整合子介导大肠埃希菌和克雷伯菌多重耐药机制的研究

目的 研究整合子参与大肠埃希菌和克雷伯菌多重耐药的分子机制。方法 纸片扩散法测定61株临床分离的大肠埃希菌和克雷伯菌的药物敏感性；整合酶基因扩增法检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子；整合子可变区扩增并测序。结果 73．8％（45／61）的菌株Ⅰ类整合子阳性，2株大肠埃希菌Ⅱ类整合子阳性，未检测到Ⅲ类整合子；88．9％（40／45）的Ⅰ类整合子阳性菌株可变区扩增阳性，扩增片段大小从150—2800bp不等，有1株Ⅱ类整合子阳性菌株可变区扩增阳性，大小为2200bp；整合子可变区含有编码对氨基糖苷类抗生素耐药的基因（aadA1、aadA2、aadA5、aadB、aacA4、aae6’-Ib）、编码对磺胺类抗生素耐药的基因（dfrA1、dfr2d、dfrⅤ、dfrⅦ、dfr17）、编码对氯霉素耐药的基因（cat、catB8、cmlA1-variant）、编码对β-内酰胺类抗生素耐药的基因（blaoxa10）和编码对链丝菌素耐药的基因（sat1）。结论 整合子在大肠埃希菌和克雷伯菌中广泛存在，参与了这两种菌多重耐药的形成。     

肿瘤标志物预测肺癌非手术患者预后的意义

目的研究肿瘤标志物预测肺癌非手术患者预后的意义。方法51例确诊肺癌患者用蛋白质芯片技术检测临床处理前血清中糖链抗原19—9（CA19—9）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）和CA125的浓度,24例正常人作对照。结果（1）37例随访组CA19—9、NSE、CEA和CA1254项测定值显著高于对照组（P〈0．05）;（2）13例1年内死亡组和24例未死亡组,CA19—9和CEA测定值差异有显著性（P〈0．05）,NSE和CA125测定值差异无显著性（P〉0．05）;（3）CA125测定阳性率,在1年内死亡组（69．23％）高于未死亡组（20．83％）（X^2=8．397,P〈0．01）。结论CA19—9,CEA和CA125对肺癌非手术患者的预后判断有一定的意义。     

DNA指纹分析在肿瘤临床诊断中的应用研究进展

DNA指纹技术以DNA的多态性为基础,产生具有高度个体特异性的DNA指纹图谱,DNA指纹图谱具有高度的变异性,稳定的遗传性和体细胞稳定性。DNA指纹技术已广泛应用于揭示肿瘤发生发展过程中基因组DNA方面的改变。1DNA指纹分析技术1985年,英国遗传学家Jeffreys等人在人类基因组DNA中发     

卵巢癌细胞株SKOV3对THP-1细胞TLR信号通路的作用

卵巢癌是目前死亡率最高的妇科生殖道肿瘤,Toll样受体在组织损伤修复、组织损伤诱导炎症及肿瘤进展中发挥重要作用,其中单核-巨噬细胞中的TLR在炎症与肿瘤间发挥桥梁作用。本研究利用THP-1和卵巢癌细胞系SK-OV-3共培养体系及抗TLR1、TLR2、TLR6抗体中和实验,荧光定量PCR法检测细胞中促炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)mRNA表达水平;利用western blot检测MyD88、TRAF6、TANK、NF-κB和P-NF-κB的表达水平。结果显示THP-1与SK-OV-3共培养组较单独培养组,TLR信号通路蛋白MyD88、TRAF6、TANK及P-NF-κB表达上调,IL-1β、IL-8及TNF-α促炎症细胞因子的mRNA表达水平显著增加(Fold=4.27,Fold=4.92,Fold=3.08,P0.05),而IL-6 mRNA表达水平无显著改变。抗体中和实验显示,anti-TLR1/anti-TLR2/anti-TLR6处理组THP-1中促炎症细胞因子IL-1β(Fold=0.43,Fold=0.38,Fold=0.44)、IL-8(Fold=0.43,Fold=0.48,Fold=0.42)、TNF-a(Fold=0.23,Fold=0.21,Fold=0.23)mRNA表达水平较未加单抗共培养组显著下调,差异有统计学意义(P0.05);IL-6 mRNA表达水平则无显著改变。anti-TLR1/anti-TLR2/anti-TLR6处理组TLR信号通路蛋白MyD88、TRAF6、TANK、NF-κB、P-NF-κB表达水平较未加单抗共培养组下调。以上结果提示卵巢癌生长微环境中,TLR1/TLR2/TLR6介导的信号通路活化可诱导THP-1中促炎症细胞因子表达上调,在卵巢癌的发生、发展中发挥一定作用。     

实践教学在《临床检验基础》课程中的重要性

就南京医科大学第一临床医学院医学检验系《临床检验基础》课程创办以来,从实验、实习和毕业论文"三位一体"实践教学模式长期教学过程中的体会进行了总结。     

肿瘤相关M2型巨噬细胞通过Toll样受体增强卵巢癌细胞MMP-9的表达

目的 探讨M2型巨噬细胞在卵巢癌侵袭转移中的作用及其可能涉及的Toll样受体(TLRs)信号通路机制.方法 用320 nmol/L佛波醇酯(PMA)诱导THP-1细胞,直接免疫荧光技术鉴定M2型巨噬细胞;Transwell小室建立M2细胞与卵巢癌细胞SKOV3体外非接触式共培养模型;24和48 h共培养后,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测SKOV3内TLR1、2、6和基质金属蛋白酶MMP-9水平,蛋白免疫印记(Western blot)检测MyD88、TRAF6 、P-NF-κB和MMP-9表达;TLR1、2和6激动剂分别作用SKOV3 6、12和24h后评价MMP-9的变化.结果 PMA可诱导THP-1成为M2型巨噬细胞;M2型巨噬细胞与SKOV3共培养24和48 h后,MMP-9的表达水平显著高于对照组(P ＜0.05);TLR1、2、和6于共培养24和48 h后在SKOV3有较高表达(P＜0.05);共培养24和48 h后,TLRs信号通路蛋白MyD88、TRAF6和P-NF-κB在SKOV3也同步表达增高(P ＜0.05);TLR1、2和6激动剂Pam3CSK4、HKLM和FSL-1分别刺激SKOV3 6、12和24 h后MMP-9 mRNA水平有显著高表达(P＜0.05).结论 分化诱导后的M2型巨噬细胞,可能通过刺激和活化TLR1、2、6信号途径,引起卵巢癌细胞SKOV3内基质金属蛋白酶MMP-9水平增加,增强肿瘤的侵袭转移能力.     

线粒体脑肌病线粒体DNA突变的定量分析

目的:定量检测线粒体脑肌病突变型线粒体DNA(mtDNA)所占的比例。方法:提取线粒体脑肌病患者血液和骨骼肌总DNA,以2对寡核苷酸为引物进行PCR扩增,应用ApaI和BglⅠ酶酶切和琼脂糖电泳检测突变;在PCR反应最后一个循环加入α-32P-dCTP,产物同样酶切后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,放射自显影,光度扫描仪扫描分析。结果:病例1和2存在A3243G点突变,病例1的血液和骨骼肌突变型mtDNA分别为35.2%和65.9%,病例2的为37.0%和63.6%;病例3存在A8344G点突变,其血液和骨骼肌突变型mtDNA分别为51.0%和78.0%。结论:A3243G及A8344G位点突变分别与线粒体脑肌病伴高乳酸血症及卒中样发作(MELAS)和肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维(MERRF)的发病有关,不同组织突变型mtDNA所占比例不同。     

代谢综合征及其组分对胰腺导管腺癌预后的影响

摘要：目的?探讨代谢综合征(metabolic syndrome,MetS)及其组分对胰腺导管腺癌预后的影响。方法?回顾性分析2015年11月至2017年12月在南京医科大学第一附属医院住院行根治性切除术且术后病理诊断为胰腺导管腺癌的136例患者的临床资料，包括患者入院时的年龄、性别、身高、体重、血压及相关生化检验结果等，评估患者代谢紊乱情况的综合得分。电话随访患者手术后生存情况，记录患者的总生存期(overall survival，OS)。生存分析采用Kaplan-Meier法，预后影响因素的单因素分析选用Log-rank法检验，多因素分析采用Cox回归模型。结果?MetS组的年龄、性别、体质指数(BMI)、血压、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和空腹血糖均高于MetS前期组和无代谢异常组(P<0.05)。单因素分析显示，血清HDL-C、空腹血糖、MetS均与胰腺导管腺癌患者术后1年和3年生存率相关(P分别为0.031、0.035、0.001)。多因素Cox风险模型分析显示，MetS是评估胰腺导管腺癌患者术后生存时间的独立危险因素(HR=1.737,95%CI:1.013～2.982,P=0.045)。结论?对于胰腺导管腺癌根治术患者，MetS是影响OS的独立危险因素，MetS组分的增加可能预示着胰腺癌患者术后更差的生存率。     

单抗NJ001杀伤肺腺癌细胞机制的初步研究

目的:观察单克隆抗体NJ001杀伤肺腺癌细胞的活性,并探索其分子机制?方法:选择肺腺癌细胞株SPC-A1作为研究对象,流式细胞仪检测细胞凋亡率;相差显微镜观察凋亡细胞形态学改变;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白caspase-8?caspase-9?caspase-3?PARP和Bcl-2?Bax表达的变化?结果:单克隆抗体NJ001可以导致SPC-A1细胞发生凋亡,且凋亡率呈剂量依赖性?显微镜下观察到SPC-A1细胞皱缩变圆,甚至脱落,呈现典型的凋亡改变;Western blot检测结果显示,在单抗NJ001作用下,PARP蛋白被剪切,caspase-3的表达量因被剪切而降低,caspase-8和caspase-9蛋白均表现活化,表现为cleaved caspase-8和cleaved caspase-9蛋白的表达上调?另外促凋亡蛋白Bax表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下调?结论:单克隆抗体NJ001能通过诱导细胞凋亡发挥其杀伤肺腺癌细胞的活性,且其凋亡机制与caspase活化和Bcl-2家族蛋白的调节有关?     

miR-638对人肺腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨miR-638在肺腺癌中的表达及其与肺腺癌细胞凋亡的关系?方法:应用real-time RT-PCR的方法检测了miR-638在肺腺癌细胞株SPC-A1中的表达情况,并采用脂质体法将miR-638 模拟物瞬时转染入SPC-A1?实验设置空白对照组?无关miRNA阴性对照组和miR-638转染组,转染后在荧光显微镜下观察转染效率,实时荧光定量RT-PCR检测miR-638的表达,流式细胞术检测各组细胞凋亡率?结果:与正常细胞相比,miR-638在肺腺癌细胞中低表达?SPC-A1细胞转染miR-638模拟物后,细胞凋亡率相对于空白组和阴性对照组显著升高(P < 0.05)?结论:miR-638在肺腺癌中低表达,且能够促进肺腺癌细胞凋亡,可作为后续肺癌生物治疗的新分子靶标?