纤维蛋白沉积对老年急性肺损伤大鼠肺组织内皮细胞功能的影响

目的 探讨纤维蛋白沉积对不同鼠龄大鼠肺组织血管内皮细胞功能的影响.方法 青年及老年大鼠均随机分为4组,对照组（NC）腹腔注射生理盐水;脂多糖组（L）腹腔注射脂多糖;氨甲环酸组（LT）注射脂多糖加氨甲环酸;尿激酶组（LTU）注射脂多糖及氨甲环酸加尿激酶.应用免疫组化分析纤维蛋白沉积;应用Western blot和Northern blot分别检测肺组织血栓调节蛋白（TM）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、纤溶酶原激活剂抑制物-1（PAI-1）的表达.结果 （1）正常青年和老年大鼠肺组织内均无纤维蛋白沉积,脂多糖刺激后纤维蛋白沉积增多,加用氨甲环酸纤维蛋白沉积更加明显（P＜0.01）,应用尿激酶后纤维蛋白沉积明显减轻（P＜0.05）;老年大鼠L组、LT组和LTU组均比相同干预组的青年大鼠肺组织纤维蛋白沉积明显（P＜0.05）.（2）青年和老年大鼠给与脂多糖刺激后,ICAM-1和PAI-1表达明显上调（P＜0.05）,TM表达显著下降（P＜0.01）;加用氨甲环酸后ICAM-1和PAI-1表达上调更加明显（P＜0.01）,TM几乎无表达;给予尿激酶处理后,ICAM-1和PAI-1表达与LT组比较明显下调（P＜0.05）,TM表达增多（P＜0.05）;老年大鼠L组、LT组和LTU组Ⅰ CAM-1和PAI-1的表达均较青年大鼠相同干预组显著增多（P＜0.05）,TM表达则显著减少.（3）经纤维蛋白沉积量校正后,老年大鼠肺组织ICAM-1和PAI-1的表达量仍显著高于青年大鼠（P＜0.05）.结论 增龄能够促进脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠肺组织纤维蛋白沉积,增强纤维蛋白的内皮细胞损伤作用.     

抑制细胞间通讯功能可加速人成纤维细胞的衰老

目的研究间隙连接蛋白connexin43在人成纤维细胞衰老过程中的调节作用。方法设计并合成针对人connexin43的双链RNA(siRNA),抑制人二倍体成纤维细胞WI-38细胞的connexin43表达和细胞间通讯功能,观察对其衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色阳性率、细胞增殖能力、细胞周期调节蛋白P27、P21表达水平等衰老表型的影响。结果我们合成的siRNA-cx43可高效、特异的抑制connexin43 mRNA和蛋白质表达及细胞间通讯功能。转染WI-38细胞后,细胞增殖能力降低、细胞SA-β-gal染色阳性率(75.32±5.17)较对照组(32.48±3.94)和转染siRNA-con组(37.81±4.1 2)细胞升高(P<0.05),P27、P21表达增加,转染siRNA-cx43的WI-38细胞增殖能力显著降低,细胞变扁平、肥大,细胞SA-β-gal染色阳性率达100%,细胞提前出现衰老。结论间隙连接蛋白connexin43对WI-38细胞的衰老进程有重要的调节作用,其表达减少和细胞间通讯功能降低,可以促进WI-38细胞衰老进程。     

肾脏病的临床循证教学分析

目的 探讨循证医学在肾脏病临床教学中的应用.方法 分析总结肾脏病循证医学教学的可行性及运作方法.结果 肾脏病循证医学教学可对医学生及进修医师进行全方位的训练和指导,使患者受益.结论 结合各学科特点将循证医学思想融入临床实践与教学中,将有助于我国整体临床实践及教学的合理和健康发展.     

尿酸通过诱导线粒体钙稳态失衡介导内皮细胞炎症反应

目的探讨线粒体钙稳态失衡在高尿酸（UA）导致的血管内皮细胞炎症中的病理生理机制。方法采用Fluo-3 AM及Rhod-2 AM分别对UA刺激后的人脐静脉内皮细胞（HUVEC-C）进行胞质钙离子浓度（[Ca2＋]i）和线粒体钙离子浓度（[Ca2＋]mito）的特异性染色;RT-PCR法检测其C反应蛋白（CRP）和细胞间黏附分子1（ICAM-1）的mRNA表达变化;Western blot检测ICAM-1的蛋白变化;ELISA法检测其培养液上清白细胞介素6（IL-6）的释放变化情况。结果HUVEC-C经600μmol/L的UA刺激后,其[Ca2＋]i未见明显变化,而[Ca2＋]mito呈波浪式升高（P〈0.05）,并在24 h内保持较高的状态;CRP、ICAM-1、IL-6均在UA刺激后升高（P〈0.05）。结论UA可导致内皮细胞炎症反应,[Ca2＋]mito的升高与之相关,提示线粒体钙稳态失衡在UA导致的内皮炎症反应中起一定的介导作用。     

人尿酸转运蛋白基因的克隆与序列分析

目的获得编码人尿酸转运蛋白(humanuric acid transporter，hUAT)的全长基因。方法从人肾小管上皮细胞株(HK-2)中提取总RNA．根据Genbank中hUAT基因序列设计特异性引物，然后通过RT—PCR法扩增目的片段。所得目的片段酶切后与载体pEGFP—CI连接．经酶切及序列分析鉴定。结果成功扩增出980bp的hUAT全长基因，克隆到pEGFP—CI载体后酶切分析结果与预期一致，序列分析结果与Genbank上公布的hUAT序列完全一致。结论成功克隆出hUAT基因．序列分析结果完全正确，为对该基因进一步研究奠定了基础。     

IgA肾病内皮源型一氧化氮合酶基因多态性分析

目的 研究内皮型NO合酶（eNOS）基因多态性与IgA肾病的关系。方法 采用聚合酶链反应法对北方地区（汉族：北京，天津，河北）296例IgA患者、310例正常对照两组人群的eNOS基因第4内含子的可变串联重复序列多态性（vNTR）4a／b多态性进行基因型分析，比较两组间基因频率、等位基因频率分布有无统计学差异。结果 两组患者的eNOS基因的可变串联复序列表现为eNOS4a／4a，eNOS4b／4b，eNOS4a／4b3种基因型。IgA肾病患者组和正常对照组之间的eNOS基因4a／b的基因型和等位基因频率无显著性差异。结论 eNOS基因内含子4VNTR多态性与IgA肾病血管病变的发生无明显关联。该多态性在IgA肾病遗传因素中的地位尚难以确定，其参与IgA肾病微血管病变的作用可能存在种族或地域异质性。     

缬沙坦对肾单位不同节段衰老相关基因表达的影响

目的：观察长期抑制肾素-血管紧张素系统(RAS)对老龄大鼠肾单位不同节段细胞外基质代谢相关调控基因表达的影响。方法：应用自动激光微分离方法分离大鼠肾脏的肾小球及肾小管,观察转化生长因子(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)的基因表达变化。15月龄大鼠口服缬沙坦(25mg／kg)治疗至24月龄,与3月龄及24月龄正常大鼠对比观察TGF-β1及FN基因表达的变化。结果:24月龄大鼠肾小球及肾小管的TGF-β1及FN基因表达较3月龄大鼠明显增加。缬沙坦治疗对老龄大鼠肾小球的TGF-β1 mRNA表达无明显影响,但明显下调了肾小管的TGF-β1、肾小球及肾小管的FN mRNA表达。结论:TGF-β1及FN基因表达变化涉及大鼠肾脏肾小球、肾小管的衰老相关性改变,肾脏局部RAS激活在肾单位的不同节段对上述基因表达的调控可能存在着不同作用。     

中国北京市区健康人群白细胞介素6基因启动子区基因的多态性及与亚裔和高加索人群的比较

目的:动脉硬化、老年痴呆、糖尿病、骨质疏松等均有循环中炎症介质持续升高的表现。观察北京市区健康人循环中炎症介质白细胞介素6启动子区基因多态性与循环中白细胞介素6、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原的关系,并评价白细胞介素6基因多态性的种族差异。方法:采用随机整群抽样的方法于2003-03/2004-03筛选中国北京地区30岁以上自我评价健康的汉族居民662人,男365人,女297人。通过身体检查及血液学及血生化学检测,了解调查对象健康状况;测定入选人群白细胞介素6、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原;检测白细胞介素6启动子区174(G/C),597(G/A),572(G/C)基因多态性,观察其与循环中炎症指标白细胞介素6、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原的关系。结果:按意向处理分析,进入结果分析662人。①入选健康成人662人,174位均为GG型,未发现GC和CC型;597位GG型占99.24%,仅有5人为GA型,未发现CC型;572位存在GG,CC,GC3种基因型,G和C等位基因频率分别为0.22和0.78,基因型和等位基因频率均无性别差异。②G等位基因(GG+GC型)携带者循环中白细胞介素6、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原水平明显高于CC基因型犤(2.91±2.21)ng/L,(2.43±2.31)mg/L,(3.05±0.71)g/L;(2.44±1.47)ng/L,(1.41±1.57)mg/L,(2.70±0.64)g/L,P=0.03,0.01,0.01犦。③中国北京地区汉族人群白细胞介素6启动子区174(G/C),597(G/A)、572(G/C)的基因型分布与日本、韩国亚裔人群相似(174位和597位几乎均为GG型,572位G等位基因频率分别为0.28,0.23,0.25,P>0.05),而明显不同于德国、瑞典高加索人群(174位存在GG,GC,CC,597位存在GG,GA,AA3种基因型,572位G等位基因频率分别为0.95,0.93,P<0.01)。结论:白细胞介素6启动子区174(G/C),597(G/A),572(G/C)基因多态性存在种族差异,亚裔人群不存在174(G/C),597(G/A)基因多态性,572位基因型频率也明显不同于高加索人群。572(G/C)位存在基因多态性并影响循环中白细胞介素6的表达从而影响机体炎症状态,G等位基因为少见基因,其携带者白细胞介素6和超敏C反应蛋白水平明显高于CC型个体。     

介导血管紧张素Ⅱ上调近端肾小管上皮细胞金属蛋白酶组织抑制剂1表达的信号分子研究

目的 研究信号转导子和转录激活子(STAT)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)过程中的作用。方法 采用凝胶阻滞电泳(EMSA)测定DNA-STAT结合活性变化。Supershift和Western印迹分析STAT蛋白的组成。激光扫描共聚焦显微镜观察活化STAT蛋白的核转位。采用RT-PCR方法检测HK-2细胞AT1和AT2受体的表达。Northern印迹检测TIMP-1的mRNA表达。结果 AngⅡ能够以剂量和时间依赖方式激活STAT1和STAT3。AngⅡ刺激后TIMP-1 mRNA的表达显著增加。HK-2细胞可表达AT1和AT2两种受体。AngⅡ激活STAT蛋白和上调TIMP-1的作用能被AT1受体拮抗剂阻断，而不能被AT2受体拮抗剂阻断。结论 AngⅡ通过激活近端肾小管上皮细胞的AT1受体来活化STAT1和STAT3信号分子，并可以进而上调TIMP-1的mRNA表达。