4种血浆游离DNA提取方法的比较

目的比较4种方法对血浆游离结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)DNA和质粒DNA的提取效率。方法MTBDNA和重组质粒DNA经紫外分光光度法准确定量并梯度稀释,建立标准品。构建含有一定浓度MTBDNA和质粒DNA的血浆,分别采用4种方法提取血浆游离DNA,采用实时荧光PCR技术定量检测模拟血浆中MTBDNA和质粒DNA的含量,比较各种方法的提取效率。结果4种方法中,磁珠法对MTBDNA和质粒DNA的提取效率最高,分别为52.8%和69.2%;相对丢失率最低,分别为40.1%和31.8%;重复性最好,其变异系数分别为26.7%和26.0%。结论在4种方法中,磁珠法对血浆游离DNA的提取效率最高,尤其适合于小片段DNA的提取。     

肿瘤特异性蛋白70用于乳腺肿瘤良恶性鉴别

目的：探讨肿瘤特异性蛋白70（tumor specific protein 70,SP70）在乳腺肿瘤组织及血液中的表达情况及其对乳腺肿瘤良恶性鉴别的意义。方法：乳腺肿瘤患者125例（乳腺癌65例、良性病变60例）,免疫组化法检测切片中SP70的表达。ELISA检测120例乳腺肿瘤患者（58例乳腺癌、62例乳腺良性疾病）和60例健康体检者血清中SP70蛋白的水平。结果：SP70在乳腺癌组织中的表达阳性率（55.38%）高于乳腺良性病变（15.00%）,差异有统计学意义（χ2=23.846,P<0.001）。乳腺癌患者血清中SP70的水平显著高于乳腺良性疾病患者和健康对照,差异有统计学意义（F=11.884,P<0.001）。SP70在血清中的敏感性高于CA153(53.45% vs. 44.82%),且血清中SP70和CA153的表达无显著相关性（r=0.132,P=0.324）,两者联合能够明显提高检测敏感性（84.38%）。结论：检测乳腺肿瘤组织和血液中SP70的表达对其良恶性的鉴别有重要临床价值。     

血浆DNA定量用于重症肝炎患者肝细胞损伤评估

目的定量重症肝炎患者血浆DNA的水平,与ALT比较,评估鉴别重症肝炎的临床应用价值。方法收集30例重症肝炎患者外周血标本6ml,以急性肝炎(20例)、慢性乙肝(90例)、肝硬化(45例)和健康体检者(100例)作为对照。用磁珠法提取血浆DNA,双重实时荧光定量PCR测定血浆DNA。结果乙型肝炎患者的血浆DNA水平(中位数)显著高于健康对照(104.2ng/mlvs.23.4ng/ml,P=0.0000)。血浆DNA水平在重症肝炎患者和急性肝炎、慢性乙肝及肝硬化患者之间都具有显著性差异(P=0.0018、0.0000和0.0000)。乙型肝炎患者的血清ALT水平(中位数)显著高于健康对照(107.5U/Lvs.24.1U/L,P=0.0000)。重症肝炎患者的血清ALT水平与急性肝炎之间有显著差异(P=0.0024),但与慢性乙肝和肝硬化之间没有差异(P=0.0600和1.0000)。ROC曲线分析显示,在鉴别重症肝炎和肝硬化以及慢性乙肝时,血浆DNA的鉴别能力显著优于血清ALT(AUC,0.95vs.0.51,P=0.0000;0.86vs.0.34,P=0.0000)。结论用双重荧光定量PCR检测血浆DNA...     

高校医学检验专业实验教学改革初探

医学检验专业实验教学的主要目的是培养学生掌握一定的检验医学相关实验操作技能,这对培养具有较强的实际操作应用能力的检验医师起着重要的作用。作者通过参与南京医科大学医学检验系本科生的实验带教工作,提出医学检验系本科生实验教学目前存在的问题及解决措施,从而探索医学检验实验教学改革的新途径。     

完全胸腔镜与传统开放肺叶切除术对非小细胞肺癌患者围手术期影响的比较

目的:比较完全胸腔镜与传统开放行非小细胞肺癌肺叶切除术对患者围手术期临床疗效?创伤及急性期反应?方法:将40例非小细胞肺癌患者分为完全胸腔镜手术(VATS)组和传统开放手术(TOS)组,每组20例?比较肺叶切除术围手术期临床疗以及血浆游离DNA浓度和血清C反应蛋白(CRP)水平,并进行统计分析?结果:两组无死亡病例,均未出现术后不良并发症,VATS组无中转开胸?两组的手术时间?清扫淋巴结站数及个数?术后引流时间?引流量无统计学差异(P > 0.05)?VATS组的术中失血量?术后疼痛评分?术后下床活动日?术后住院天数明显低于TOS组,有统计学差异(P < 0.05)?两组术前血浆DNA浓度和CRP水平无统计学差异(P > 0.05),术后第1?3和5天各时间点VATS组血浆DNA浓度和CRP水平均明显低于同时间点TOS组(P < 0.05)?结论:完全胸腔镜下非小细胞肺癌肺叶切除术与传统开放手术相比,围手术期疗效没有明显差异,却明显减轻了对机体的创伤?急性期反应和病人的痛苦,具有明确的微创性?     

卵巢癌患者外周血单个核细胞Toll样受体2的表达及其诱导的IL-10表达

目的:观察Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)在卵巢癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中的表达及其诱导IL-10的表达水平,初步探索TLR2在卵巢癌发生发展中的作用机制?方法:收集20例卵巢癌患者?20例妇科良性疾病患者及20例同期健康体检女性EDTA抗凝外周全血,采用荧光定量PCR技术检测3组PBMC中TLR2的表达水平,并比较3组表达差异情况?TLR1?TLR2和TLR6相应配体刺激PBMC,细胞中细胞因子IL-10表达水平采用荧光定量PCR技术进行检测;流式细胞技术(FACS)检测各组IL-10分泌水平?结果:各组PBMC中TLR2均有表达;卵巢癌组PBMC 中TLR2表达量显著高于良性疾病组和健康对照组(P < 0.05),良性疾病组TLR2表达水平与健康对照组间无显著性差异;各组PBMC经TLR2的配体HKLM刺激24 h后,卵巢癌组IL-10 mRNA表达明显增强,分别为良性疾病组和健康对照组的2.25?2.33倍,妇科良性疾病组IL-10 mRNA表达水平与健康对照组间无显著差异;TLR6配体FSL-1刺激后,卵巢癌组IL-10 mRNA表达水平分别为良性疾病组和健康对照组的1.95?2.16倍,差异具有统计学意义(P < 0.05),而良性疾病组与健康对照组间无显著差异?FACS结果显示各组PBMC经TLR1的配体Pam3CSK4刺激24 h后,卵巢癌组?良性疾病组及健康对照组IL-10分泌水平中位值(M)分别为46.70?61.53?31.11 pg/ml,差异无统计学意义;经TLR2配体HKLM刺激24 h后,卵巢癌组IL-10分泌水平(M = 150.46 pg/ml)显著高于良性疾病组(M = 38.86 pg/ml)及健康对照组(M = 44.93 pg/ml),差异有统计学意义(P < 0.05),良性疾病组与健康对照组间无显著性改变;TLR6配体FSL-1刺激24 h后,卵巢癌组?良性疾病组及健康对照组IL-10分泌水平中位值分别为20.20?31.12?35.48 pg/ml,3组间无显著差异?结论:卵巢癌患者PBMC中TLR2表达水平显著增高,经其介导的细胞因子IL-10表达水平的改变可能与卵巢癌的免疫抑制相关,在卵巢癌的肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用?     

人胃癌细胞悬液裸小鼠原位移植模型建立及其部分生物学特性

目的 建立人胃癌裸小鼠原位移植模型,观察其部分生物学特性。方法 用人胃低分化腺癌细胞（ＳＧＣ－７９０１）悬液种植于小裸小鼠胃壁,观察原位移植瘤的生长情况、移植成功率和自发转移的发生率。结果 原位移植成功率（成瘤率）为６７％。移植瘤的局部淋巴结转移率８５％,远处淋巴结转移率５０％,肝转移发生率３０％。荷瘤鼠的中位生存期为１６周,晚期出现消瘦和全身衰竭。结论 该裸小鼠原位移植模型具有人胃癌自然生长过程     

不同甲基化检测技术对模拟肺癌患者血浆中APC基因甲基化的检测

目的 研究模拟肺癌患者血浆DNA中APC基因甲基化最低检测限,确定不同甲基化检测技术在早期肺癌诊断中的价值.方法 用普通甲基化特异性基因扩增（methylation specific PCR,MSP）方法检测肺癌细胞株NCI-H460细胞APC基因,以酚-氯仿经典方法提取NCI-H460细胞DNA,紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入相同的健康人血浆200μl中去,得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟血浆样本中提取血浆DNA.对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以Sybr-Green Ⅰ为染料进行实时荧光定量MSP检测,同时进行普通MSP检测.结果 NCI-H460细胞中的APC基因启动子1A区719位点存在甲基化,实时荧光定量MSP检测模拟肺癌患者血浆APC基因甲基化的最低检测限为在200 μl血浆中能检测出10^2个肿瘤细胞的DNA,而以普通MSP检测,200 μl血浆中需投入10^3个以上肿瘤细胞的DNA才有弱阳性条带.实时荧光定量MSP检测技术比普通MSP检测的敏感性至少高出10倍.结论 实时荧光定量MSP比普通MSP检测灵敏度高,该技术用于肺癌患者血浆DNA甲基化检测,可能有助于肺癌早期诊断.     

南京地区2006-2009年中段尿培养病原菌分布及耐药性变迁

目的监测并分析南京地区2006-2009年中段尿培养病原菌分布和耐药性变迁,为临床合理选用抗菌药物提供最新依据。方法采用VITEK系统或API系统鉴定细菌和真菌,细菌药物敏感性测定采用纸片扩散法(K-B法),真菌药物敏感性测定采用Rosco纸片法,应用WHONET5.3软件分析中段尿培养标本所分离的病原菌的分布及药敏情况。结果 2006-2009年的尿路感染仍然以细菌感染为主,大肠埃希菌位居首位占42.3%~46.1%,有下降趋势;肠球菌属和真菌感染的比例有所升高,2009年分别升高至14.6%和12.7%;大肠埃希菌产ESBLs酶的检出率明显升高,从2006年的12.5%升至2009年的34.1%;大肠埃希菌对碳青霉烯类药物的敏感性依然较高,对头孢菌素类的耐药率明显升高;肠球菌属在2009年对万古霉素和替考拉宁的耐药率分别为5.3%和3.0%;葡萄球菌属对万古霉素和替考拉宁仍高度敏感,未发现耐药菌株。结论定期监测和分析当地患者尿路感染病原菌种类及其耐药性变迁,对临床合理使用抗菌药物具有重要指导意义。     

不同化学发光分析系统对乙型肝炎血清标志物检测的比较

目的:对Roche Cobas e601和Abott Architect i2000 分析系统检测主要乙型肝炎血清标志物HBsAg?抗-HBs和HBeAg的结果符合性和相关性进行评价?方法:分别采用两种分析系统对119份?140份?197份标本的HBsAg?抗-HBs和HBeAg进行检测?结果:两种分析系统对HBsAg?抗-HBs?HBeAg检测的定性结果符合率分别为99.1%?95.7%和90.9%,定量数值的相关系数分别为0.566?0.863?0.964,其中抗-HBs浓度存在显著差异(P < 0.05),Abott Architect i2000显著高于Roche Cobas e 601分析系统?结论:两种分析系统在乙型肝炎标志物的定性结果判断中具有较好的符合率,但抗-HBs浓度之间存在差异?