白果注射液注射足三里对卵蛋白(OVA)诱导哮喘小鼠的作用

[目的]检验白果注射液注射足三里对哮喘的治疗作用.[方法]用白果注射液对哮喘小鼠模型在足三里注射,检测肺质量白细胞.嗜红细胞以及IgE、白细胞介素（IL-4、IL-5、IL-13）等指标.[结果]白果注射液注射足三里显著降低哮喘小鼠模型肺质量,同时有效降低肺组织嗜红细胞和白细胞总数.降低血清BALF中IgE、IL-4、IL-5及IL-1 3的水平.[结论]实验结果提示白果注射液注射足三里时哮喘有治疗作用,可考虑临床应用.     

增龄对纤维蛋白急性肺损伤大鼠肺组织单核巨噬细胞趋化因子-1表达的影响

目的研究增龄对纤维蛋白诱导急性肺损伤大鼠肺组织单核巨噬细胞趋化因子-1 (MCP-1)表达的影响,探讨老年大鼠对炎性刺激易感的可能机制。方法青年及老年大鼠均根据腹腔注射不同的药物随机分为4组:对照组、脂多糖组、氨甲环酸组、肝素组。应用免疫组化分析纤维蛋白沉积;应用Western blot和Northern blot方法分别检测肺组织MCP-1蛋白质和基因表达。结果(1)青年和老年对照组大鼠肺组织内均无纤维蛋白沉积,老年大鼠脂多糖组、氨甲环酸组和肝素组均比青年大鼠相同干预组纤维蛋白沉积明显,差别均有统计学意义(18．5％±3．1％对12．3％±2．1％,32．5％±5．4％对24．1％±4．5％和20．8％±3．6％对12．6％±1．8％,均为P<0．05);(2)青年和老年对照组大鼠肺组织内几乎无MCP-1表达,老年大鼠脂多糖组、氨甲环酸组和肝素组的MCP-1表达均较青年大鼠相同干预组上调,差异有统计学意义(0．40±0．02对0．20±0．03,0．60±0．05对0．25±0．04和0．30±0．01对0．20±0．04,均为P<0．05);(3)经纤维蛋白沉积增加量校正后,老年氨甲环酸组大鼠肺组织MCP-1的表达量仍显著高于青年大鼠氨甲环酸组(P<0．05)。结论纤维蛋白可上调急性肺损伤肺组织MCP-1基因及蛋白质表达,促进肺组织炎症反应;增龄能够促进肺组织纤维蛋白沉积,增强其上调肺组织MCP-1表达的作用。     

人尿酸转运蛋白基因的克隆与序列分析

目的 获得编码人尿酸转运蛋白(humanuricacidtransporter,hUAT)的全长基因。方法 从人肾小管上皮细胞株(HK-2)中提取总RNA,根据Genbank中hUAT基因序列设计特异性引物,然后通过RT-PCR法扩增目的片段。所得目的片段酶切后与载体pEGFP-C1连接,经酶切及序列分析鉴定。结果 成功扩增出980 bp的hUAT全长基因,克隆到pEGFP-C1载体后酶切分析结果与预期一致,序列分析结果与Genbank上公布的hUAT序列完全一致。结论 成功克隆出hUAT基因,序列分析结果完全正确,为对该基因进一步研究奠定了基础。     

不同水平抑制肾素-血管紧张素系统对大鼠肾脏增龄性改变的影响

目的 研究长期抑制RAS对老龄大鼠肾脏的保护作用。方法 观察福辛普利纳及缬沙坦对老年大鼠肾脏病理、纤维连接蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)及转化生长因子(TGFβ—1)基因表达的影响。结果 两组治疗均可降低老年大鼠的尿蛋白，减少肾小球细胞外基质(ECM)面积、减轻肾小球硬化及肾小管间质损害；下调肾脏FN、PAI-1的基因表达，对TGFβ—1 mRNA的表达无影响，福辛普利纳与缬沙坦治疗效果无明显差异。结论 长期抑制RAS可减轻老年肾损害，血管紧张素转换酶抑制剂(ACEl)与血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ATlRA)具有相同的作用。     

排毒固肾汤结肠透析对大鼠急性肾衰竭的防治作用

目的:观察排毒固肾汤结肠透析对大鼠急性肾衰竭的防治作用。方法:雄性SD大鼠随机分为5组(10只/组):正常组,模型组,排毒固肾汤结肠透析组,碳酸氢盐结肠透析组和排毒固肾汤保留灌肠组。甘油肌肉注射造模,3 d后检测血肌酐、尿素氮、胱抑素C等,行肾脏病理检查。结果:模型组大鼠血肌酐、尿素氮、胱抑素C较正常组明显升高,出现肾小管损伤;3个治疗组大鼠胱抑素C较模型组均明显下降(P<0.05);排毒固肾汤结肠透析组血肌酐、尿素氮较模型组降低(P<0.05),肾小管损伤明显减轻;碳酸氢盐结肠透析组和排毒固肾汤保留灌肠组血肌酐、尿素氮较模型组降低,差异无统计学意义。结论:排毒固肾汤结肠透析对甘油诱导大鼠急性肾衰竭具有防治作用。     

miR-34a调控高糖环境中HK-2细胞增殖作用的初步研究

目的探讨miR-34a对高糖环境中HK-2细胞增殖作用的影响。方法以miR-34a模拟物和miR-34a抑制剂分别转染HK-2细胞,定量PCR检测miR-34a的表达变化,MTT检测细胞增殖活性;Western印迹检测周期相关蛋白CyclinD1和CyclinE的表达变化。生物信息学分析miR-34a的靶基因,对其中的增殖相关转录因子E2F3进行双荧光素酶验证。结果 miR-34a模拟物组miR-34a表达显著上调（P〈0.05）,miR-34a抑制剂组miR-34a显著下调（P〈0.05）。与对照组相比,miR-34a模拟物显著抑制高糖环境中HK-2细胞的增殖作用（P〈0.05）,CyclinD1和CyclinE表达下调（P〈0.05）,miR-34a抑制剂组显著上调高糖环境中HK-2细胞的增殖作用,CyclinD1和CyclinE表达上调（P〈0.05）。TargetScan在线分析软件显示,增殖相关转录因子E2F3可能是miR-34a潜在的靶基因,双荧光素酶分析结果显示E2F3是miR-34a的直接靶基因。结论 miR-34a可以调控高糖环境中HK-2的细胞增殖,其机制可能是通过直接抑制E2F3基因的表达而实现。     

抗人有机阴离子转运蛋白4多克隆抗体的制备及其在肾脏的定位研究

目的:拟采用一套新的基因免疫系统制备高特异性和高效价的小鼠抗有机阴离子转运蛋白4(hOAT4)多克隆抗体,并用该抗体对hOAT4在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究.方法:应用Accelrys软件分析hOAT4抗原表位,选择其中免疫源性较强的细胞内表位(E278～R345),从人肾组织总RNA中用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增其204 bp的cDNA序列,克隆到pBQAP-OVA构建基因免疫载体,鉴定正确后与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-FlT3L同时免疫小鼠,5周后取血清抗体,ELISA方法测定抗体滴度,人肾组织Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达.结果:成功构建基因免疫载体pBQAP-OVA-hOAT4,经酶切及序列分析鉴定完全正确.ELISA方法测得抗体滴度高达1∶3 000,该抗体识别人肾皮质膜蛋白和肾小管刷状缘蛋白65 kD糖基化的hOAT4.人肾组织免疫组化结果提示该抗体识别定位在近段肾小管上皮细胞刷状缘的hOAT4.结论:用基因免疫方法可以成功制备高效价和高特异性抗hOAT4多克隆抗体.     

衰老大鼠肾脏肾素-血管紧张素系统的变化及缬沙坦的调控作用

为观察老年肾脏肾素-血管紧张素系统（RAS）随增龄的改变及长期应用血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂（AT1RA）后的影响，将雄性Wistar大鼠分为青年组、老年组及缬沙坦治疗组，测定肾素、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平、AngⅡ受体AT1αRmRNA、AT1bRmRNA及AT2RmRNA的表达。结果发现，与青年组比较，老年大鼠血浆肾素、AngⅡ水平明显下降，肾组织AngⅡ则明显升高，应用缬沙坦后肾组织AngⅡ水平进一步升高；老年大鼠肾脏AT1αRmRNA、AT1bRmRNA表达下调，AT2RmRNA表达则上调，应用缬沙坦可上调AT1αRmRNA，但对AT1bRmRNA及AT2RmRNA表达无影响。研究表明，老年大鼠肾脏局部AngⅡ水平升高，两型ATR的基因表达与青年鼠相比则发生了不同改变；缬纱坦使老年大鼠肾组织AngⅡ水平升高，同时阻断了AT1R的作用，而AT2RmRNA水平未发生改变，有利于加强AT2R的作用。     

人钠/二羧基转运蛋白2融合蛋白载体的构建及其原核表达

目的：观测和鉴定人钠／二羧基转运蛋白2(hSDCT2)在大肠杆菌中的表达，并分离、纯化其蛋白产物。方法：应用：DNA重组技术，构建重组表达质粒pGEX-hSDCT2；IPTG诱导其表达。采用谷胱甘肽偶联的Sepharose4B亲和层析纯化GST-hSDCT2，经Factor Xa酶切和二次亲和层析后，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western Blotting进行鉴定。结果：成功构建hSDCT2基因融合蛋白载体，SDS-PAGE及Western Blotting显示GST-hSDCT2融合蛋白表达于原核细胞，蛋白产量约占菌体总蛋白量的25％。经酶切及二次纯化后，获得纯化的hSDCT2蛋白。结论：人钠／二羧基转运蛋白2可在大肠杆菌中稳定表达。