甲基硝基亚硝基胍对血管平滑肌细胞增殖的影响

以流式细胞光度术和甲基－３Ｈ胸腺嘧啶核苷（ｍｅｔｈｙｌ－３Ｈｔｈｙｍｉｄｉｎｅ，３Ｈ－ＴｄＲ）掺入的方法研究甲基硝基亚硝基胍（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｎ＇－ｎｉｔｒｏ－Ｎ－ｎｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ，ＭＮＮＧ）对血管平滑肌细胞周期各时相分布及ＤＮＡ合成的影响。ＭＮＮＧ处理细胞后显示，Ｓ期细胞数、细胞增殖指数（ＰＩ）和３Ｈ－ＴｄＲ按入率明显增加，２４小时后上述三项指标均达峰值。结果表明：ＭＮＮＧ可明显增强细胞的ＤＮＡ合成，显著促进细胞的分裂增殖。     

骨桥蛋白的制备及功能研究

目的　探讨骨桥蛋白 (OPN)对血管平滑肌细胞是否具有促黏附及趋化作用。方法　从大鼠源性血管平滑肌细胞的细胞培养基中纯化OPN ,制备家兔抗OPN多克隆抗体。用酶联免疫吸附及迁移分析方法测定OPN对血管平滑肌细胞的影响。结果　骨桥蛋白能够促进血管平滑肌细胞发生黏附 ,且其促黏附功能呈浓度依赖性。黏附率在实验开始后 90～ 1 2 0min区段达到最高。与对照相比 ,OPN刺激血管平滑肌细胞的迁移距离明显增加。结果　骨桥蛋白是血管平滑肌细胞的黏附、迁移活化因子     

骨桥蛋白诱导的黏着斑激酶信号途径参与大肠癌的侵袭与转移

目的 观察并分析大肠癌中骨桥蛋白（OPN）、整合素β3、黏着斑激酶（FAK）和磷脂酰肌醇激酶（PI3K）的表达特点、相互关系以及与大肠癌进展的相关性，试图揭示介导大肠癌侵袭的信号途径。方法 采用SABC免疫组织化学方法，检测这4种抗原在14例结肠癌组织和16例直肠癌组织以及相应的正常组织中的表达。结果 OPN在正常组织中主要表达于间质，而在大肠癌组织中主要分布于实质，且随Dukes分期的进展，实质中OPN的阳性染色颗粒逐渐增多，间质中却明显减少；整合素β3在正常组织中呈中等量表达，而在肿瘤组织中几乎检测不到其存在；FAK和PI3K在正常组织中基本无表达，而在肿瘤组织中其表达量明显升高，其表达水平与肿瘤Dukes分期密切相关，二者在肿瘤实质巾的表达模式与OPN具有明显的一致性。结论 OPN诱导的FAK和PI3K信号途径参与了大肠癌中晚期发生的侵袭与转移过程。     

丹参对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响

观察丹参对血管平滑肌细胞迁移的作用,并探讨其作用机理。本研究用羟基脲抑制血管平滑肌细胞增殖后,观察丹参对血管平滑肌细胞迁移、迁移相关基因表达及能量转换的影响。发现丹参对新生小牛血清诱导的血管平滑肌细胞迁移具有显著抑制作用;Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明丹参可抑制与细胞迁移相关的骨桥蛋白基因表达;肌酸激酶活性分析显示丹参可显著降低该酶活性。上述结果提示：丹参抑制血管平滑肌细胞迁移的作用与抑制骨桥蛋白基因表达和减缓能量转换有关。     

粘着斑激酶在一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用

为研究一氧化氮对血管平滑肌细胞凋亡的影响及粘着斑激酶在一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用 ,应用脂多糖诱导血管平滑肌细胞合成内源性一氧化氮或加入可释放外源性一氧化氮的硝普钠 ,进行流式细胞术、DNA凝胶电泳及Northernblot和Westernblot分析。结果发现 ,无论是血管平滑肌细胞合成和释放的内源性一氧化氮还是体外补充的外源性一氧化氮均可显著诱导血管平滑肌细胞凋亡 ,且其诱导血管平滑肌细胞凋亡的强度与培养基中的NO-2 含量呈正相关 ;证实在一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡的同时 ,伴随Bcl 2和粘着斑激酶基因表达活性的明显下降。提示粘着斑激酶可能参与一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡的信号转导过程 ,一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡可能与抑制Bcl 2和粘着斑激酶基因表达有关     

hhlim表达与心肌肥厚的关系

目的　探讨 hhlim蛋白在心肌肥厚发生中的地位和作用。方法　建立腹主动脉部分结扎心肌肥厚模型和运动性心肌肥厚模型 ,应用RT- PCR和 Western blot等方法观察 hhlim在生理性和病理性心肌肥厚发生中的作用。结果　运动组和腹主动脉结扎组动物的心脏重量、心系数、收缩压、舒张压和平均动脉压较对照组明显增大 ,说明模型建立是成功的。RT- PCR和 Western blot结果显示 ,对照组大鼠心肌细胞 hhlim表达较低 ,运动组和腹主动脉结扎组大鼠 hhlim表达明显增加 ,以腹主动脉结扎组增加最明显。结论　无论是运动性还是高血压性心肌肥厚 ,虽然其引发机制及信号转导通路不同 ,但都与激活 hhlim的表达有关。     

动脉粥样硬化斑块中平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因的表达

为了揭示动脉粥样硬化发生发展过程中血管平滑肌细胞增殖与凋亡的关系及其调节机制，采用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）染色法对家兔动脉粥样硬化斑块组织中平滑肌细胞的凋亡情况进行原位检测，并对原癌基因bcl-2、c-myc和P53在斑块组织中的表达活性进行North－ernblot分析。结果发现，在动脉粥样硬化斑块组织中有许多TUNEL染色阳性的平滑肌细胞，提示斑块组织中有平滑肌细胞凋亡发生：其斑块组织的DNA电泳图谱呈梯形状．符合细胞凋亡的特征性改变。Northern印迹分析表明，在动脉粥样硬化斑块组织中，原癌基因bck-2和P53的表达较正常组织增强，C－myc表达减低。提示这些基因的表达对动脉粥样硬化斑块组织中的平滑肌细胞凋亡起着重要的调节作用。     

碱性成纤维细胞成长因子、新生小牛血清和肝素对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响

为研究血管平滑肌细胞迁移及其影响因素，建立体外检测血管平滑肌细胞迁移的实验方法，并观察不同浓度的新生小牛血清、碱性成纤维细胞生长因子和肝素作用于血管平滑肌细胞不同时间后对其迁移的影响。结果发现，新生小牛血清和碱性成纤维细胞生长因子均可显著促进血管平滑肌细胞迁移（P＜0.001或P＜0.01）；肝素对新生小牛血清诱导的血管平滑肌细胞迁移产生显著抑制作用（P＜0．001）．三者的作用强度均与浓度呈正相关。提示碱性成纤维细胞生长因子对血管平滑肌细胞具有促增殖作用．而肝素具有抑制血管平滑肌细胞迁移的作用。     

一种快速建立大鼠动脉粥样硬化模型的实验方法

目的：建立一种快速制备大鼠动脉粥样硬化模型的实验方法。方法：用大剂量VD3及高脂饲料喂大鼠24d后,测量清甘油三酯、胆固醇含量,制作动脉切片进行形态学观察。结果：模型大鼠血清胆固醇及甘油三酯水平显著升高,动脉内膜细胞增生出现斑块状突出,中膜可见明显的钙化、平滑肌细胞增生及泡沫样细胞,相应的对照组未出现类似变化。结论：用高脂饲料及大剂量VD3可快速诱发大鼠动脉粥样硬化。