亚低温对颅脑创伤大鼠脑组织中β-分泌酶表达的影响

目的 研究亚低温对大鼠颅脑创伤(TBI)后β-分泌酶(BACE)的影响.方法 应用液压冲击装置制作大鼠颅脑创伤模型,实验分为假手术组、创伤常温组(37℃)和创伤亚低温组(32℃),每组12只大鼠.采用免疫组织化学和免疫荧光法检测BACE表达部位,采用RT - PCR和免疫印迹法研究BACE mRNA和蛋白表达水平.结果 与假手术组比较,创伤常温组大鼠脑组织BACE免疫阳性细胞数明显增多,BACE mRNA和蛋白表达上升(P＜0.05).但是,可以看出BACE在给予亚低温处理后的免疫阳性细胞数量以及蛋白水平显著低于常温处理组(P＜0.05),与假手术组比较差异无统计学意义.结论 亚低温可以通过降低颅脑创伤后BACE表达水平来减轻继发性脑损伤程度,起到神经保护作用.     

亚低温治疗对颅脑创伤后β-淀粉样蛋白表达影响的实验研究

目的 探讨亚低温治疗对大鼠颅脑创伤( TBI)后β-淀粉样蛋白(Aβ)基因和蛋白表达的影响.方法 将60只SD大鼠分为假手术组(n=20)、常温脑创伤组(37C,n=20)和亚低温脑创伤组(32℃,n =20).建立SD大鼠液压打击致颅脑创伤模型.亚低温脑创伤组在液压打击伤后立即接受持续6h的亚低温治疗.伤后24h处死大鼠并取海马组织行HE染色,用RT-PCR、蛋白免疫印迹( Western blot)和免疫组化法检测Aβ基因转录和蛋白的表达.结果 与假手术组比较,颅脑创伤后24hAβ免疫阳性细胞数明显增加(P＜0.01),其mRNA和蛋白表达分别升高1.58和1.76倍.与常温脑创伤组比较,亚低温组Aβ免疫阳性细胞数明显减少(P＜0.01),其mRNA和蛋白表达分别下降68％和64％.结论 亚低温治疗可降低颅脑创伤后Aβ基因转录和蛋白的上调表达,通过抑制Aβ的神经毒性来发挥神经保护作用,而亚低温与Aβ的确切关系还有待进一步研究.     

压力容积导管系统评价卒中易感性自发性高血压大鼠左心室功能的意义

目的 采用压力容积导管研究慢性压力超负荷对高血压大鼠左心室(LV)血流动力学的影响.方法 10只6月龄雄性卒中易感性自发性高血压大鼠(SHR-SPs)和10只同月龄雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠分别作为高血压组和对照组.对两组大鼠行在体LV血流动力学检测,大鼠麻醉后经右颈总动脉向LV内插入2F Millar压力容积导管(SPR-838),记录大鼠稳定状态和改变心脏前负荷时的压力-容积(P-V)变化.结果 与WKY大鼠比较,SHR-SPs LV收缩末压、LV收缩末容积和室内压最大上升速率( dP/dtmax)均增高,而射血分数、每搏输出量和心排血量均出现降低(P<0.05).在压力负荷的影响下,SHR-SPs LV收缩末压力容积曲线的斜率代偿性增高(P<0.05).SHR-SPs LV舒张末压、LV舒张末容积和LV压力衰退的时间常数均高于WKY大鼠(P<0.05),而室内压最大下降速率(-dP/dtmin)低于WKY大鼠(P<0.05).与WKY大鼠比较,SHR-SPs在体LV P-V曲线出现了明显的右移.结论 SHR-SPs发生了LV舒张功能障碍及收缩功能减低,并在此基础上伴有一定程度的LV扩张.压力容积导管能够客观准确地评价大鼠的心功能.     

一种适用于颅内外血管重建研究的大鼠慢性脑缺血模型

目的：检测结扎大鼠双侧颈内动脉及一侧椎动脉（3-VO）是否可以在保留颈外动脉的同时,造成大鼠慢性脑缺血。方法分别制造假手术对照组、双侧颈总动脉结扎组（2-VO）及3-VO组动物模型;于造模4周后行脑血流量测定;于第8周行Morris水迷宫实验测定大鼠的学习记忆能力;行为学实验结束后处死大鼠,观察大鼠海马CA1区细胞的形态学变化。结果脑血流测定结果显示与假手术[（47±8．797）ml·min^－1·100 g^－1]相比,2-VO[（24．30±8．999）ml·min^－1·100 g^－1]、3-VO[（9．870±2．208）ml·min^－1·100 g^－1]组脑血流量值均降低,差异有统计学意义（P＜0．01）。 Morris水迷宫实验显示,2-VO组[（14．78±7．84） s]、3-VO[（14．86±7．96）s]组第5天潜伏期与假手术组[（8．33±4．88）s]相比,时间较长,差异有统计学意义（P＜0．01）,但2-VO组与3-VO组相比,其潜伏期无明显差异;与假手术组[（37．20±9．21）s,（10．01±2．91）次]相比,2-VO组[（20．13±5．80）s,（6．60±3．19）次]、3-VO组[（20．05±5．76）s,（6．55±2．59）次]目标象限停留时间及穿越平台次数均显著减少,差异有统计学意义（P＜0．01）。2-VO、3-VO模型组海马CA1区有明显病理形态学改变。结论结扎双侧颈内动脉及一侧椎动脉可造成大鼠慢性脑缺血,并造成与2-VO相似的行为学表现。     

张氏三合止泻汤治疗慢性腹泻45例疗效观察

目的：探讨张氏三合止泻汤治疗慢性腹泻的临床疗效。方法：将90例慢性腹泻患者随机分为治疗组与对照组各45例,治疗组予张氏三合止泻汤治疗,对照组予诺氟沙星胶囊及枯草杆菌二联活茵肠溶胶囊治疗,两组均以14d为1个疗程,连续治疗2个疗程后比较两组临床疗效。结果：治疗组总有效率为93．3％,对照组总有效率为75．6％,治疗组优于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;结论：张氏三合止泻汤治疗慢性腹泻疗效可靠,可改善患者临床症状。     

SNCG真核表达载体构建及其在胶质瘤细胞中的稳定表达和影响

目的:利用神经突触核蛋白-γ(SNCG)真核表达载体,构建人胶质瘤细胞株U373稳定过表达SNCG模型,初步探讨过表达SNCG对U373细胞的影响。方法:应用RT-PCR法扩增SNCG基因,将PCR产物插入至真核表达载体pIRES2-EGFP中。通过EcoR I、BamH I双酶切及测序鉴定后转染至人神经胶质瘤细胞U373,G418筛选建立SNCG稳定转染的U373细胞系。运用实时定量PCR(real-time RT-PCR)检测转染后SNCG表达,流式细胞术(FCM)检测SNCG对细胞周期的影响。结果:构建pIRES2-EGFP-SNCG真核表达载体,建立稳定转染SNCG的U373细胞系。与U373/neo细胞相比,U373/SNCG细胞SNCG mRNA表达上调17倍;经紫杉醇(PTX)处理后,U373/SNCG细胞G2/M比例(49±3.6)%较U373/neo细胞(66±1.7)%下降17%(P<0.05)。结论:成功构建人SNCG真核表达载体,并在U373细胞中稳定表达,初步证实过表达SNCG可降低抗微管药物诱导的U373细胞有丝分裂期阻滞,为进一步体外研究SNCG在神经胶质瘤中的功能奠定了基础。     

RIPK3过表达对mTOR及其相关基因转录的调控作用

目的探索受体相互作用蛋白激酶3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)的下游信号通路。方法向实验组SH-SY5Y细胞内转染pCMV6-RIPK3质粒上调细胞内RIPK3的表达水平,对照组细胞转染相应的空载质粒。通过Western blot检测细胞内RIPK3的表达水平。3-(4,5-二甲基噻唑)[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl),MTT]实验获得2组细胞增殖曲线确定外源性RIPK3在细胞内具有的生物学活性。通过RNAseq检测2组细胞基因转录差异,并在生物通路分析(ingenuity pathway analysis,IPA)数据库中进行数据分析,获得RIPK3的下游信号通路及其中的关键分子哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)。采用微滴式数字化PCR(droplet digital PCR,ddPCR)对mTOR转录水平的差异进行验证。结果质粒DNA整合到细胞基因组内,Western blot提示外源性RIPK3在实验组细胞内稳定表达,MTT结果证明其在细胞内能够抑制细胞增殖。RNAseq及IPA分析结果提示过表达RIPK3能够导致mTOR转录水平发生上调,并对其下游的基因,包括固醇反应结合蛋白(sterol-response binding proteins,SREBPs)、p70核糖体S6蛋白激酶(p70ribosomal S6protein kinases,S6K)、真核生物起始因子4E结合蛋白(eukaryotic initiation factor 4E-binding proteins,4E-BPs)和ULK(unc-51-like kinase)激酶复合体的转录具有明显的调节作用。ddPCR实验结果中mTOR表达改变趋势与RNAseq基本一致。结论 RIPK3能够调控mTOR及其下游信号通路中SREBPs、S6K、4E-BPs和ULK基因转录水平,进而在神经系统生长发育和疾病进展中发挥重要作用。     

利奈唑胺治疗14例神经外科术后耐甲氧西林葡萄球菌颅内感染临床分析

目的 初步评价利奈唑胺治疗神经外科术后患者耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)颅内感染的临床疗效及安全性.方法 回顾性总结2009年3月至2011年11月本院神经重症监护病房(NICU)及亚低温治疗中心使用利奈唑胺治疗14例MRS颅内感染患者的资料.于治疗前及治疗7d、14d取血及脑脊液(CSF)培养,进行实验室、病原学和细菌学检查,评估利奈唑胺的临床疗效及不良反应.结果 给予MRS颅内感染患者静脉滴注利奈唑胺治疗14 d后,患者临床症状和CSF化验指标显著好转；CSF葡萄糖(mmol/L)由1.00(0.65)升至3.15(1.60),CSF蛋白定量(mg/L)由2238.50(2072.50)降至606.50(217.30),CSF白细胞数(×106/L)由920.00(1587.50)降至30.00(40.00),CSF中性粒细胞比例＞0.20者由14例减少至1例；血清中降钙素原(PCT)水平(μg/L)明显降低并恢复正常[由0.65(1.16)降至0.08(0.09),均P＜0.01].临床总有效率为85.7％(12/14),CSF细菌清除率达100％.给予利奈唑胺期间,患者未发生明显不良反应.结论 利奈唑胺能够有效控制MRS颅内感染和缓解炎症反应,疗效明确,具有良好的安全性.