纤维蛋白胶包裹嗅神经鞘细胞促进脊髓轴突再生的实验研究

目的 观察纤维蛋白胶(FG)包裹嗅神经鞘细胞(OECs)植于成年大鼠脊髓全横断断端间隙内对损伤轴突再生的促进作用。方法 成年雄性SD大鼠16只，行脊髓T11节段全横断术。FG-OECs组于间隙内移植FG包裹的OECs，FG对照组移植等量的FG，OECs对照组移植等量DF12-OECs悬液，单纯全切对照组未做任何移植，每组动物4只。术后2周处死动物，脊髓损伤区冰冻水平切片，荧光显微镜下观察OECs的存活及迁移，并行抗神经丝(NF)和生长相关蛋白-43(GAP-43)抗体免疫组织化学染色。结果 OECs及单纯全切对照组脊髓两断端连接较差，而FG对照组及FG-OECs组两断端连接良好。FG、OECs及单纯全切对照组损伤区可见少量NF及GAP-43免疫反应纤维；FG-OECs组间隙内OECs大量存活，并迁移至两侧脊髓实质内，大量NF及GAP-43免疫反应纤维通过间隙。结论 FG包裹的OECs可在成年大鼠脊髓全横断断端间隙内存活并迁移至脊髓实质内，促进损伤轴突的再生。     

非动脉炎性前部缺血性视神经病变的心血管危险因素和视功能分析

目的：探讨心血管危险因素对非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)的发生及视功能的影响。

方法：选取2014-06/2018-06于我科就诊的单眼初发NAION患者(NAION组)和与其基本资料匹配的非NAION患者(对照组)各68例68眼,检测两组患者同型半胱氨酸(Hcy)、血脂、叶酸、维生素B₁₂水平,并进行颈动脉多普勒超声检查,NAION组患者同时进行视功能检查。

结果：与对照组相比,NAION组患者Hcy(24.8±13.9μmol/L vs 11.1±8.2μmol/L)、血浆中总胆固醇(4.5±1.0mmol/L vs 3.8±0.7mmol/L)、甘油三酯(2.0±0.9mmol/L vs 1.5±0.5mmol/L)、低密度脂蛋白(2.9±0.8mmol/L vs 2.3±0.5mmol/L)水平均升高(P<0.05),维生素B₁₂水平明显下降(315.6±214.5pg/mL vs 467.9±198.2pg/mL,P<0.05),但两组患者颈内动脉阻力指数和内径无差异。NAION组患者患眼视野缺损值为16.6±7.5dB,Hcy、维生素B₁₂、叶酸及血脂水平以及是否存在全身疾病均不是NAION视野损害的危险因素,而图形视觉诱发电位P₁₀₀波幅和潜伏期峰值均与视野缺损值相关。

结论：高同型半胱氨酸、高血脂和低维生素B₁₂水平是NAION发生的危险因素,但与NAION的视野损害程度无关; 视觉诱发电位的波幅和潜伏期峰值可一定程度上反映视野损害的程度。     

地西泮对大鼠视神经切断后视网膜神经节细胞保护作用的研究

目的 探讨地西泮对成年大鼠视神经切断后视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)的保护作用及机制.方法 取雌性SD大鼠36只,随机平均分为2组,麻醉后于眶内距视神经根部1.5 mm处切断左侧视神经,眶侧残端留置浸有荧光金的明胶海绵以逆行标记RGC.术前30 min及术后每天腹腔注射地西泮(地西泮组)和生理盐水(对照组),分别手术后2 d、7 d及14 d各处死6只大鼠.根据上述实验结果,将另外24只大鼠平均随机分为2组,每天腹腔注射γ-氨基丁酸A型(GABAA)受体阻断剂荷苞牡丹碱(荷苞牡丹碱组)和荷苞牡丹碱+地西泮(联合应用组)以探讨地西泮的神经保护机制,2组在动物存活2 d及7 d后分别处死6只大鼠.动物处死后视网膜平铺,计数每只动物荧光金标记的存活RGC并得出存活RGC的平均密度.比较各组RGC密度.结果 地西泮组视神经切断后7 d RGC平均密度(1 730±75)mm-2显著高于同一时间点对照组RGC密度(1 095±94)mm-2.在此时间点,联合应用组RGC密度(1 120±63)mm-2明显低于地西泮组,而荷苞牡丹碱组与对照组RGC密度差异无统计学意义(P>0.05),说明地西泮对RGC的保护作用可被荷苞牡丹碱拮抗.结论 地西泮可通过激活GABAA受体的途径在大鼠视神经切断后7 d促进RGC的存活.     

臂丛全干不同损伤诱发神经病理性痛大鼠的痛行为学变化

目的:比较大鼠单侧臂丛全干切断伤与根性撕脱伤诱发神经病理性痛大鼠双侧后足的痛行为学特征。方法:将12只成年雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为全干切断伤和根性撕脱伤两组,以右侧为手术侧,术前及术后第3 d、7 d、14 d和第28 d检测大鼠双侧后足的机械触刺激诱发痛缩足阈值、冷刺激诱发痛评分及热刺激缩足潜伏期。结果:术前3项痛行为学指标在同一组动物双侧后足间和两组大鼠间无显著差异。与术前相比,切断伤组双侧冷刺激诱发痛评分明显增高(P<0.01),机械痛缩足阈值及热刺激缩足潜伏期则无明显变化;撕脱伤组术后各时间点双后足机械痛缩足阈值显著降低(P<0.01),冷刺激诱发痛评分显著增高(P<0.01),而热刺激缩足潜伏期则无明显变化。与切断伤组相比,撕脱伤组术后各时间点双侧后足机械痛缩足阈值均显著降低(P<0.01),双侧冷刺激诱发痛评分则显著增高(P<0.05),而热刺激缩足潜伏期则无显著差异。同组大鼠3项检测指标在术侧和健侧后足之间以及术后不同时间点之间无显著差异。结论:单侧臂丛全干切断伤仅诱发双侧后足冷刺激诱发痛,而全干根性撕脱伤不但诱发更为严重的冷刺激诱发痛,还导致双侧后足明显的机械触刺激诱发痛,这种痛行为学的变化可持续至第28 d。因此,臂丛全干根性撕脱伤较切断伤更适合作为臂丛全干损伤诱发神经病理性痛的动物模型。     

脊髓挤压伤所致小胶质细胞的变化与血脊髓屏障的关系

为探讨脊髓损伤时血脊髓屏障的破坏和小胶质细胞被激活两者之间的关系,本实验用大鼠脊髓挤压伤模型进行了研究。将成年雄性SD大鼠64只,随机分为对照组及脊髓挤压伤后0h、8h、24h、72h、1w、2w、4w等8组。分别以HE染色观察病理变化,小胶质特异性标记物OX-42的免疫荧光组化染色观察小胶质细胞,股静脉伊文思蓝注射观察血脊髓屏障的变化。结果显示,脊髓损伤面积在伤后8h组明显扩大,72h达顶峰,1w组时面积回缩并维持到实验最后(4w)。在伤后24h组可观察到活化的小胶质细胞,其后一部分迁移入损伤区内,吞噬坏死组织,变成巨噬细胞。至4w时,HE染色切片上仍可在伤区内见到小胶质巨噬细胞。伤区外活化的小胶质细胞仍可见于伤后4w。伊文思蓝不能通过正常的血脊髓屏障,脊髓挤压伤后即可进入脊髓,分布于损伤区及其邻近。至1w时脊髓内已无伊文思蓝,血脊髓屏障恢复正常。此现象与脊髓伤后活化的小胶质细胞长期存在的事实不一致。活化的小胶质细胞可损坏血脊髓屏障,血脊髓屏障在脊髓挤压伤后1w已恢复,而活化的小胶质细胞却可在伤后长期存在,说明单纯激活的小胶质细胞不足以破坏血脊髓屏障。     

用于中枢神经系统Waller变性研究的新型大鼠视神经夹伤模型

本实验旨在建立可用于中枢神经系统Waller变性研究的大鼠视神经(ON)损伤模型。成年SD大鼠12只,用夹持力为148g、镊端宽1mm的小号动脉阻血镊于球后2mm处夹持左侧视神经,致伤时间10s。术后随机分为两组(每组6只):一组动物术后立即于双侧上丘表面放置逆行荧光染料荧光金(FG),72h后处死。取视网膜铺片,ON冰冻连续切片。另一组动物术后72h常规灌注固定,取ON冰冻连续切片,分别行β-tubulin及NF-160免疫组化染色和HE染色。结果显示:左侧ON夹伤后3d,同侧视网膜内未见FG逆行标记的视网膜神经节细胞,ON夹伤部位形成一条宽达1mm的损伤带,ON基质连续,FG标记的神经纤维被阻断于损伤远侧,损伤远侧的β-tublin阳性纤维多已崩溃,NF-160阳性纤维数量较多,部分纤维末梢形成膨大的回缩球。上述结果表明ON夹伤后神经元轴突完全离断,中枢神经基质的连续性得以保持,损伤远侧段轴突发生典型的Waller变性,从而为中枢神经Waller变性及其药物治疗研究的筛选和评估提供了简单实用的实验模型。     

轴突损伤距离对成年金黄地鼠视网膜节细胞轴突在正常或预先溃变周围神经移

目的 系统研究轴突损伤的距离与轴突再生之间的关系,以及预先溃变周围神经移植物对视网膜节细胞（简称节细胞）轴突在不同距离损伤后再生的影响。方法 在距成年金黄地鼠眼球后极０．５、１．５、２、３或７ｍｍ处切断左侧视神经,视神经眶侧断端同正常（正常组）或预先溃变（溃变组）的周围神经移植物吻合。结果 移植术后２８ｄ,两组荧光金逆行标记的发出再生轴突的节细胞数量均随轴突损伤距离的增加而下降,并以０．５～３ｍｍ距离点之间下降最为明显。比较两组对应距离点,溃变组标记节细胞数量在２、３ｍｍ距离点较正常组显著增多。结论 成年金黄地鼠节细胞轴突损伤的距离,决定了发生再生轴突的节细胞数量。预先溃变周围神经移植物对节细胞轴突再生具有促进作用,并以轴突损伤距离为条件。     

成年大鼠脊髓背角神经元受损轴突在外周神经移植物中的再生速度

用抗神经丝(anti-neurofilament)单克隆抗体免疫组织化学技术,研究大鼠脊髓背角神经元受损轴突在外周神经移植物中的再生速度,发现脊髓背角神经元受损轴突在外周神经移植物中的最短初始延搁时间为4d;其后在一定时期内不断有再生神经纤维长入移植物,即不同神经纤维初始延搁时间不一致;再生轴突在移植物中的生长速度也不一致,最快再生速度为2.14mm/d。     

炎性痛大鼠脊髓背角内神经激肽B受体的动态变化

目的　观察神经激肽 B受体 (NK3)与大鼠脊髓内伤害性信息传递和调控的可能关系 .方法　用免疫组织化学技术观察完全弗氏佐剂 (CFA)诱发慢性炎性痛大鼠脊髓背角神经激肽 B受体的动态变化 .结果　炎症侧腰骶段脊髓背角 NKB受体样免疫反应结构的染色强度有明显升高 ,背角浅层尤为显著 .经时观察与图像分析结果表明 ,注射 CFA2 d后脊髓背角内免疫染色强度即开始升高 ,2 1d左右抵达高峰 ,2 8d后渐恢复至正常水平 .结论　 NKB受体可能参与炎性慢性痛状态下伤害性信息在脊髓水平的传递与整合过程炎性痛大鼠脊髓背角内神经激肽B受体的动态变…     

成年大鼠嗅神经鞘细胞纯化培养的研究

嗅神经鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)是目前用于神经再生研究较为理想的移植细胞,为了建立一种可以有效获得高纯度、高均一性的OECs培养方法,本实验采用2. 5月的大鼠嗅球为实验材料进行OECs培养,同时结合OECs的生物学特点在培养8d后,通过用硝酸纤维素膜吸附p75抗体,再对培养的OECs进行免疫亲和吸附和对成纤维细胞进行补体杀伤来纯化OECs, 在纯化后分别对培养2、4、6、8d的OECs进行p75免疫组化染色和纯度鉴定。实验结果发现,本研究采用的OECs纯化培养方法所获得OECs纯度在4个不同培养时间点都达到98%以上,说明此方法是一种高效率的纯化培养OECs的方法。