＡ病人临床特点和实验室指标进行比较，发现Ｅｂｌ（＋）ＳＡＡ较Ｅｂｌ（－）ＳＡＡ有更低的Ｈｂ值。腔道出血、败血症的发生率及死亡率较高，Ｅｂｌ（＋）ＣＡＡ较Ｅｂｌ（－）ＣＡＡ有更高的网织红计数（Ｒｅｔ），骨髓多为增生活跃，红系比例偏高，治愈     

HSV1-TK、HSV1-SR39TK及GCV、ACV对小鼠T淋巴细胞的杀伤作用研究

 目的 观察慢病毒载体携带的单纯疱疹病毒1型胸苷激酶（HSV1-TK）和突变型单纯疱疹病毒1型胸苷激酶（HSV1-SR39TK）基因在小鼠T淋巴细胞的表达及前体药物丙氧鸟苷（GCV）、无环鸟苷（ACV）对小鼠T淋巴细胞的杀伤效应。方法 用亚克隆技术将PCR扩增的HSV1-TK、HSV1-SR39TK基因分别连接至慢病毒载体,在TK、SR39TK基因后以内部核糖体进入位点（IRES）连接绿色荧光蛋白（GFP）基因,采用三质粒包装系统包装病毒,将病毒感染刀豆蛋白A激活的小鼠T淋巴细胞,然后通过CCK-8方法观察其对前体药物GCV、ACV的敏感性。结果 慢病毒载体携带的HSV1-TK 及HSV1-SR39TK 基因均可在小鼠T淋巴细胞内高效表达,GCV和ACV对转导TK基因的淋巴细胞均有杀伤作用,含突变型TK基因的淋巴细胞对前体药物敏感性更高,后者对GCV的IC50值比野生型小2.5倍,对ACV的IC50值比野生型小17.4倍。结论 表达HSV1-SR39TK基因的T细胞对GCV有更高的敏感性,对ACV也较敏感,应用HSV1- SR39TK基因进行防治GVHD的研究是更好的选择。     

昆明山海棠提取物对移植物抗宿主病小鼠T细胞亚群的影响

[目的]观察昆明山海棠(THH)提取物对移植物抗宿主病(GVHD)小鼠外周血T细胞亚群(CD3+CD4+、CD3+CD8+)的影响,探讨THH对GVHD的预防作用及机制.[方法]BALB/c受鼠(H-2d)清髓性预处理后输注C57BL/6供鼠(H-2b)骨髓细胞和脾细胞混合液,随机分4组:模型对照组、环孢素A(CsA)组(剂量为10 mg·kg-1·d-1)、THH组(剂量为400 mg·kg-1·d-1)、THH+CsA联合用药组(联药组,剂量为THH 100 mg·kg-1·d-1+CsA 5 mg·kg-1·d-1).观察移植后受鼠GVHD发生及存活情况以及嵌合体植入情况;采用流式细胞术测定受鼠外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+ T细胞百分率.[结果]①CsA组、THH组、联药组受鼠生存时间均长于模型对照组(P＜0.01);②CsA组、THH组、联药组受鼠GVHD临床表现和病理改变均较模型对照组轻;③模型对照组、CsA组、THH组、联药组受鼠骨髓细胞上异基因H-2b百分率均＞95%;④与模型对照组比较,CsA组、THH组、联药组受鼠移植后外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+细胞百分率均下降(P＜0.05),CD4+/CD8+细胞比值均上升(P＜0.05),联药组变化最显著(P＜0.05).[结论]THH可通过调节CD4+/CD8+细胞比值,抑制T淋巴细胞免疫反应而预防小鼠GVHD,THH和CsA小剂量联合用药可能有协同作用.