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目的表达、纯化重组葡萄球菌肠毒素B突变体蛋白D9N(rSEB-D9N),了解表达产物rSEB-D9N的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和肿瘤生长抑制作用。方法不同浓度IPTG诱导SEB-D9N突变体原核表达系统pET32a-SEB-D9N-E.coliBL21DE3表达rSEB-D9N,经Ni-NTA亲和层析法纯化rSEB-D9N,10%SDS-PAGE和高效液相色谱检测其纯度。以Vero细胞为靶细胞,进行rSEB-D9N的细胞毒性作用,并计算TCID50值。采用MTT法分别检测不同浓度的rSEB-D9N促人淋巴细胞增殖及抑制KB及MCF-7癌细胞株生长的作用。流式细胞术检测rSEB-D9N刺激人淋巴细胞后CD3、CD4、CD8的表达。结果rSEB-D9N表达产量约占细菌总蛋白30%,纯化后获得纯度为90.48%的rSEB-D9N。rSEB和rSEB-D9N对Vero细胞的TCID50值分别为3.12,8.85μg,10.0,20.0mg·L-1的rSEB-D9N具有显著的促PBMC增殖的作用(P<0.05),且主要上调CD3,CD4和CD8的表达。5.0~20.0mg·L-1rSEB-D9N作用的PBMC上清对KB和MCF-7细胞生长均可产生明显抑制作用(P<0.05)。结论获得并纯化了重组葡萄球菌肠毒素B突变体蛋白(rSEB-D9N),其细胞毒性作用有所降低,但促人淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用仍较强,可作为研制升白细胞、抗肿瘤相关药物的候选突变体。 相似文献
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载异烟肼利福平聚乳酸纳米粒的制备及体外释药 总被引:1,自引:0,他引:1
背景:微载体药物因具有靶向性、控释性、稳定性、更好的安全性备受关注.目的:观察载异烟肼利福平两种抗结核药于同一聚乳酸纳米粒的给药系统及体外释放特性.方法:采用改良的自乳化二元溶剂扩散法制备载异烟肼和利福平纳米粒,亚微粒径分析仪测定纳米粒粒径及分布,透射电镜观察其形态;高效液相色谱仪建立测定异烟肼、利福平的载药量和包封率;以磷酸盐缓冲液为释放介质,观察载异烟肼和利福平纳米粒的体外释药特性.结果与结论:载利福平和异烟肼纳米粒表面完整光滑,无明显粘连现象,纳米粒均匀度好.亚微粒径分析仪测定纳米粒平均粒径80.4 nm.异烟肼载药量为(15.95±1.34)%,包封率为(5.01±0.17)%;利福平载药量为(4.66±0.97)%,包封率为(4.05±0.18)%.体外释药结果显示纳米粒的体外释药过程较平稳.突释期纳米粒中异烟肼释放度为15.22%,到3 d累积释放度可达95.6%;利福平释放度为9.26%,到3 d累积释放度可达90.3%.提示采用改良的自乳化二元溶剂扩散法制备载异烟肼和利福平纳米粒,所得载药纳米粒的粒径小且较均匀.纳米粒体外释药过程较平稳,无明显突释现象. 相似文献
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目的 探讨第5腰神经(L5)病变高分辨率CT(high-resolution computed tomography,HRCT)重建同层显示的可行性,为该神经病变的临床诊断提供依据。方法 筛选20例(40侧)正常及30例(41侧)病变者的L5神经。使用美国GE公司Light Speed 16层和PHILIPS i CT 256层螺旋CT扫描,然后传至工作站(GE,ADW4.1及Philips Brilliance 3.0)进行多平面重建,观察L5神经正常解剖及病变基本表现。结果 正常L5神经在斜冠状面上呈双侧对称的弧形条索状,整体形态呈"八字形",由硬膜囊穿出至椎管外腰大肌缘20例(100%);16例(80%)显示至骶髂关节上段。斜冠状内旋切面上20例(100%)显示起点至骶髂关节平面处;6例(30%)至骶丛神经或坐骨神经上段。显示L5神经病变处走行方向及张力状态改变16例(24侧),模糊15例(18侧),受压及萎缩12例(18侧),局部增粗3例(5侧),扭曲变形1例(1侧)。其中导致神经病变L5~S1椎间盘侧方突出伴骨质增生10例(15侧),L5横突肥大5例(8侧),L5峡部裂8例(10侧),L5压缩骨折3例(4侧),腰骶段恶性肿瘤4例(4侧)。结论 HRCT重建同层显示技术能够清晰显示L5神经解剖及相关疾病,对该神经疾病可提供有价值的诊断信息。 相似文献
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对不稳定的颈椎损伤 ,采用手术复位并解除脊髓压迫 ,利用内固定植骨融合尽早地重建颈椎的稳定是目前常用的治疗方法。然而目前采用的内固定器材价格昂贵 ,在边远地区 ,多数患者因经济困难不能接受这种治疗。颅骨牵引虽然可以使大部分患者获得复位、并维持颈椎的稳定 ,但是患者需长期卧床、护理不便、并发症多 ,也不适用于那些需要手术减压的患者。 1999年 10月以来 ,本院对于这部分患者采用Halo -vest架外固定、手术减压植骨融合方法治疗 ,获得了满意的融合率。临床资料与方法1.一般资料 :Halo-vest架外固定组(简称A组 ) 2 3例 ,男 2 0例 … 相似文献
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目的建立利福平在脊柱结核髂骨与病椎骨中药物浓度的反相高效液相色谱分析方法。方法以利福喷丁为内标,采用氯仿为萃取剂处理骨匀浆样品,加入二乙胺解除利福平对骨基质的吸附。分析柱为HypersilBDSC18柱(150mm×4.6mm),以0.2mol·L-1KH2PO4(pH=4.0)-乙腈(65:35)为流动相,流速1.0ml·min-1,检测波长254nm,内标法定量。结果在0.0560~1.875μg·g-1骨匀浆浓度(相当于骨中浓度0.5600~18.75μg·g-1)范围内利福平和内标峰面积比与骨样本利福平浓度呈良好线性关系(r=0.9994),萃取回收率在88.47%~96.51%(n=5),方法回收率为98.85%~103.51%(n=5),日内、日间RSD分别为2.34%~4.58%,3.38%~5.79%,(n=5)。结论本方法准确、精密度高、重复性好,是一可靠的测定骨中利福平浓度的方法,适用于脊柱结核手术患者体内正常及病椎骨组织中利福平浓度的定量分析,以便于个体化抗结核化疗方案的判定与改进。 相似文献
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脊柱结核病灶中抗痨药物浓度的测定 总被引:12,自引:1,他引:12
目的研究脊柱结核病椎各部位抗结核药物的分布特点,为脊柱结核化疗方案与手术治疗方法的改进提供理论依据。方法24例应用2SHRZ/2.5H2R2Z2(4.5个月)方案化疗结合手术治疗的脊柱结核患者,按有无病椎骨硬化分为硬化组和非硬化组。化疗第4周手术,依据手术取材时间分为术晨服药后120~130、180~190min两个时相点,取硬化组的病椎硬化壁、硬化壁外“亚正常骨”、硬化壁内结核病变组织和非硬化组的病椎结核病变组织、病变组织外“亚正常骨”以及两组患者的血浆、髂骨,采用高效液相色谱法测定上述样本的药物浓度。结果(1)吡嗪酰胺(PZA)和异烟肼(INH)各时相血药浓度与文献报道健康人单次服药的药时数据相近,利福平(RFP)则低25%,各药血药浓度高于髂骨及病椎组织中的药物浓度。(2)两组中“亚正常骨”与髂骨内的INH和RFP均达到了各自的杀菌浓度水平,PZA超过其细胞内酸性条件下MIC的5倍。三种药物各自在“亚正常骨”与自身对照的髂骨之间浓度相近。(3)硬化组中硬化壁的药物浓度仅为各药的最小抑菌浓度水平(MICs),远低于壁外围“亚正常骨”,壁内的结核病变组织中未检出上述三种药。(4)非硬化组结核坏死、干酪组织中RFP及PZA的浓度相当于各自的MICs,远低于其他组分,而INH却达到细胞内杀菌浓度。结论INH、RFP和PZA在脊柱结 相似文献
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70.
目的:探讨DR、CT三维重建、MRI三种影像学方法在布氏杆菌性脊柱炎诊断中的意义。方法:回顾性总结2010-2013年在宁夏医科大学总医院就诊治疗的33例布氏杆菌性脊柱炎患者的资料,以病理检查和实验室检查结果为诊断标准,比较DR、CT三维重建和MRI检查在布氏杆菌性脊柱炎诊断中的作用。结果:在椎间隙变化的显示方面DR占优势;CT三维重建对椎体骨破坏、死骨、硬化骨形成以及韧带变化等方面有较高的显示率;MRI主要是对椎间盘破坏、椎旁脓肿形成、骨膜改变及肉芽肿形成等方面优于DR和CT三维重建;前两者者联合能提高布氏杆菌性脊柱炎各征象的显示率;三者联合则能够对该病做出全面准确诊断。在诊断符合率方面,DR对布氏杆菌性脊柱炎诊断的符合率为54.5%,CT三维重建为90.9%,MRI为93.9%,前两者联合诊断布氏杆菌性脊柱炎的符合率为97.0%。而三者联合检查应用的诊断符合率达100%。经统计学分析,DR与CT三维重建、DR与MRI检查的诊断准确率差异有统计学意义(P0.05),CT三维重建与MRI单独检查的诊断准确率差异无统计学意义(P0.05),DR、CT三维重建联合检查与三者联合检查相比差异无统计学意义(P0.05),联合检查与单独检查相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:联合应用DR、CT三维重建、MRI是全面准确显示布氏杆菌性脊柱炎病理征象的有效方法。DR、CT三维重建、MRI联合检查诊断布氏杆菌性脊柱炎能达到极好的效果。 相似文献