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小鼠抗人Nanog多克隆抗体的制备及其鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
目的用基因免疫方法制备小鼠抗人Nanog多克隆抗体并进行鉴定。方法应用Accelrys软件分析Nanog抗原表位,选择其中免疫原性较强的抗原表位（A16-V101）,从Nanog cDNA全长质粒中扩增其cDNA（258bp）序列,克隆到pBQAP-TT构建基因免疫载体,鉴定正确后与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-Fh31。同时免疫小鼠,12周后用ELISA方法检测血清抗体滴度,Western blot方法鉴定抗体对人肾组织的特异性。同时将Nanog-AAV2病毒转染到HKC细胞,免疫荧光定位Nanog在细胞的表达。结果成功构建了Nanog基因免疫载体,经酶切及序列分析鉴定完全正确。ELISA结果显示抗体滴度为1：32000。Western blot结果显示小鼠抗Nanog多克隆抗体识别人肾组织34kD的Nanog蛋白。免疫荧光结果表明转染的Nanog基因主要表达在HKC细胞细胞核。结论用基因免疫的方法可以成功制备高效价和高特异性抗Nanog多克隆抗体。 相似文献
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目的 探讨人基质金属蛋白酶组织抑制物-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）对肾脏器官衰老过程血管生成的影响。方法 对3、12、24月龄人TIMP-1转基因小鼠和野生型小鼠肾组织石蜡切片行PASM染色,观察肾组织内微血管密度变化;Western免疫印迹检测TIMP-1、TIMP-2、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2、MMP-9、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、Ⅲ型和Ⅳ型胶原蛋白质表达;明胶酶谱和反向酶谱分别检测明胶酶和TIMP-1的活性。结果 24月龄时与野生型小鼠相比,转基因小鼠肾小球和肾小管周围的微血管密度降低（P〈0.05）;TIMP-1、Ⅲ型和Ⅳ型胶原蛋白质表达增多（P〈0.05）,而MMP-2、MMP-9和VEGF的表达降低（P〈0.05）;明胶酶谱和反向酶谱结果显示,明胶酶的活性下调（P〈0.05）,而TIMP-1的活性则上调（P〈0.05）。结论 TIMP-1可能通过影响血管生成而促进肾脏器官衰老。
基金 国家重点基础研究发展规划（973项目,2007CB507403）;; 国家自然科学基金创新群体科学基金（30121005） 相似文献
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