调节性T细胞与免疫调控

调节性T细胞是目前免疫学领域研究的热点,对于维持机体免疫耐受和免疫应答的稳定具有非常重要的作用。目前发现的调节性T细胞主要包括CD4＋CD25＋调节性T细胞、诱导产生的调节性T细胞（主要是Th3和Tr1细胞）、CD8＋调节性T细胞、NK T细胞、TCRγδ＋T细胞、CD4-CD8-双阴性T细胞。本文主要介绍这些调节性T细胞的表型特征、免疫调节机制以及它们在免疫性疾病中的作用和应用前景。     

60例多发性骨髓瘤临床分析

多发性骨髓瘤(MM)是克隆性浆细胞异常增生性疾病，多见于60岁以上的老年人，约占恶性血液病的10％。该病早期临床表现复杂多样，易误诊或漏诊，常规化疗完全缓解率甚低，预后不良。现将我院1992年—2001年收治住院、病例资料较为完整的60例MM患者进行总结。 1 临床资料……     

PGK驱动逆转录病毒载体介导HSV-TK/GCV控制GVHD的研究

目的：研究磷酸甘油酸激酶（PGK）启动子驱动的逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦（HSV-TK／GCV）系统在小鼠异基因骨髓移植（allo-BMT）后能否减轻移植物抗宿主病（GVHD）。方法：将转HSV-TK基因的逆转录病毒感染供鼠（C57BL/6鼠）脾淋巴细胞，感染后细胞与供鼠骨髓细胞混合移植给Coγ7射线照射后的受鼠（BALB／c鼠）。移植后腹腔注射GCV，用药1周，按移植后首次给药时间，分为GCV0d组、GCV7d组、GCV12d组。观察移植后受鼠生存期、存活率、GVHD发生率及严重程度、T细胞免疫重建（CD3、CD4、CD8）及异基因嵌合等指标。结果：TK／GCV0d组、TK／GCV7d组小鼠平均生存时间分别为（26.90±4.88）d、（27.00±4.80）d，较TK／GCV12d组（21.504±3.26）d和移植对照组（15.10±O.43）d明显延长（P〈0.05），TK／GCV0d组与TK／GCV7d组之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。对照组小鼠12～14d100％发生Ⅲ～Ⅳ级GVHD，实验组死亡小鼠有Ⅱ～Ⅳ级GVHD病理学改变，而长期生存小鼠仅出现Ⅰ～Ⅱ级GVHD。TK／GCV0d组、TK/Gcv7d组、TK／GCV12d组在移植后5、10、15d3个时间点检测CD4^＋ T细胞均高于对照组（P〈0.05），CD8^＋ T细胞均低于对照组（P〈0.05）。移植后30d检测10只受鼠异基因嵌合率均在95％～100％。结论：PGK启动子驱动的逆转录病毒载体介导HSV-TK／GCV系统能有效控制小鼠allo-BMT后GVHD，移植后早期预防性用药效果优于发生GVHD后治疗性用药。     

B7-1与GM-CSF双顺反子慢病毒转染骨髓基质细胞的研究

目的 研究B7-1和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)双基因共表达慢病毒载体是否可介导目的 基因在人骨髓基质细胞(MSCs)有效表达.方法 采用改良的磷酸钙沉淀法将包装质粒、包膜蛋白质粒和含目的 基因的转移质粒共转染293T包装细胞,收集的病毒上清感染密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养的MSCs,用荧光显微镜和流式细胞术(FCM)分析转导细胞绿色荧光蛋白(GFP)表达,PT-PCR分析目的 基因在转导细胞的表达.结果 密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养第三代的MSCs, CD90表达阳性率达到93.62%,包装好的慢病毒颗粒可成功感染293T包装细胞和MSCs,用荧光显微镜和FCM均可检测到转染细胞中GFP表达,阳性率分别为77.66%和43.97%,RT-PCR方法可扩增出转染细胞表达B7-1和GM-CSF基因片段.结论 B7-1和GM-CSF双基因共表达慢病毒载体可高效转移目的 基因至骨髓基质细胞并获得有效表达.     

survivin 反义RNA的克隆及慢病毒载体的构建

目的 克隆小鼠survivin cDNA,构建survivin反义RNA的慢病毒载体.方法 利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法从肾癌786-0细胞中扩增出survivin cDNA,反向克隆到慢病毒载体转移质粒pLO134中.结果 RT-PCR扩增出约370 bp片段,经酶切鉴定显示survivin反义RNA慢病毒载体（survivin pLO134）构建成功.结论 survivin反义RNA与已发表的的序列相同,我们已成功地把survivin反义RNA克隆到慢病毒载体转移质粒pLO134中.     

逆转录病毒介导p16基因转移引起K562白血病细胞系的增 …

为探讨ｐ１６基因对白血病细胞增殖的影响,为白血病发生机理的研究和ｐ１６的基因治疗提供实验依据,我们构建了ｐ１６的逆转录病毒载体ｐＬＭＳＮ,新型双嗜性包装细胞ＰＴ６７和单嗜性包装细胞Ψ２包装后,体外转导ｐ１６基因缺失的Ｋ５６２细胞。用ＲＴ－ＰＣＲ与荧光免疫法检测外源性Ｐ１６蛋白的表达,流式细胞术测定细胞周期,活细胞计数观察细胞增殖情况,进行软琼脂集落形成实验。结果表明,转导后Ｋ５６２－ｐ１６细胞中可     

骨髓移植后供者淋巴细胞输注的研究进展

恶性血液病异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发的治疗极为困难,实验研究和临床研究显示输注供者淋巴细胞(DLI)的过继免疫治疗可使allo-HSCT后复发患者获再次缓解。特别是在非清髓性-HSCT后行DLI可在减轻移植相关并发症和减少移植相关死亡的基础上,有显著增强的GVL效应。本文就其疗效机制、特点、适应征及非清髓性HSCT与DLI等方面的研究进展作一综述。     

MHC Ⅰ类链相关基因及其产物在急性白血病中的表达及意义

人类主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因(MHCclass Ⅰ chain-related gene,MIC)属于非经典MHC Ⅰ类基因,正常情况下不表达或低表达,肿瘤恶变时表达上调,被认为是一种肿瘤相关性抗原[1].NKG2D是MIC的受体,可表达于自然杀伤(NK)细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CTL),MIC与NKG2D结合能直接启动NK细胞的杀伤活性,并作为协同刺激分子扩大CTL的细胞毒效应.     

急性白血病病人外周血单个核细胞端粒酶活性定量分析

为建立一种简便，定量检测端粒酶活性的方法应用于白血病病人外周血单个核细胞（MNC）端粒酶活性分析，在应用端粒重复序列扩增法后在扩增产物内加入荧光染料PicoGreen ,并在激光480nm和发射光520nm下检测荧光强度。对20例正常人和25例急性白血病病人外周血单个核细胞的端粒酶活性进行了定量分析，结果表明，PicoGreen能特异结合双链DNA，荧光强度随双链DNA量的增加而增加。结论：该方法简单、快速，能定量，可用于急性白血病病人外周血单个核细胞端粒酶活性分析，并提示急性白血病病人外周单个核细胞的端粒酶活性明显高于正常人。     

FL与SCF、IL-3、GM-CSF及EPO协同调控脐血造血干/祖细胞的体外扩增

目的　探讨造血细胞因子的不同组合对脐血造血干 /祖细胞的扩增作用。方法　应用免疫磁珠法分离纯化脐血CD3 4+ 造血干 /祖细胞 ,在体外液体培养体系中经各种不同细胞因子组合扩增 1周 ,用流式细胞仪检测CD3 4+ 造血干 /祖细胞并进行甲基纤维素法半固体培养 2周 ,在倒置显微镜下计数集落产率。结果　在FL、SCF、IL 3、GM CSF、EPO造血细胞因子的不同组合下脐血造血干 /祖细胞得以扩增 ,以IL 3+SCF +FL +EPO组的扩增效率最高 ,其有核细胞数、CD3 4+ 细胞及CFU GM、BFU E集落分别扩增 46 2± 175、3.47± 1.6 4、2 6 4± 10 5和 12 8± 6 7倍。结论　FL对扩增CD+ 3 4细胞具有较强的协同作用 ,合理的细胞因子组合扩增的脐血造血干 /祖细胞可成为异基因造血干细胞移植的主要来源。