端粒酶活性与恶性脑肿瘤的诊断

目的：探讨脑胶质瘤及脑脊液（CSF）中端粒酶的活性表达情况及其在恶性脑肿瘤中的诊断价值。方法：采用TRAP（telomeric repeat amplification protocol)法检测50例脑胶质瘤,取其中15例端粒酶呈阳性患者术后CSF、4例术前CSF,检测端粒酶活性表达情况。结果：（1）脑胶质瘤（KERNOHAN分级）端粒酶：阳性率为22／50（44．0％）,其中I级为3／16（18．8％）,Ⅱ级为3／12（25．0％）;Ⅲ级为9／14（64．3％）,Ⅳ级为7／8（87．5％）。22例Ⅲ级以上恶性脑肿瘤中端粒酶活性表达阳性16／22（72．7％）明显高于Ⅱ级以下脑胶质瘤中端粒酶活性表达6／28（21．4％）（P＜0．005）。（2）CSF中端粒酶：4例术前、15例术后患者的脑脊液端粒酶检出率分别为2／4（50．0％）和10／15（66．7％）。2例术前CSF呈阴性,术后1例CSF呈阳性。结论：端粒酶是胶质瘤发展的重要因素之一,检测脑脊液中端粒酶的活性可作为辅助检查,对脑胶质瘤的诊断有一定的参考价值。     

血浆DNA甲基化检测在宫颈疾病诊断中的应用

目的对宫颈疾病患者血浆APC和RASSF1A基因启动子甲基化水平进行定量检测,探讨其在宫颈疾病诊断中的意义。方法收集34例宫颈低度病变(CINⅠ期)、43例宫颈高度病变(包含CINⅡ、CINⅢ期)、41例宫颈癌患者治疗前血浆及25例健康妇女血浆。另收集31例与血浆对应的宫颈组织标本。用双重实时荧光定量甲基化特异性PCR(qMSP)技术检测APC和RASSF1A基因启动子甲基化水平并进行统计学分析。结果宫颈疾病患者血浆中APC和RASSF1A甲基化水平与肿瘤组织有较好的一致性,且肿瘤组织水平高于血浆水平(Z分别为-2.236和-3.228,P均<0.05)。宫颈癌组血浆APC与RASSF1A甲基化率均高于低度病变组(P均<0.05);宫颈高度病变组血浆RASSF1A甲基化率也高于低度病变组,差异有显著性(P<0.05)。血浆APC和RASSF1A甲基化阳性结果在低度病变组、高度病变组和宫颈癌组均无显著性差异(P>0.05)。结论血浆DNA甲基化水平能反映宫颈癌的发生、发展变化,在宫颈癌的早期诊断中可能有重要价值。     

病毒白细胞介素 6对甲基转移酶1表达的影响

目的:观察病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)对甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)表达的影响?方法:vIL-6真核表达质粒转染293T细胞,荧光定量RT-PCR和Western blot法检测DNMT1表达的变化,比色法检测DNMT1的活性?结果:荧光定量RT-PCR和Western blot均表明vIL-6可显著促进DNMT1的表达,且vIL-6能上调DNMT1的活性?结论:vIL-6能诱导DNMT1的表达,可能是卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)致DNA甲基化异常,促进肿瘤发生发展的分子机制之一?     

丙型肝炎的实验室诊断及其存在的问题

丙型病毒性肝炎（viral hepatitis type C）是由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染所致。HCV是一个小于60nm具有单链RNA，基因组为9．5kb，带正极向的黄病毒属。HCV的感染途径以输血为主，在中国的感染率约为3．2％。在西方工业化国家，10％～30％的急性肝炎和较大比例的慢性肝炎是由HCV引起的。     

黄芪对急性弓形虫感染小鼠肝脏的影响研究

目的：研究黄芪对10^2速殖子感染小鼠肝脏的影响，探讨黄芪对急性弓形虫感染小鼠的保护作用机制。方法：建立10^2速殖子感染小鼠模型．设黄芪治疗组和对照组。2组小鼠定期分批处死．取血清和肝脏。用荧光定量PCR检测感染后第4．8天小鼠肝脏的虫荷。用赖氏法测定感染后第4、5、6．7天血清丙氨酸转氨酶（ALT）水平。取感染后第2、4、6、8天肝脏做冷冻切片．黄递酶组织化学染色方法进行iNOS酶组化染色。结果：感染后第4天和第8天肝脏虫荷两组差异无显著性。感染后黄芪组和对照组血清ALT水平持续上升，黄芪组感染后第4天为87．20U（卡门单位），显著高于对照组（34．44U，P〈0．05）；感染后第8天为172．50U．显著低于对照组（225．69U．P〈0．05）。对照组iNOS表达局限于小叶中央，汇管区浅染。结论：黄芪对急性弓形虫感染小鼠的肝脏功能存在双向调节的作用．可能与其诱导iNOS的作用有关。     

SP70在卵巢癌组织中的表达及临床病理意义

目的:探讨SP70在卵巢癌患者组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系?方法:收集65例卵巢癌组织和30例卵巢良性疾病(15例卵巢良性肿瘤,15例卵巢良性囊肿)组织的石蜡切片,采用免疫组化的方法检测其中SP70的表达情况,并使用半定量评分法判定结果,采用卡方检验或Fisher确切概率法分析SP70在卵巢癌患者组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系?应用Spearman等级相关分析研究SP70与CA125在卵巢癌中表达的关系?结果:SP70在卵巢癌组织中的表达显著高于卵巢良性疾病组,差异有显著统计学意义(72.3% vs.3.3%,P﹤0.001)?SP70在低分化卵巢癌组织中的阳性率高于中高分化组(84.4% vs.45.0%,P﹤0.05)?Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌患者组织中的阳性率亦高于Ⅰ~Ⅱ期组( 94.1% vs.64.6%,P﹤0.05)?SP70表达阳性者易发生淋巴结转移(100.0% vs.64.0%,P﹤0.05)?SP70与CA125的表达无显著相关(r=0.039,P > 0.05),提示有互补作用?结论:SP70在卵巢癌组织中高表达,特异性高,且与卵巢癌的分化程度?临床分期及淋巴结转移密切相关,可为卵巢癌的诊断及预后评估提供参考?联合检测SP70与CA125可以明显提高卵巢癌诊断的敏感性,对卵巢癌的早发现?早诊断具有重要临床意义?     

16S rRNA及18S rRNA同时检测脑脊液中的病原菌

目的 提高脑脊液中病原菌的快速、准确鉴定率。方法 以细菌的保守序列16SrRNA和真菌的18SrRNA为通用引物，用多重PCR技术对标准菌株及46例中枢神经系统感染患者的脑脊液进行扩增，同时与脑脊液的培养结果进行比较。结果 标准菌株金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、脑膜炎奈瑟菌、结核分枝杆菌、化脓性链球菌及白色念球菌均出现特异条带，人白细胞DNA为阴性。46份脑脊液标本培养阳性39例，另有2例PCR阳性而培养阴性，后经诱导传代培养证实为L型金黄色葡萄球菌。PCR阳性41例，与培养分离鉴定结果符合率为100％。结论 多重PCR可快速鉴定脑脊液中病原菌，为临床及时治疗提供必要的诊断信息。     

金黄色葡萄球菌DNA提取方法的改良

金黄色葡萄球菌DNA多采用经典的溶菌酶、酚、氯仿提取法,但是获取的DNA量较少.我们参照文献报道[1]的方法加以改良,建立一种DNA制备方法.介绍如下. 1 材料和方法     

DNA甲基化的检测在肺癌早期诊断和预后中的意义

ＧｒｅｅｎｌｅｅＲＴ报道 ,肺癌的死亡率占癌症死亡率的首位 ,是癌症的首要死亡因素。而在肺癌中 ,以非小细胞肺癌 (ｎｏｎ -ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｒｃｉｎｏｍａ ,ＮＳＣＬＣ)为最多见。美国肺癌在男性中占癌症死亡的 31% ,女性中 ,占癌症死亡人数的 2 5 %。据统计 ,美国 2 0 0 0年新增病例数为 16 40 0 0 ,当年由肺癌而致的死亡人数为 15 6 90 0 [1] 。尽管肺癌可以通过外科手术、放射和药物治疗 ,但是肺癌的 5年存活率仍在 15 %以下。这一结果与缺少有效的早期检测手段有关。如果能够对早期肺癌进行确诊 ,对临床Ｉ期肺癌而言 …     

胰岛素样生长因子Ⅰ对A549细胞和淋巴细胞IGF-Ⅰ受体mRNA表达调控的研究

目的研究肺腺癌细胞株A549和淋巴细胞在外源性胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)作用下,各自IGF-Ⅰ受体(IGF-ⅠR) mRNA的表达情况.方法采用多重RT-PCR对IGF-ⅠR mRNA进行半定量检测,研究0、5、20、 80、 160、320 ng/ml不同浓度的重组人胰岛素样生长因子Ⅰ(rIGF-Ⅰ)及在某一特定浓度下作用不同时间对培养的A549细胞和淋巴细胞IGF-ⅠR mRNA表达的影响.结果当IGF-Ⅰ增加至20 ng/ml以上,淋巴细胞IGF-ⅠR mRNA的表达显著降低,而A549细胞IGF-ⅠR mRNA的表达未见明显改变.结论外源性IGF-Ⅰ不能显著降低肺腺癌细胞IGF-ⅠR的转录水平,提示IGF-ⅠR在肺腺癌的恶性增殖过程中可能起重要作用.