ts-SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析

Objective To study the mechanism of temperature control proliferation of the stem cells modified by ts - SV40LT gene for establishing a basement on stem cells transplantation into injured brain area during hypothermia treatment. Methods After transfecting plasmid containing temperature - sensitive simian virus 40 large T - antigen (ts - SV40LT) into umbilical cord mesenchymal stem cells (UCMSCs), PCR method was used to detect gene integration. Then we cultured these UCMSCs modified by ts - SV40LT in 33℃ and 37℃ incubators respectively. Immumofluorescence was used to detect proliferating cell nuclear antigen (PCNA)activity, telomerase activation analysis by PCR- ELISA telomerase detect kit, and cell cycle by flow cytometry.Then cell cycle regulating proteins, including Cyclin D1, CyclinE, CDK2, CDK4, CDK6, P16 and P21, were detected by westerm blot. The expression of nestin, neurone specific enolase (NSE) and glial fibrillary acidic protein(GFAP) were detected by immunofluorescence method. Results The ts - SV40LT gene was integrated into UCMSCs successfully. When cultured at 33℃ incubator, the new cell line displayed high proliferation activity, as well as its telomerase activation, highly expressed Cyclin D1, CyclinE, CDK2, CDK4 and CDK6, and lowly expressed P16 and P21, meanwhile, highly nestin, lowly NSE and GFAP. But when cultured at 37℃ incubator, the cell line showed a completely converse profile. Conclusion The proliferation of stem cells can be regulated by temperature through effective ts -SV40LT gene transfection, and that supports the clinical application of stem cells transplantation into injured brain area during hypothermia treatment.     

早期腰大池引流术治疗急性颅脑创伤致外伤性脑脊液漏

目的探讨早期腰大池引流术治疗急性颅脑创伤致外伤性脑脊液漏的临床疗效。方法外伤性脑脊液漏患者60例,随机分为早期腰大池引流组(观察组)和保守治疗组(对照组),每组30例,观察组除住院后24h内行腰大池引流术外,其余治疗措施同对照组。观察比较2组脑脊液漏停止时间、2周内临床治愈率和颅内感染率。结果脑脊液漏停止时间观察组为(5.0±0.9)d,对照组为(10.0±1.8)d,观察组明显早于对照组(P<0.05)。2周内观察组30例(100.0%)均临床治愈,对照组临床治愈23例(76.7%),观察组2周内治愈率明显高于对照组(P<0.05)。观察组未出现颅内感染,对照组4例(13.3%)出现颅内感染,观察组颅内感染率明显低于对照组(P<0.05)。结论早期腰大池引流术治疗外伤性脑脊液漏能明显缩短脑脊液漏时间,提高2周内脑脊液漏的临床治愈率并降低颅内感染率。     

针刺优化方案治疗中风后偏瘫的临床研究

目的 观察针刺优化方案治疗中风后偏瘫患者神经功能缺损的变化,寻求治疗中风偏瘫的最佳方案.方法 将90例中风患者按入院先后顺序随机均分为针刺组、康复组、针刺+康复组.3组患者均给予常规基础药物治疗;针刺组采用优化醒脑开窍方案,针刺内关、人中(3d后改印堂)、三阴交、极泉、尺泽、委中、风池、完骨、天柱穴,并随证加减,每次30 min;康复组进行康复训练,每次45 min;针刺+康复组在醒脑开窍针法治疗的同时加康复治疗.各组每周连续治疗5次,共治疗4周.于治疗前后进行神经功能缺损程度评分(NDS),并比较各组神经功能缺损疗效.结果 3组治疗后NDS评分均较治疗前明显降低(均P<0.01);其中针刺组和针刺+康复组NDS评分(分)下降程度较康复组更明显(6.13±3.18、6.13±4.03比8.77±3.35,均P<0.05),而针刺组与针刺+康复组间无明显差异.治疗后针刺组和针刺+康复组神经功能缺损总有效率均明显高于康复组(100.0%、100.0%比93.3%,均P<0.05),而针刺组与针刺+康复组间无明显差异.结论 针刺法、康复疗法和针刺结合康复疗法均可明显改善中风后偏瘫的临床症状,减轻神经功能缺损,改善日常生活能力,且针刺法和针刺结合康复疗法的疗效优于单纯康复疗法.     

七叶皂苷钠对重型颅脑创伤患者脑脊液肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-6表达的影响

目的 观察七叶皂苷钠对重型颅脑创伤患者脑脊液肿瘤坏死因子-α (TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响,探讨其临床意义.方法 将73例重型颅脑创伤患者按入院先后顺序分为对照组(36例)及治疗组(37例).对照组采用西医常规治疗,治疗组在西医治疗的基础上加用七叶皂苷钠每日20 mg静脉滴注,连续治疗10d.采用放射免疫法测定两组患者不同时间点脑脊液中TNF-α及IL-6的含量,同时监测患者颅内压(ICP)变化,并在伤后6个月根据格拉斯哥预后评分(G0S)判断预后.结果 治疗组治疗前及伤后1d脑脊液TNF-α及IL-6水平与对照组无明显差异(均P＞ 0.05),伤后3、7及14d均较对照组明显降低(P＜0.05或P＜0.01).在治疗前及伤后1d,治疗组ICP与对照组比较无明显差异(均P＞ 0.05),在伤后3、7、14 d均较对照组明显降低(均P＜ 0.01);治疗组病死率低于对照组(27.03％比38.89％,P＜0.05),预后改善明显.结论 七叶皂苷钠可明显降低重型颅脑创伤患者脑脊液TNF-α及IL-6表达水平,降低ICP,促进神经功能恢复,改善预后.     

凋亡抑制剂zVAD对脑梗死小鼠外周血白细胞端粒长度的影响

目的探讨凋亡抑制剂z VAD对脑梗死小鼠外周血白细胞端粒长度的影响。方法将80只雄性C57BL/6小鼠,随机分为10组:即Model组(3组共24只)、z VAD组(3组共24只)、Sham组(3组共24只)和Control组(8只)。Model组与z VAD组均采用线栓法构建小鼠大脑中动脉栓塞模型,1 h后完成再灌注。再灌注后z VAD组立即腹腔注射浓度为2.3mmol/L的z VAD 10ml/kg进行干预。Sham组则暴露颈动脉后缝合皮肤进行假手术操作。Control组不进行任何操作。造模后,分别于不同时间点对各组小鼠进行改良神经功能损伤程度评分(m NSS),评分后立即取血,提取外周血基因组DNA,real-time PCR法检测相对端粒长度。Control组则选取再灌注后72 h时间点,进行同期同质的评分与测量。结果术后48 h和72 h,z VAD组的m NSS评分均明显低于相应的Model组,但仍高于相应的Sham组(P0.05)。术后72 h,z VAD组相对端粒长度明显长于Model组(P0.05),且基本与Sham组和Control组的长度持平(P0.05)。结论凋亡抑制剂z VAD可减缓脑梗死小鼠外周血白细胞端粒长度缩短,并对神经功能损伤起到一定的保护作用。     

早期亚低温结合后期高压氧治疗重度颅脑创伤的疗效分析

目的:评估早期亚低温结合后期高压氧治疗重度颅脑创伤的疗效。方法:157例急性重度颅脑创伤患者,按住院先后顺序随机分为早期亚低温治疗组(亚低温组,54例)、早期亚低温结合后期高压氧组(亚低温加高压氧组,48例)和常规治疗组(55例)。治疗后3个月根据格拉斯哥预后评分(GOS)标准判定疗效。对于除植物生存和死亡以外的患者,采用Borthel评估患者的日常生活活动能力(ADL)。结果:亚低温加高压氧组的病死率低于常规治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。3组的恢复良好率差异均有统计学意义(P<0.05),亚低温加高压氧组良好率最高。亚低温组和亚低温加高压氧组的ADL评分高于常规治疗组,亚低温加高压氧组的ADL评分高于亚低温组,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论:早期应用亚低温治疗急性重型颅脑创伤可降低患者病死率,同时后期给予高压氧治疗可以提高患者恢复良好率,二者结合的疗法是一种较好的颅脑外伤综合治疗措施。     

人工仿生脊髓导管的制备及性能分析

BACKGROUND: The traditional method of preparing tissue-engineered conduit has the defects of complex shape manufacturing and uncontrollable inner space structure, which cannot meet the requirements of some micro-catheters.     

MRI-三维重建动态测量颅脑创伤模型大鼠的空腔变化

BACKGROUND: Currently, morphological observations of brain cavity after traumatic brain injury (TBI) via cadavers or animal specimen are difficult to obtain dynamic changes.     

脑缺血再灌注后皮层微血管超微结构的实验研究

目的研究急性脑缺血再灌注后皮层微血管超微结构的动态变化。方法将40只雄性大鼠随机分为假手术组(20只)和脑缺血再灌注组(20只)。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血1h后再灌注1、3、12、72h取材,复合甲基丙烯酸甲酯脑微血管铸型,制作脑微血管标本,扫描电镜观察正常大鼠脑皮层微血管和急性脑损伤后脑皮层微血管形态学的改变。结果与假手术组相比,脑缺血再灌注后出现皮质的血管受损迹象,随着时间推移,铸型血管可呈"豆芽"状甚至出现完全断裂产生"烛泪"状血管铸型断端,最后,进一步形成皮层无血管区。结论急性脑缺血再灌注后脑皮层微血管结构改变是导致脑微循环障碍的重要原因。